，粉碎后分別加入100mL乙醚于室溫下浸提三次，回收乙醚后 即得揮發(fā)油。
[0029] 將樣品的揮發(fā)油進(jìn)行GC-MS分析。儀器為美國(guó)惠普公司的HP6890/5973GC/MS聯(lián) 用儀。色譜柱為 HP-INno-wax Polyethylene Glycol (30.0 mX 320mX 0.25m)彈性石英毛細(xì) 管柱。程序升溫：柱溫60°C，保留2min，以4°C /min升溫至230°C，保持20min，氣化室溫度 250°〇。載氣為高純他(99.999%);柱前壓5.08?8丨，載氣流量2.01111/111111 ;進(jìn)樣量1^1(丙 酮溶液）；分流比10 :1。
[0030] 離子源為EI源；離子源溫度230 °C ;四級(jí)桿溫度150°C ;電子能量70eV;發(fā)射電 流34. 6A ;倍增器電壓1412V ;接口溫度280°C ;質(zhì)量掃描范圍為10_550amu。分析結(jié)果通過(guò) HPMSD化學(xué)工作，結(jié)合Nist2005標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫(kù)和WILE275質(zhì)譜圖庫(kù)進(jìn)行鑒定，采用峰面積歸 一化法計(jì)算相對(duì)含量。
[0031] 以下就本發(fā)明所提供的一種生產(chǎn)沉香的方法做進(jìn)一步說(shuō)明。
[0032] 實(shí)施例1 :制備本發(fā)明所述包裹混合菌種的微膠囊
[0033] 將絲核菌 Rhizoctonia sp. (CPCC480164)、尖鏡抱霉 Fusarium oxysporum(CPCC810100)、緊密枝頂抱霉 Acremonium strictum(ACCC30554)、內(nèi)生枝頂抱霉 Acremonium endophytium(CCTCCM206118)、青霉屬菌 Penicillium sp. (CPCC441453)各菌 種分別接種于馬鈴薯液體培養(yǎng)基中，25°C搖瓶培養(yǎng)至菌體生長(zhǎng)旺盛，獲得培養(yǎng)液。將枝頂孢 霉Acremonium furcatum(CGMCC3. 5370)接種于馬鈴薯液體培養(yǎng)基中，27°C搖瓶培養(yǎng)至菌體 生長(zhǎng)旺盛，獲得培養(yǎng)液。
[0034] 將上述菌株的培養(yǎng)液分別與3%的海藻酸鈉（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）溶液按照體積比為1:30 混合，然后緩慢滴入等體積的4. 5 %的氯化鈣溶液，緩慢攪拌，真空干燥得各個(gè)菌種的微膠 囊，將各個(gè)菌種的微膠囊等體積混合，裝入膠囊，獲得包裹混合菌種的微膠囊。
[0035] 實(shí)施例2 :制備本發(fā)明所述包裹混合菌種的微膠囊
[0036] 將絲核菌 Rhizoctonia sp. (CPCC480164)、尖鏡抱霉 Fusarium oxysporum(CPCC810101)、緊密枝頂抱霉 Acremonium strictum(ACCC30554)、內(nèi)生枝頂抱霉 Acremonium endophytium(CCTCCM206118)、青霉屬菌 Penicillium sp. (CPCC441453)各菌 種分別接種于馬鈴薯液體培養(yǎng)基中，25°C搖瓶培養(yǎng)至菌體生長(zhǎng)旺盛，獲得培養(yǎng)液。將枝頂孢 霉Acremonium furcatum(CGMCC3. 5370)接種于馬鈴薯液體培養(yǎng)基中，27°C搖瓶培養(yǎng)至菌體 生長(zhǎng)旺盛，獲得培養(yǎng)液。
[0037] 將上述菌株的培養(yǎng)液分別與3%的海藻酸鈉（質(zhì)量百分?jǐn)?shù)）溶液按照體積比為 1:30混合，然后緩慢滴入等體積的4. 5%的氯化鈣溶液，緩慢攪拌，真空干燥得各個(gè)菌種的 微膠囊，將各個(gè)菌種的微膠囊等體積混合，裝入膠囊，獲得包裹混合菌種的微膠囊。
[0038] 實(shí)施例3 :人工接菌法生產(chǎn)沉香以及試驗(yàn)對(duì)比
[0039] 1、本發(fā)明方法
[0040] 選取3年樹齡的白木香樹，在距離樹木頂端5cm處，垂直樹干使用普通電鉆，鉆頭 直徑為0. 6cm，鉆5個(gè)深4cm的孔，每個(gè)孔中塞入5g實(shí)施例1制備的微膠囊，然用橡膠塞封 住孔洞。6個(gè)月后割取創(chuàng)傷周圍形成的棕褐色油狀物及黃褐色的變色木質(zhì)部，經(jīng)曬干后得到 沉香。
[0041] 2、對(duì)比方法
[0042] 選取3年樹齡的白木香樹，在距離樹木頂端5cm處，垂直樹干使用普通電鉆，鉆頭 直徑為0. 6cm，鉆5個(gè)深4cm的孔，按照專利201210197582. 8【具體實(shí)施方式】記載的方法，將 混合菌種通過(guò)瓶插法注入孔中，然用橡膠塞封住孔洞。6個(gè)月后，割取創(chuàng)傷周圍形成的棕褐 色油狀物及黃褐色的變色木質(zhì)部，經(jīng)曬干后得到沉香。
[0043] 3、試驗(yàn)檢測(cè)
[0044] 對(duì)上述兩種方法制備的沉香以及野生沉香進(jìn)行醇溶性浸出物含量、沉香油含量和 沉香油中倍半萜含量檢測(cè)，見表1。野生沉香采自海南屯昌縣。
[0045] 表1沉香質(zhì)量檢測(cè)
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種生產(chǎn)沉香的方法，其特征在于，在沉香樹或白木香樹的樹干或枝條上鉆孔，將包 裹有混合菌種的微膠囊塞入孔中，然后封住孔洞，間隔1-2個(gè)月加入一次，處理3-24個(gè)月 后，然后割取樹干中棕褐色油狀物以及黃棕色變色木質(zhì)部，曬干后即為沉香； 其中，所述混合菌種為絲核菌屬（Rhizoctoniasp.)、尖鐮孢霉（Fusarium oxysporum)、枝頂抱霉（Acremoniumfurcatum)、緊密枝頂抱霉（Acremoniumstrictum)、內(nèi) 生枝頂抱霉（Acremoniumendophytium)和青霉屬菌（Penicilliumsp.) 〇
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述微膠囊還包括海藻酸鈉和氯化鈣。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述方法，其特征在于，所述微膠囊由混合菌種、海藻酸鈉和氯 化鈣制得。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述方法，其特征在于，所述微膠囊由以下方法制得： 將所述混合菌種培養(yǎng)后分別與海藻酸鈉溶液混合，然后緩慢滴入氯化鈣溶液，緩慢攪 拌，真空干燥得各個(gè)菌種的微膠囊，將所述各個(gè)菌株的微膠囊混合，獲得所述包裹有混合菌 種的微膠囊。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述方法，其特征在于，所述微膠囊由以下方法制得： 將所述混合菌種經(jīng)馬鈴薯液體培養(yǎng)基培養(yǎng)后分別與質(zhì)量百分比為3%的海藻酸鈉溶液 混合，然后緩慢滴入等體積的4. 5%氯化鈣溶液，緩慢攪拌，真空干燥得各個(gè)菌種的微膠囊， 將所述各個(gè)菌株的微膠囊混合，獲得所述包裹有混合菌種的微膠囊。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述方法，其特征在于，所述混合菌種經(jīng)培養(yǎng)后的培養(yǎng)液與海藻酸 鈉溶液的體積比為1:30。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1、4或5所述方法，其特征在于，所述包裹有混合菌種的微膠囊中各個(gè) 菌種的微膠囊體積相同。
8. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述方法，其特征在于，所述培養(yǎng)的溫度為25-27°C、時(shí)間為2-3 天。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述處理時(shí)間為6-12個(gè)月。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述微膠囊的用量為每孔5-10g。
【專利摘要】本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，公開了一種生產(chǎn)沉香的方法。所述方法在沉香樹或白木香樹的樹干或枝條上鉆孔，將包裹有絲核菌屬、尖鐮孢霉、枝頂孢霉、緊密枝頂孢霉、內(nèi)生枝頂孢霉和青霉屬菌的混合菌種的微膠囊塞入孔中，然后封住孔洞，間隔1-2個(gè)月加入一次，處理3-24個(gè)月后，然后割取樹干中棕褐色油狀物以及黃棕色變色木質(zhì)部，曬干后即為沉香。本發(fā)明將現(xiàn)有刺激結(jié)香的混合菌種通過(guò)海藻酸鈉-氯化鈣體系包裹并放置于沉香樹或白木香樹中，菌種釋放并在樹體中生長(zhǎng)繁殖，共同刺激樹干或枝條產(chǎn)生沉香，所得沉香的醇溶性浸出物、沉香油含量以及沉香油中倍半萜含量均高于現(xiàn)有方法。
【IPC分類】A01G7-06
【公開號(hào)】CN104770230
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510170409
【發(fā)明人】王軍, 戴好富, 梅文莉, 王輝, 李薇
【申請(qǐng)人】中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所
【公開日】2015年7月15日
【申請(qǐng)日】2015年4月13日