一種用培養(yǎng)箱高效培育西方蜜蜂蜂王的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于蜜蜂科學技術領域，具體涉及一種用培養(yǎng)箱高效培育西方蜜蜂蜂王的方法。
【背景技術】
[0002]由于蜜蜂具有許多獨特的特性而被廣泛應用于發(fā)育與生殖生物學、表觀遺傳學、學習與記憶、認知、導航和社會行為等諸多領域的科學研宄中，隨著西方蜜蜂全基因組測序的完成，越來越多的有識之士認為蜜蜂有望成為一種新興的模式生物。
[0003]成功的實驗室人工飼養(yǎng)蜜蜂幼蟲技術體系是蜜蜂作為模式生物研宄的基礎和保證。蜜蜂是典型的真社會性昆蟲，具有明確而細致的勞動分工，群內有專職的哺育蜂飼喂幼蟲，在自然條件下，進行過人工操作的幼蟲往往會被蜜蜂遺棄，從而造成人為干預下對蜜蜂幼蟲研宄的困難。人工飼養(yǎng)蜜蜂幼蟲技術在實驗室內培養(yǎng)箱中進行，它可人為控制幼蟲食物成分，排除哺育蜂的影響，進而許多研宄都可得到直接明確的結果。
[0004]目前，室內人工飼養(yǎng)蜜蜂幼蟲技術已被廣泛應用于蜜蜂幼蟲的生長發(fā)育、級型分化、營養(yǎng)、病理、藥理及生態(tài)風險評估等方面的研宄。盡管用培養(yǎng)箱培育的蜜蜂幼蟲可發(fā)育為工蜂或蜂王，但現(xiàn)有的研宄表明由室內人工飼養(yǎng)幼蟲發(fā)育而來的蜜蜂絕大部分或全部都為工蜂。經過多年研宄，我們成功研發(fā)出用培養(yǎng)箱高效培育西方蜜蜂蜂王的技術，用本發(fā)明技術培育的蜜蜂幼蟲羽化后的成蜂全為蜂王，且羽化率可高達75%以上(與目前國外報道的培養(yǎng)箱培育的工蜂羽化率水平相當)，至今未發(fā)現(xiàn)有與本發(fā)明相同或相似的報道。
[0005]本發(fā)明的技術，不僅有助于研宄蜜蜂發(fā)育生物學中的重大科學問題(如雌性蜜蜂級型分化的分子機理)，而且在蜜蜂遺傳育種工作中也具有極大的應用價值。

【發(fā)明內容】

[0006]本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術的不足，建立一種用培養(yǎng)箱高效培育西方蜜蜂蜂王的方法，在蜜蜂發(fā)育生物學研宄和蜜蜂遺傳育種工作中具有重要的理論和實踐意義。本發(fā)明為實驗室內高效培育西方蜜蜂蜂王方法的首創(chuàng)。
[0007]本發(fā)明采用的技術方案如下:
[0008]一種用培養(yǎng)箱高效培育西方蜜蜂蜂王的方法，包括如下步驟:
[0009]步驟(I)，蜜蜂幼蟲食物的制備:
[0010]用超純水配制含葡萄糖、果糖和酵母提取物的混合溶液，混合溶液中葡萄糖的質量濃度為10% -24%，果糖的質量濃度為10% -24%，酵母提取物的質量濃度為1% -5%，然后將混合溶液與蜂王漿以1:1的質量比混合均勻后，加入50-100mg/L保幼激素，混勻，制得蜜蜂幼蟲食物；
[0011]步驟(2)，蜜蜂幼蟲的飼養(yǎng):
[0012]通過隔王處理得到日齡一致的西方蜜蜂(Apis mellifera)幼蟲，提出巢脾，用移蟲針將I?2日齡蜜蜂幼蟲轉移到細胞培養(yǎng)板內，每孔一只，將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱中溫度34-36°C，相對濕度70%-90%;采用步驟(I)制得的蜜蜂幼蟲食物飼喂幼蟲，每天飼喂1-2次，每次100-250 μ I蜜蜂幼蟲食物，并觀察、記錄幼蟲生長情況；當培養(yǎng)板中出現(xiàn)尿酸結晶時，將幼蟲(預蛹的健康蟲體)轉移至新培養(yǎng)板，此后幼蟲不再進行飼喂，注意觀測并記錄蟲體變化，直至羽化，得到羽化的蜜蜂個體，即為蜂王。
[0013]進一步，優(yōu)選的是步驟(I)所述的超純水為Mill1-Q超純水。
[0014]上述技術方案中步驟⑴所述的保幼激素為JH I或JH III。
[0015]進一步，優(yōu)選的是所述的用培養(yǎng)箱高效培育西方蜜蜂蜂王的方法，包括如下步驟:
[0016]步驟(I)，蜜蜂幼蟲食物的制備:
[0017]用Mill1-Q超純水配制含葡萄糖、果糖和酵母提取物的混合溶液，混合溶液中葡萄糖的質量濃度為10%，果糖的質量濃度為10%，酵母提取物的質量濃度為1%，然后將混合溶液與蜂王漿以1:1的質量比混合均勻后，加入80mg/L JH I，混勻，制得蜜蜂幼蟲食物；
[0018]步驟⑵，蜜蜂幼蟲的飼養(yǎng):
[0019]通過隔王處理得到日齡一致的西方蜜蜂幼蟲，提出巢脾，用移蟲針將I?2日齡蜜蜂幼蟲轉移到細胞培養(yǎng)板內，每孔一只，將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱中溫度34 °C，相對濕度70%;采用步驟(I)制得的蜜蜂幼蟲食物飼喂幼蟲，每天飼喂I次，每次250 μ I蜜蜂幼蟲食物，并觀察、記錄幼蟲生長情況；當培養(yǎng)板中出現(xiàn)尿酸結晶時，將幼蟲(預蛹的健康蟲體)轉移至新培養(yǎng)板，此后幼蟲不再進行飼喂，注意觀測并記錄蟲體變化，直至羽化，得到羽化的蜜蜂個體，即為蜂王。
[0020]進一步，優(yōu)選的是所述的用培養(yǎng)箱高效培育西方蜜蜂蜂王的方法，包括如下步驟:
[0021]步驟(I)，蜜蜂幼蟲食物的制備:
[0022]用Mill1-Q超純水配制含葡萄糖、果糖和酵母提取物的混合溶液，混合溶液中葡萄糖的質量濃度為24%，果糖的質量濃度為24%，酵母提取物的質量濃度為5%，然后將混合溶液與蜂王漿以1:1的質量比混合均勻后，加入65mg/L JH I，混勻，制得蜜蜂幼蟲食物；
[0023]步驟(2)，蜜蜂幼蟲的飼養(yǎng):
[0024]通過隔王處理得到日齡一致的西方蜜蜂幼蟲，提出巢脾，用移蟲針將I?2日齡蜜蜂幼蟲轉移到細胞培養(yǎng)板內，每孔一只，將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱中溫度36 °C，相對濕度90%;采用步驟(I)制得的蜜蜂幼蟲食物飼喂幼蟲，每天飼喂2次，每次100μ I蜜蜂幼蟲食物，并觀察、記錄幼蟲生長情況；當培養(yǎng)板中出現(xiàn)尿酸結晶時，將幼蟲(預蛹的健康蟲體)轉移至新培養(yǎng)板，此后幼蟲不再進行飼喂，注意觀測并記錄蟲體變化，直至羽化，得到羽化的蜜蜂個體，即為蜂王。
[0025]進一步，優(yōu)選的是所述的用培養(yǎng)箱高效培育西方蜜蜂蜂王的方法，包括如下步驟:
[0026]步驟(I)，蜜蜂幼蟲食物的制備:
[0027]用Mill1-Q超純水配制含葡萄糖、果糖和酵母提取物的混合溶液，混合溶液中葡萄糖的質量濃度為15%，果糖的質量濃度為18%，酵母提取物的質量濃度為2.5%，然后將混合溶液與蜂王漿以1:1的質量比混合均勻后，加入100mg/L JH III，混勻，制得蜜蜂幼蟲食物；
[0028]步驟(2)，蜜蜂幼蟲的飼養(yǎng):
[0029]通過隔王處理得到日齡一致的西方蜜蜂幼蟲，提出巢脾，用移蟲針將1.5?2日齡蜜蜂幼蟲轉移到細胞培養(yǎng)板內，每孔一只，將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱中溫度35°C，相對濕度80% ;采用步驟(I)制得的蜜蜂幼蟲食物飼喂幼蟲，每天飼喂I次，每次200 μ I蜜蜂幼蟲食物，并觀察、記錄幼蟲生長情況；當培養(yǎng)板中出現(xiàn)尿酸結晶時，將幼蟲(預蛹的健康蟲體)轉移至新培養(yǎng)板，此后幼蟲不再進行飼喂，注意觀測并記錄蟲體變化，直至羽化，得到羽化的蜜蜂個體，即為蜂王。
[0030]進一步，優(yōu)選的是所述的用培養(yǎng)箱高效培育西方蜜蜂蜂王的方法，包括如下步驟:
[0031]步驟(I)，蜜蜂幼蟲食物的制備:
[0032]用超純水配制含葡萄糖、果糖和酵母提取物的混合溶液，混合溶液中葡萄糖的質量濃度為24%，果糖的質量濃度為24%，酵母提取物的質量濃度為3%，然后將混合溶液與蜂王漿以1:1的質量比混合均勻后，加入50mg/L JH III，混勻，制得蜜蜂幼蟲食物；
[0033]步驟(2)，蜜蜂幼蟲的飼養(yǎng):
[0034]通過隔王處理得到日齡一致的西方蜜蜂幼蟲，提出巢脾，用移蟲針將I?1.5日齡蜜蜂幼蟲轉移到細胞培養(yǎng)板內，每孔一只，將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)箱中溫度35°C，相對濕度90% ;采用步驟(I)制得的蜜蜂幼