一種生產(chǎn)沉香的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，具體涉及一種生產(chǎn)沉香的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 沉香（agarwood)是為瑞香科（Thymelaeaceae)植物沉香（Aquilaria agalIocha Roxb.)或白木香[Aquilaria sinensis (Lour. )Gilg.]含有黑色樹脂的木質(zhì)部。前者主產(chǎn) 印度和馬來西亞等地，我國稱其為進(jìn)口沉香，后者主產(chǎn)我國海南、廣東和廣西等省區(qū)，稱為 國產(chǎn)沉香或土沉香。沉香不僅是我國、日本、印度以及其他東南亞國家的傳統(tǒng)名貴藥材，更 是一種名貴的天然香料。沉香在中東、中國和日本至少有3000年的歷史，在印度和法國，甚 至在圣經(jīng)的舊約全書中也有沉香的記載。目前沉香仍然是世界上最昂貴的香料之一，僅新 加坡每年出口沉香的價值就超過12億美元。
[0003] 健康的沉香或白木香在正常生長情況下無法生成沉香，只有在受到外界傷害之 后，其傷口附近會逐步產(chǎn)生含有樹脂的木塊，通常要積累數(shù)年才能形成，所以自然條件下沉 香的產(chǎn)出率非常低。為此，人們經(jīng)通過科學(xué)研宄和實踐經(jīng)驗，總結(jié)出"砍傷法"、"半斷枝法"、 "鑿洞法"、"人工接菌法"和"化學(xué)法"等人工結(jié)香的方法。
[0004] 砍傷法、半斷枝法和鑿洞法雖然結(jié)香效果好，但操作麻煩，效率低下?；瘜W(xué)法因 其采用化學(xué)試劑刺激，要求樹齡在5年以上，且收獲沉香時整棵樹被砍倒，不能可持續(xù)利 用。人工接菌法因其接近天然產(chǎn)香條件，且可以在樹木的任何部位實施結(jié)香操作，對樹木 損壞小，采香后樹木還可以再進(jìn)行結(jié)香操作，因此在實踐中被廣泛應(yīng)用。目前人工接菌 法是把單株菌或多種菌株的混合液利用不同方法接種至白木香或沉香樹干中，如申請?zhí)?201210197582. 8的專利公布的將多種菌株利用瓶插法接種至白木香中制備沉香的技術(shù)方 案。雖然該人工接菌方法取得了一定的效果，且操作簡單，但其所選擇的多種菌并非最佳 組合，接入樹干中時會產(chǎn)生生存競爭，可能使部分種類的菌株死亡，影響菌株之間的協(xié)同作 用，使得沉香得率不夠高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種生產(chǎn)沉香的方法，使得該方法生產(chǎn)的沉香 能夠提升沉香油以及沉香油中倍半萜含量，提升沉香品質(zhì)。
[0006] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0007] -種生產(chǎn)沉香的方法，在沉香樹或白木香樹的樹干或枝條上鉆孔，將包裹有混合 菌種的微膠囊塞入孔中，然后封住孔洞，間隔1-2個月加入一次，處理3-24個月后，然后割 取樹干中棕褐色油狀物以及黃棕色變色木質(zhì)部，曬干后即為沉香；
[0008] 其中，所述混合菌種為絲核菌屬（Rhizoctonia sp.)、尖鐮孢霉（Fusarium oxysporum)、枝頂抱霉（Acremonium furcatum)、緊密枝頂抱霉（Acremonium strictum)、內(nèi) 生枝頂抱霉（Acremonium endophytium)和青霉屬菌（Penicillium sp.) 〇
[0009] 針對現(xiàn)有人工接菌法中菌種搭配不合理的缺陷，本發(fā)明調(diào)整混合菌種的組成， 以較優(yōu)的絲核菌屬（Rhizoctonia sp.，菌種編號為CPCC480164)、尖鐮孢霉（Fusarium oxysporum，菌種編號為 CPCC810100 或 CPCC810101)、枝頂抱霉（Acremonium furcatum，菌 種編號為CGMCC3. 5370)、緊密枝頂孢霉（Acremonium strictum，菌種編號為ACCC30554)、 內(nèi)生枝頂抱霉（Acremonium endophytium，菌種編號為CCTCCM206118)和青霉屬菌 (Penicillium sp.，菌種編號為CPCC441453)刺激白木香樹或沉香樹，依靠各菌種的協(xié)同作 用，提高沉香油以及沉香油中倍半萜含量，提升沉香品質(zhì)。上述微生物菌種均可以通過市售 方式獲得，如可購自于中國科學(xué)院微生物研宄所。
[0010] 作為優(yōu)選，所述微膠囊還包括海藻酸鈉和氯化鈣。
[0011] 更優(yōu)先地，所述微膠囊由混合菌種、海藻酸鈉和氯化鈣制得。
[0012] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述微膠囊由以下方法制得：
[0013] 將所述混合菌種培養(yǎng)后分別與海藻酸鈉溶液混合，然后緩慢滴入氯化鈣溶液，緩 慢攪拌，真空干燥得各個菌種的微膠囊，將所述各個菌株的微膠囊混合，獲得所述包裹有混 合菌種的微膠囊。
[0014] 最優(yōu)選地，所述微膠囊由以下方法制得：
[0015] 將所述混合菌種經(jīng)馬鈴薯液體培養(yǎng)基培養(yǎng)后分別與質(zhì)量百分比為3%的海藻酸鈉 溶液混合，然后緩慢滴入等體積的4. 5%氯化鈣溶液，緩慢攪拌，真空干燥得各個菌種的微 膠囊，將所述各個菌株的微膠囊混合，獲得所述包裹有混合菌種的微膠囊。
[0016] 微膠囊制備方法中作為優(yōu)選，所述混合菌種經(jīng)培養(yǎng)后的培養(yǎng)液與海藻酸鈉溶液的 體積比為1:30 ;作為優(yōu)選，所述培養(yǎng)的溫度為25-27°C、時間為2-3天。
[0017] 作為優(yōu)選，本發(fā)明所述包裹有混合菌種的微膠囊中各個菌種的微膠囊體積相同。
[0018] 作為優(yōu)選，所述處理時間為6-12個月。
[0019] 作為優(yōu)選，所述微膠囊的用量為每孔5-10g。
[0020] 此外，本發(fā)明對鉆孔數(shù)量不加限制，可以為一個，也可以為多個。
[0021] 本發(fā)明將現(xiàn)有刺激結(jié)香的混合菌種通過海藻酸鈉-氯化鈣體系包裹，然后放入沉 香或白木香樹干內(nèi)部，菌種釋放并在樹體中生長繁殖，共同刺激樹干或枝條產(chǎn)生沉香。經(jīng)過 和以往的瓶插法（申請?zhí)?01210197582. 8)對比，結(jié)果顯示，本發(fā)明所得的沉香中醇溶性浸 出物、沉香油含量以及沉香油中倍半萜含量和上述方法所得沉香均高于瓶插法所得沉香。
[0022] 同時，本發(fā)明所生產(chǎn)的沉香和野生沉香經(jīng)GC-MS分析，在揮發(fā)油成分上兩者基本 一致，含有野生沉香特征成分白木香醛、馬兜鈴烯、a -綠葉烯等倍半萜類化合物，完全滿足 市場需求和要求，且菌種微膠囊可用于大規(guī)模、標(biāo)準(zhǔn)化、商品化的生產(chǎn)，推廣方便。
【具體實施方式】
[0023] 本發(fā)明公開了一種生產(chǎn)沉香的方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改 進(jìn)工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯 而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明所述方法已經(jīng)通過較佳實施例進(jìn)行了描述， 相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動或 適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0024] 在【具體實施方式】中，本發(fā)明對生產(chǎn)的沉香隨機(jī)挑選三份樣品的醇浸出物進(jìn)行了含 量測定，同一批樣品平行試驗5次，得實驗產(chǎn)出的沉香樣品浸出物含量均高于10%，達(dá)到藥 典要求水平。沉香油含量和沉香油中倍半萜含量檢測結(jié)果顯示得到提高。檢測方法如下：
[0025] 醇溶性浸出物含量檢測：
[0026] 割取的沉香參照2010年《中華人民共和國藥典》所載醇溶性浸出物測定法項下的 熱浸法制取沉香油，并對所得沉香樣品的醇溶性浸出物含量進(jìn)行了測定。精密稱取沉香藥 材粉末2. 0g，置250ml的錐形瓶中，精密加入無水乙醇50ml，塞緊，稱定重量，靜置1小時 后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1小時。放冷，取下圓底燒瓶，塞緊，稱定重 量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，即得沉香油。精密量取濾液25ml，置已干 燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105°C干燥3小時，移至干燥器中，冷卻30分鐘， 迅速精密稱定重量，以干燥品計算藥材中醇溶性浸出物的含量（％)。
[0027] 沉香油含量和沉香油中倍半萜含量檢測：
[0028] 精確稱取樣品10. 0g