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種。植物部分應當 理解為表示植物的地上和地下的所有部分和器官,例如枝條、葉、花和根,其實例可以描述 為葉、針葉、桿、莖、花、子實體、果實、種子、根、塊狀莖和根狀莖。植物部分還包括收獲的材 料以及營養(yǎng)和生殖繁殖材料,例如插條、塊狀莖、根狀莖、蘗枝和種子。
[0103] 用上述組合物處理植物和植物部分可以直接進行,或者通過使所述組合物作用于 它們的周圍環(huán)境、棲生地或存儲空間進行,例如通過浸泡、噴灑、蒸發(fā)、噴霧、散布、涂抹、注 射。在將組合物施用于種子的情況下,所述組合物可以作為一種或多種包衣施用于所述種 子,然后將所述種子通過本領域已知的方法利用一種或多種包衣進行種植。
[0104] 用途
[0105] 上述組合物、培養(yǎng)基、上清液、代謝物和農(nóng)藥化合物可用作為農(nóng)藥。具體而言,上述 組合物、培養(yǎng)基、上清液、代謝物和農(nóng)藥化合物可單獨使用或與一種或多種上述農(nóng)藥物質(zhì)組 合使用,用作殺昆蟲劑和殺線蟲劑。
[0106] 特別地,可以利用上述方法控制的線蟲包括但不限于寄生線蟲,如根結(jié)、胞囊 和病變的線蟲,包括但不限于根結(jié)線蟲、矮化線蟲(Tylenchorhynchussp.)、紐帶線蟲 (Hoplolaimussp.)、短體線蟲(Pratylenchussp.)、抱囊線蟲(Heteroderasp.)、抱囊線 蟲(Globoderasp)、毛刺線蟲(Trichodorussp)、擬毛刺線蟲(Paratrichodorussp)、劍 線蟲(Xiphinemasp)和輪刺線蟲(Criconemasp);尤其是南方根結(jié)線蟲(Meloidogyne incognita)以及馬鈴薯黃金線蟲(Globoderarostochiensis)和馬鈴薯胞囊線蟲 (globoderapailida)、大豆胞囊線蟲(Heteroderaglycines)、甜菜胞囊線蟲(Heterodera schachtii);和燕麥胞囊線蟲(Heteroderaavenae)(谷胞囊線蟲)。
[0107] 通過本發(fā)明方法控制的植物致病性昆蟲包括但不限于以下目的昆蟲:(a)鱗翅 目,如卷蛾(Aclerisspp.)、茶姬卷葉蛾(Adoxophyesspp.)、透翅蛾(Aegeriaspp.)、 地老虎(Agrotisspp.)、棉樹葉蟲(Alabamaargillaceae)、Amyloisspp?、黎豆夜蛾 (Anticarsiagemmatalis)、卷葉蛾(Archipsspp.)、卷蛾(Argyrotaeniaspp.)、夜蛾 (Autographaspp.)、玉米措夜蛾(Busseolafusca)、粉斑螟蛾(Cadracautella)、桃小食 心蟲(Carposinanipponensis)、7義稻螟蟲(Chilospp.)、色卷蛾(Choristoneuraspp.)、 葡萄果蠢蛾(Clysiaambiguella)、野螟蛾(Cnaphalocrocisspp.)、Cnephasiaspp.、Cochylisspp?、落葉松鞘蛾(Coleophoraspp.)、大菜螟(Crocidolomiabinotalis)、蘋 果異形小卷蛾(Cryptophlebialeucotreta)、蠢蛾(Cydiaspp.)、庶螟(Diatraeaspp.)、 蘇丹棉鈴蟲(Diparopsiscastanea)、金剛鉆(Eariasspp.)、粉斑螟(Ephestiaspp.)、卷 葉蛾(Eucosmaspp.)、環(huán)針單紋蛾(Eupoeciliaambiguella)、毒蛾(Euproctisspp.)、夜 蛾(Euxoaspp.)、食心蟲(Grapholitaspp.)、Hedyanubiferana、棉花實夜蛾(Heliothis spp.)、菜螟(Hellulaundalis)、美國白蛾(Hyphantriacunea)、番前蠢蛾(Keiferia lycopersicella)、旋紋潛葉蛾(Leucopterascitella)、細蛾(Lithocollethisspp.)、 葡萄花翅小卷蛾(Lobesiabotrana)、毒蛾(Lymantriaspp.)、潛葉蛾(Lyonetiaspp.)、 天幕毛蟲(Malacosomaspp.)、甘藍夜蛾(Mamestrabrassicae)、煙草天蛾(Manduca sexta)、尺蛾(Operophteraspp.)、歐洲玉米螟(Ostrinianubilalis)、銀杏超小卷 葉蛾(Pammenespp.)、卷葉蛾(Pandemisspp.)、冬夜蛾(Panolisflammea)、棉紅鈴 蟲(Pectinophoragossypiella)、馬鈴薯塊莖蛾(Phthorimaeaoperculella)、菜粉蝶 (Pierisrapae)、馬醉木(Pierisspp.)、小菜蛾(Plutellaxylostella)、巢蛾(Prays spp.)、白禾螟(Scirpophagaspp.)、紫螟(Sesamiaspp.)、卷葉蛾(Sparganothisspp.)、 夜蛾(Spodopteraspp.)、透翅蛾(Synanthedonspp.)、異舟蛾(Thaumetopoeaspp.)、 Tortrixspp?、粉紋夜蛾(Trichoplusiani)和巢蛾(Yponomeutaspp.) ;(b)鞘翅目, 如叩甲(Agriotesspp.)、花象(Anthonomusspp.)、谷類蟲牙蟲(Atomarialinearis)、 凹腔跳甲(Chaetocnematibialis)、球莖象鼻蟲(Cosmopolitesspp.)、麻櫟果實象 鼻蟲(Curculiospp.)、皮蠢(Dermestesspp.)、葉甲(Diabroticaspp.)、食植瓢蟲 (Epilachnaspp.)、Eremnusspp?、科羅拉多金花蟲(Leptinotarsadecemlineata)、象 甲(Lissorhoptrusspp.)、魚§ 角金龜(Melolonthaspp.)、谷盜(Orycaephilusspp.)、 葡萄黑耳卩彖鼻(Otiorhynchusspp.)、Phlyctinusspp?、麗金龜(Popilliaspp.)、 跳甲(Psylliodesspp.)、谷蠢(Rhizoperthaspp-)、金龜子科(Scarabeidae)、米象 (Sitophilusspp.)、麥蛾(Sitotrogaspp.)、擬步蟲(Tenebriospp.)、面象蟲(Tribolium spp.)和褐擬谷盜(Trogodermaspp.) ; (c)直翅目,如蜚蠊(Blattaspp.)、姬蠊 (Blattellaspp.)、峻蛄(Gryllotalpaspp.)、馬德拉蜚臟(Leucophaeamaderae)、飛蟲皇 (Locustaspp.)、大臟(Periplanetaspp.)和沙漠幢(Schistocercaspp.) ;(d)等翅目, 如堆沙白蟻(Reticulitermesspp.) ;(e)卩齒蟲目、如書虱(Liposcelisspp.) ;(f)虱目, 如吸血虱(Haematopinusspp.)、顎虱(Linognathusspp.)、體虱(Pediculusspp.)、癭 綿蟲牙(Pemphigusspp.)和根瘤頓(Phylloxeraspp.) ;(g)食毛目,如叮咬虱(Damalinea spp.)和卩齒毛虱(Trichodectesspp.) ;(h)縷翅目,如薊馬(Frankliniellaspp.)、薊 馬(Hercinotnripsspp.)、帶薊馬(Taeniothripsspp.)、南黃薊馬(Thripspalmi)、煙 薊馬(Thripstabaci)和非洲橘硬薊馬(Scirtothripsaurantii) ;(i)異翅亞目,如臭 蟲(Cimexspp.)、可可瘤盲疇(Distantiellatheobroma)、棉紅疇(Dysdercusspp.)、 Euchistusspp.、扁盾蝽(Eurygasterspp.)、稻緣椿(Leptocorisaspp.)、蛛緣蝽 (Nezaraspp.)、皮疇(Piesmaspp.)、維疇(Rhodniusspp.)、可可褐盲疇(Sahlbergella singularis)、黑椿(Scotinopharaspp.)和錐蝽(Tniatomaspp.) ;(j)同翅目,如絲絨 粉虱(Aleurothrixusfloccosus)、菜粉虱(Aleyrodesbrassicae)、盾蟻(Aonidiella spp.)、蟲牙蟲科(Aphididae)、蟲牙蟲(Aphisspp.)、圓蟻(Aspidiotusspp.)、煙粉虱(Bemisia tabaci)、錯蟻(Ceroplasterspp.)、黑褐圓盾蟻(Chrysomphalusaonidium)、網(wǎng)軒草葉圓 蟻(Chrysomphalusdictyospermi)、扁堅介殼蟲(Coccushesperidum)、葉蟲單(Empoasca spp.)、綿蟲牙(Eriosomalarigerum)、葉蟲單(Erythroneuraspp.)、Gascardiaspp?、灰 飛虱(Laodelphaxspp.)、介殼蟲(Lecaniumcorni)、蝴盾蟻(Lepidosaphesspp.)、長 管蟲牙(Macrosiphusspp.)、頓蟲(Myzusspp.)、黑尾葉4單(Nephotettixspp.)、褐飛虱 (Nilaparvataspp.)、Paratoriaspp?、癭綿蟲牙(Pemphigusspp.)、動球菌(Planococcus spp.)、白盾蟻(Pseudaulacaspisspp.)、粉蟻(Pseudococcusspp.)、梨木虱(Psylla spp.)、Pulvinariaaethiopica、圓蟻(Quadraspidiotusspp.)、管蟲牙(Rhopalosiphum spp.)、硬介殼蟲(Saissetiaspp.)、帶葉4單(Scaphoideusspp.)、二叉頓(Schizaphis spp.)、蟲牙(Sitobionspp.)、溫室白粉虱(Trialeurodesvaporariorum)、非洲木虱(Trioza erytreae)和桔矢尖蟻(Unaspiscitri) ;(k)膜翅目,如切葉蟻(Acromyrmex)、切葉蟻 (Attaspp.)、麥莖蜂(Cephusspp.)、松葉蜂(Diprionspp.)、松葉蜂科(Diprionidae)、 Gilpiniapolytoma、李實蜂(Hoplocampaspp.)、Lasiusspp.、小家蟻(Monomorium pharaonis)、新松葉蜂(Neodiprionspp.)、紅火蟻(Solenopsisspp.)和胡蜂(Vespa spp.) ; (1)雙翅目,如伊蚊(Aedesspp.)、高粱芒繩(Antherigonasoccata)、全北毛 蚊(Bibiohortulanus)、紅頭剛繩(Calliphoraerythrocephala)、錯實繩(Ceratitis spp.)、麗繩(Chrysomyiaspp.)、庫蚊(Culexspp.)、黃繩(Cuterebraspp.)、寡毛實 繩(Dacusspp.)、黑腹果繩(Drosophilamelanogaster)、廁繩(Fanniaspp.)、胃繩 (Gastrophilusspp.)、舌繩(Glossinaspp.)、牛繩(Hypodermaspp.)、Hyppoboscaspp.、 斑潛繩(Liriomyzaspp.)、綠繩(Luciliaspp.)、根潛繩(Melanagromyzaspp.)、家繩 (Muscaspp.)、牛蛇(Oestrusspp.)、癭蚊(Orseoliaspp.)、黑麥桿繩(Oscinellafrit)、 甜菜潛葉繩(Pegomyiahyoscyami)、草種繩(Phorbiaspp.)、蘋果實繩(Rhagoletis pomonella)、燕蟲內(nèi)(Sciaraspp.)、螫繩(Stomoxysspp.)、蟲亡(Tabanusspp.)、Tannia spp.和大蚊(Tipulaspp.) ; (m)蚤目,如角葉蚤(Ceratophy1lusspp.)和印鼠客蚤 (Xenopsyllacheopis);以及(n)縷尾目,如衣魚(Lepismasaccharina)。本發(fā)明的 活性成分還可以用于防治含油種子作物如油菜、芥菜籽及其雜交種以及稻和玉米中的 十字花科跳甲(黃條跳甲(Phyllotretaspp.))、根蛆(Deliaspp.)、卷心菜象鼻蟲 (seedpodweevil)(Ceutorhynchusspp.)和頓蟲。在一具體實施方案中,所述昆蟲可以 是夜蛾(Spodoptera)的成員,更特別是甜菜夜蛾、桃頓(Myzuspersicae)、小菜蛾或椿象 (Euschistussp.)〇
[0108] 本文提供了有效農(nóng)藥防治量的含有農(nóng)藥活性的代謝物或色桿菌屬產(chǎn)生的分離的 化合物的上清液、濾液或提取物的施用,或上述物質(zhì)的組合的施用。以有效防治有害生物的 量或殺蟲量單獨施用菌株、上清液、濾液、提取物、代謝物和/或化合物,或與另一農(nóng)藥物質(zhì) 聯(lián)合施用。有效量被定義為足以調(diào)節(jié)有害生物侵害的單獨的或與另一農(nóng)藥物質(zhì)聯(lián)合的微生 物細胞、上清液、濾液或提取物、代謝物和/或化合物的量。有效率可受到存在的有害生物 物種、有害生物生長階段、有害生物群聚密度和環(huán)境因素(如每天和每季的氣溫、風速、雨、 時間)所影響。可通過實驗室或現(xiàn)場測試來測定具體實例中的落入有效范圍的量。
[0109] 實施例
[0110] 在以下的非限制性實施例中進一步示例上文所述的組合物和方法。所述實施例對 于本文所述的材料、條件、重量比、工藝參數(shù)等僅示例各種實施方案,并不限制所要求保護 的發(fā)明。
[0111] 實施例1 :提取源自Chromobacteriumsubstugae的化合物
[0112] 下列操作用于純化從Chromobacteriumsubstugae培養(yǎng)基中提取的化合物:
[0113] 使用AmberliteXAD-7樹脂(Asolkar等人,2006),通過在室溫及225rpm下將 細胞懸浮液與樹脂振搖2小時,從而提取來自在L-培養(yǎng)液中的10-L的Chromobacterium substugae發(fā)酵液的培養(yǎng)液。通過紗布過濾收集樹脂和細胞群,使用去離子水洗滌以去除 鹽。然后在丙酮/甲醇(50/50)中浸泡樹脂、細胞群和紗布,持續(xù)2小時,然后濾除丙酮/甲 醇,使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空干燥,得到粗提取物。然后使用SephadexLH20排阻色譜法將粗 提取物分級(CH2C12/CH30H;50/50),從而得到7個流分(圖1)。然后將這些流分用旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)儀濃縮至干燥,然后使用粉紋夜蛾或甜菜夜蛾的飼喂測定來篩選所得干燥殘留物的生 物活性。然后使活性流分進行反相HPLC(SpectraSystemP4000(ThermoScientific)以 得到純化合物,然后在上述生物測定中篩選以找到/確定活性化合物。為了確認該化合物 的鑒別,記錄其它波譜數(shù)據(jù)如LC/MS和NMR。
[0114] chromamideA(l)和化合物B分別分離自流分1和2,而紫色桿菌素(2)及脫氧紫 色桿菌素分離自流分5,所有物質(zhì)均獲自S印hadexLH20色譜法。這些化合物的結(jié)構(gòu)示于 圖7。
[0115] 化合物的純化
[0116] 通過使用HPLCC-18 柱(Phenomenex,Luna10uC18(2) 100A,250x10)以及水: 乙腈梯度溶劑系統(tǒng)(0-10分鐘;80-75%CH3CN水溶液;10-45分鐘;75-60%CH3CN水溶液; 45-55 分鐘;60-50 %CH3CN水溶液;55-65 分鐘;50-100 %CH3CN水溶液;65-70 分鐘;100 % 〇1仰;55-70分鐘;0-80%〇1仰水溶液),在2.5毫升/分鐘的流速下和21011111的紫外線 檢測下,進行chromam
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