述在2%次氯酸鈉溶液中浸泡的時(shí)間為12min ;步驟(2)所得種子的發(fā)芽率為43.6%，污染率為9.6%。
[0037]實(shí)施例4
[0038]與實(shí)施例1相比，區(qū)別僅在于，步驟(3)所述培養(yǎng)基組成為:WPM培養(yǎng)基，TDZ0.2mg/L，吲哚乙酸lmg/L，蔗糖30mg/L，瓊脂7.5mg/L ;該步驟叢生芽誘導(dǎo)率為74%，繁殖系數(shù)為2.3。
[0039]實(shí)施例5
[0040]與實(shí)施例1相比，區(qū)別僅在于，步驟(4)所述培養(yǎng)基組成為:WPM培養(yǎng)基，TDZ0.lmg/L,吲噪乙酸0.5mg/L，赤霉素3mg/L，鹿糖30mg/L，瓊脂7.5mg/L ;該步驟單株可達(dá)2.5?3cm，繁殖系數(shù)為4.3。
[0041]根據(jù)以上實(shí)施例所得結(jié)果可知，本發(fā)明提供的方法可以成功實(shí)現(xiàn)露珠杜鵑的組培快速繁殖。
[0042]對(duì)比例I
[0043]與實(shí)施例1相比，區(qū)別僅在于:步驟⑴所述在2%次氯酸鈉溶液中浸泡的時(shí)間為6min ;步驟(2)所得種子的發(fā)芽率為45.5%，污染率為59.7%。
[0044]對(duì)比例2
[0045]與實(shí)施例1相比，區(qū)別僅在于:步驟(I)所述在2%次氯酸鈉溶液中浸泡的時(shí)間為14min ;步驟(2)所得種子的發(fā)芽率僅為28%。
[0046]對(duì)比例3
[0047]與實(shí)施例1相比，區(qū)別僅在于:步驟⑶所述培養(yǎng)基中，由ZT代替TDZ ；當(dāng)ZT濃度為0.lmg/L時(shí)，該步驟叢生芽的誘導(dǎo)率僅為8.33%，當(dāng)ZT濃度為lmg/L時(shí)，該步驟叢生芽的誘導(dǎo)率僅為25%。
[0048]對(duì)比例4
[0049]與實(shí)施例1相比，區(qū)別僅在于:步驟⑶所述培養(yǎng)基中，由濃度為0.5mg/L的2ip代替TDZ ;該步驟叢生芽的誘導(dǎo)率僅為7.7%.
[0050]對(duì)比例5
[0051]與實(shí)施例1相比，區(qū)別僅在于:降低步驟(4)所述培養(yǎng)基中赤霉素的濃度；當(dāng)赤霉素濃度為O時(shí)，該步驟所得叢生芽不伸長(zhǎng)；當(dāng)培養(yǎng)基中赤霉素濃度為lmg/L，該步驟所得叢生芽高度僅可達(dá)0.5?lcm。
[0052]對(duì)比例6
[0053]與實(shí)施例1相比，區(qū)別僅在于，步驟(5)所述基質(zhì)中，由蛭石代替草炭，該步驟所得生根率僅為37.5%，根長(zhǎng)I?1.5cm。
[0054]雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明、【具體實(shí)施方式】及試驗(yàn)，對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種露珠杜鵑組培快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)在無(wú)菌條件下，將當(dāng)年的露珠杜鵑種子在75%酒精中浸泡25?35s，用無(wú)菌水洗凈種子表面殘留的酒精，在2%次氯酸鈉溶液中浸泡8?12min，用無(wú)菌水洗凈種子表面殘留的次氯酸鈉溶液，用無(wú)菌濾紙吸干種子表面水分，備用； (2)在無(wú)菌條件下，將經(jīng)步驟(I)處理后的種子抖撒在WPM培養(yǎng)基上，在溫度24?26°C、光照時(shí)間11?13h/d、光照強(qiáng)度1950?20501x的條件下進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)，種子全部萌發(fā)至無(wú)菌苗長(zhǎng)度為2?3cm ； (3)在無(wú)菌條件下，從步驟(2)所得無(wú)菌苗上剪取I?2cm的帶芽莖段接入培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基包含以下成分:WPM培養(yǎng)基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.1?lmg/L ;在溫度24?26°C、光照時(shí)間11?13h/d、光照強(qiáng)度1950?20501x的條件下進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)，至長(zhǎng)出叢生芽； (4)在無(wú)菌條件下，取步驟(3)所得叢生芽，切割成單芽，轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基上，所述培養(yǎng)基包含以下成分:WPM培養(yǎng)基，TDZ0.1?0.2mg/L，吲哚乙酸0.1?0.5mg/L，赤霉素3mg/L ;在溫度24?26°C、光照時(shí)間11?13h/d、光照強(qiáng)度1950?20501x的條件下進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)，叢生芽增殖、伸長(zhǎng)； (5)從經(jīng)步驟(4)培養(yǎng)后的叢生芽中選出健康芽苗，將內(nèi)有芽苗的封口培養(yǎng)瓶在室內(nèi)放置2?3天后，每天打開(kāi)培養(yǎng)瓶口 I?2h并重復(fù)2?3天，將芽苗移至培養(yǎng)瓶外，將芽苗基部的培養(yǎng)基洗凈，移栽入基質(zhì)中，所述基質(zhì)由等體積的草炭與珍珠巖組成；在溫度19?21°C、濕度60?70%、光照時(shí)間11?13h/d、光照強(qiáng)度1950?20501x的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，至生根。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(I)所述在2%次氯酸鈉溶液中浸泡的時(shí)間為lOmin。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述培養(yǎng)基由以下成分組成:WPM培養(yǎng)基，蔗糖30mg/L，瓊脂7.5mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述培養(yǎng)基由以下成分組成:WPM 培養(yǎng)基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸 0.lmg/L，蔗糖 30mg/L，瓊脂 7.5mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)所述培養(yǎng)基由以下成分組成:WPM 培養(yǎng)基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸 0.lmg/L，赤霉素 3mg/L，蔗糖 30mg/L，瓊脂 7.5mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1?5任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟(2)、(3)、(4)所述培養(yǎng)基的pH值為5.4?5.6。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，步驟(5)所述基質(zhì)的pH值為5.4?5.6。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)在無(wú)菌條件下，將當(dāng)年的露珠杜鵑種子在75%酒精中浸泡30s，用無(wú)菌水洗凈種子表面殘留的酒精，在2%次氯酸鈉溶液中浸泡lOmin，用無(wú)菌水洗凈種子表面殘留的次氯酸鈉溶液，用無(wú)菌濾紙吸干種子表面水分，備用； (2)在無(wú)菌條件下，將經(jīng)步驟(I)處理后的種子抖撒在pH5.4?5.6的培養(yǎng)基上，所述培養(yǎng)基由以下成分組成:WPM培養(yǎng)基，蔗糖30mg/L，瓊脂7.5mg/L ;在溫度25°C、光照時(shí)間12h/d、光照強(qiáng)度20001x的條件下進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)，種子完全萌發(fā)至無(wú)菌苗長(zhǎng)度為2?3cm ; (3)在無(wú)菌條件下，從步驟(2)所得無(wú)菌苗上剪取長(zhǎng)I?2cm的帶芽莖段接入pH5.4?.5.6的培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基由以下成分組成:WPM培養(yǎng)基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.1mg/L，蔗糖30mg/L，瓊脂7.5mg/L ;在溫度25°C、光照時(shí)間12h/d、光照強(qiáng)度20001x的條件下進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)，至長(zhǎng)出叢生芽； (4)在無(wú)菌條件下，取步驟(3)所得叢生芽，切割成單芽，轉(zhuǎn)接到pH5.4?5.6的培養(yǎng)基上，所述培養(yǎng)基由以下成分組成:WPM培養(yǎng)基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.lmg/L，赤霉素3mg/L，蔗糖30mg/L，瓊脂7.5mg/L ;溫度25°C、光照時(shí)間12h/d、光照強(qiáng)度20001x的條件下進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)，叢生芽增殖、伸長(zhǎng)； (5)從經(jīng)步驟(4)培養(yǎng)后的叢生芽中選出健康芽苗，將內(nèi)有芽苗的封口培養(yǎng)瓶在室內(nèi)放置3天后，每天打開(kāi)培養(yǎng)瓶口 Ih并重復(fù)3天，將芽苗移至培養(yǎng)瓶外，將芽苗基部的培養(yǎng)基洗凈，移栽入PH5.4?5.6的基質(zhì)中，所述基質(zhì)由等體積的草炭與珍珠巖組成；溫度25°C、濕度60?70%、光照時(shí)間12h/d、光照強(qiáng)度20001x的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，至生根。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種露珠杜鵑組培快速繁殖方法，該方法采用組織培養(yǎng)技術(shù)，對(duì)種子播種出的無(wú)菌苗的帶芽莖段進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)，繼而長(zhǎng)成完整植物。按照本發(fā)明提供的方法進(jìn)行露珠杜鵑的組織培養(yǎng)，露珠杜鵑種子的萌發(fā)率可達(dá)45～60％，同時(shí)污染率可以控制在35％以下；在叢生芽的誘導(dǎo)階段，20左右即開(kāi)始出現(xiàn)不定芽，一個(gè)半月后，叢生芽明顯增多，誘導(dǎo)率最高可達(dá)100％；在叢生芽的繁殖和伸長(zhǎng)培養(yǎng)階段，芽苗生長(zhǎng)健壯，單株可高達(dá)3cm，繁殖系數(shù)高達(dá)4.6；在生根培養(yǎng)階段，15天左右即開(kāi)始有根長(zhǎng)出，40天后生根率可達(dá)85％以上，根長(zhǎng)可至3～4cm；可以成功實(shí)現(xiàn)露珠杜鵑的組培快速繁殖。
【IPC分類】A01H4-00
【公開(kāi)號(hào)】CN104542284
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410843970
【發(fā)明人】張啟翔, 郭穎, 羅樂(lè), 程堂仁, 潘會(huì)堂, 王佳
【申請(qǐng)人】北京林業(yè)大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2014年12月30日