稻植物暴露于Fad2或FatB多肽的拮抗劑。
[0086] 另一方面，本發(fā)明提供了一種獲得遺傳修飾的水稻植物的方法，所述水稻植物可 用于產(chǎn)生與未修飾的糙米種子相比貯存期延長(zhǎng)的糙米種子，所述方法包括對(duì)所述植物進(jìn)行 遺傳操作，由此與產(chǎn)生未修飾的糙米種子的相應(yīng)植物相比，F(xiàn)ad2和/或FatB多肽的活性和 /或產(chǎn)生水平在所述水稻種子中降低。
[0087] 優(yōu)選地，F(xiàn)ad2和/或FatB多肽的活性和/或產(chǎn)生水平僅在所述植物種子中降低。
[0088] 在一個(gè)實(shí)施方案中，F(xiàn)ad2多肽的活性和/或產(chǎn)生水平降低。
[0089] 在再一個(gè)實(shí)施方案中，所述轉(zhuǎn)基因植物包含本發(fā)明的多核苷酸或載體。
[0090]另一方面，本發(fā)明提供了使用本發(fā)明的方法產(chǎn)生的遺傳修飾的水稻植物或其后 代。
[0091] 另一方面，本發(fā)明提供了一種選擇水稻植物的方法，該植物可用于產(chǎn)生本發(fā)明的 米糠油、米糠和/或水稻種子，所述方法包括：
[0092] i)篩選誘變的水稻種子或者水稻植物群，及
[0093] ii)選擇能產(chǎn)生本發(fā)明的米糠油、米糠和/或水稻種子的種子或植物。
[0094] 在一個(gè)實(shí)施方案中，步驟i)包括分析誘變的種子和/或植物的具有Fad2或FatB 活性的多肽。
[0095] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，步驟i)包括分析誘變的種子和/或植物的Fad2或FatB基 因的序列和/或表達(dá)水平。
[0096] 在再一個(gè)實(shí)施方案中，步驟i)包括分析誘變的種子和/或植物的油、糠和/或種 子的脂肪酸組成。
[0097] 另一方面，本發(fā)明提供了一種選擇水稻植物的方法，該植物可用于產(chǎn)生本發(fā)明的 米糠油、米糠和/或水稻種子，所述方法包括：
[0098] i)分析得自候選水稻植物的米糠油、米糠和/或種子的脂肪酸含量，及
[0099] ii)選擇可用于產(chǎn)生本發(fā)明的米糠油、米糠和/或水稻種子的水稻植物。
[0100] 再一方面，本發(fā)明提供了一種選擇水稻植物的方法，該植物可用于產(chǎn)生本發(fā)明的 米糠油、米糠和/或水稻種子，所述方法包括：
[0101] i)分析候選植物樣品的具有Fad2或FatB活性的多肽，及
[0102] ii)基于所述多肽的序列、產(chǎn)生水平和/或活性選擇可用于產(chǎn)生本發(fā)明的米糠油、 米糠和/或水稻種子的水稻植物。
[0103] 另一方面，本發(fā)明提供了一種選擇水稻植物的方法，該植物可用于產(chǎn)生本發(fā)明的 米糠油、米糠和/或水稻種子，所述方法包括：
[0104] i)分析候選植物的Fad2或FatB基因的序列和/或表達(dá)水平，及
[0105] ii)基于所述基因的序列和/或表達(dá)水平選擇可用于產(chǎn)生本發(fā)明的米糠油、米糠 和/或水稻種子的水稻植物。
[0106] 再一方面，本發(fā)明提供了一種鑒別可用于產(chǎn)生本發(fā)明的米糠油、米糠和/或水稻 種子的水稻植物的方法，所述方法包括檢測(cè)所述植物的核酸分子，其中所述核酸分子與植 物中Fad2基因和/或FatB基因的至少一部分連接和/或包含所述部分。
[0107] 另一方面，本發(fā)明提供了一種鑒別可用于產(chǎn)生貯存期延長(zhǎng)的糙米種子的水稻植物 的方法，所述方法包括檢測(cè)植物的核酸分子，其中所述核酸分子與植物中Fad2基因和/或 FatB基因的至少一部分連接和/或包含所述部分。
[0108] 在一個(gè)實(shí)施方案中，上述兩種方法包括：
[0109] i)使第二種核酸分子與得自所述植物的所述核酸分子雜交，
[0110] ii)任選地使至少一種其它核酸分子與得自所述植物的所述核酸分子雜交，及
[0111] iii)檢測(cè)所述雜交步驟的產(chǎn)物或者所述雜交步驟產(chǎn)物的不存在。
[0112] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第二種核酸分子用作引物以逆轉(zhuǎn)錄或者復(fù)制所述核酸分 子的至少一部分。
[0113] 可以使用任何技術(shù)檢測(cè)核酸，所述技術(shù)例如但不限于限制片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析、 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析、微衛(wèi)星擴(kuò)增和/或核酸測(cè)序。
[0114] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括核酸擴(kuò)增。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法分析 基因的表達(dá)水平。
[0115] 本發(fā)明還提供了一種獲得水稻植物或種子的方法，所述方法包括：
[0116] i)使第一種親代水稻植物與第二種親代水稻植物雜交，所述第一種親代水稻植物 包含賦予植物谷粒油中油酸比例增加的Fad2等位基因，所述第二種親代水稻植物包含賦 予植物谷粒油中棕櫚酸比例降低的FatB等位基因，
[0117] ii)從雜交后代中篩選存在這兩個(gè)等位基因的后代植物或谷粒，及
[0118] iv)選擇包含這兩個(gè)等位基因且植物谷粒油中油酸比例增加以及棕櫚酸比例降低 的后代植物或谷粒。
[0119] 另一方面，本發(fā)明提供了一種將Fad2等位基因?qū)胨局参镏械姆椒?，所述方?包括：
[0120] i)使第一種親代水稻植物與第二種親代水稻植物雜交，其中第二種植物包含所述 等位基因，及
[0121] ii)使步驟i)的雜交后代與和第一種親代植物相同基因型的植物回交足夠次數(shù) 以產(chǎn)生具有第一種親代植物大部分基因型但是包含所述等位基因的植物，
[0122] iii)選擇具有第一種植物的大部分基因型且包含所述等位基因的植物，其中所述 等位基因賦予植物的油、糠和/或種子中油酸的比例增加。
[0123] 再一方面，本發(fā)明提供了一種將FatB等位基因?qū)胨局参镏械姆椒?，所述方?包括：
[0124] i)使第一種親代水稻植物與第二種親代水稻植物雜交，其中第二種植物包含所述 等位基因，及
[0125] ii)使步驟i)的雜交后代與和第一種親代植物相同基因型的植物回交足夠次數(shù) 以產(chǎn)生具有第一種親代植物大部分基因型但是包含所述等位基因的植物，
[0126] iii)選擇具有第一種植物的大部分基因型且包含所述等位基因的植物，其中所述 等位基因賦予植物的油、糠和/或種子中棕櫚酸的比例降低。
[0127] 再者，本發(fā)明提供了一種增加水稻植物的油、糠和/或種子中油酸比例的方法，所 述方法包括對(duì)所述植物進(jìn)行遺傳操作，由此當(dāng)與野生型植物相比時(shí)Fad2多肽的產(chǎn)生減少， 其中所述多肽具有A 12去飽和酶活性。
[0128] 再一方面，本發(fā)明提供了一種降低水稻植物的油、糠和/或種子中棕櫚酸比例的 方法，所述方法包括對(duì)所述植物進(jìn)行遺傳操作，由此當(dāng)與野生型植物相比時(shí)FatB多肽的產(chǎn) 生減少，其中所述多肽具有（FatB)活性。
[0129] 本發(fā)明還提供了使用本發(fā)明的方法獲得的水稻植物或者其后代植物。
[0130] 另一方面，本發(fā)明提供了得自本發(fā)明植物的米糠油。
[0131] 另一方面，本發(fā)明提供了得自本發(fā)明植物的米糠。
[0132] 另一方面，本發(fā)明提供了得自本發(fā)明植物的水稻種子。
[0133] 再者，本發(fā)明提供了一種產(chǎn)生種子的方法，所述方法包括：
[0134] a)生長(zhǎng)本發(fā)明的植物，及
[0135] b)收獲種子。
[0136] 再一方面，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的米糠油、米糠和/或水稻種子的食品。
[0137] 另一方面，本發(fā)明提供了制備食品的方法，所述方法包括在本發(fā)明的米糠油中烹 調(diào)可食用物質(zhì)。
[0138] 顯然，本發(fā)明一方面的優(yōu)選特征和特性可適用于本發(fā)明的許多其它方面。
[0139] 在本說(shuō)明書中，單詞"包含"應(yīng)理解為意味著包含指定要素、整數(shù)或步驟、或一組要 素、整數(shù)或步驟，但是不排除任何其它要素、整數(shù)或步驟、或一組要素、整數(shù)或步驟。
[0140] 本發(fā)明在后文通過(guò)非限制性實(shí)施例以及附圖加以描述。
[0141] 附圖簡(jiǎn)沐
[0142] 圖1 :高等植物的質(zhì)體和細(xì)胞溶膠中主要的脂肪酸生物合成途徑。
[0143] 圖 2 :水稻 FatB 蛋白的序列對(duì)比。ProteinFATB2 = SEQ ID NO :1，proteinFATB3 =SEQ ID NO :2, proteinFATBl = SEQ ID NO :3, proteinFATB4 = SEQ ID NO :4。
[0144] 圖 3 :水稻 FatB 基因結(jié)構(gòu)。L0C_0s02g4 = SEQ ID NO :5, LOC-Osl lg4 = SEQ ID NO :6, L0C-0s06g0 = SEQ ID NO :7, L0C-0s06g3 = SEQ ID NO :8。
[0145] 圖4 :通過(guò)ClustalW對(duì)比FatB基因序列。使用默認(rèn)參數(shù)，注意"基因"是不同長(zhǎng)度 的。
[0146] 圖5 :相應(yīng)于L0C_0s6g05130的FatB基因外顯子-內(nèi)含子結(jié)構(gòu)。上面一行相應(yīng)于 mRNA編碼序列（SEQ ID N0:9)的起始處，成對(duì)的第二行相應(yīng)于基因 （SEQ ID N0:10)。
[0147] 圖6 :四個(gè)FatB同工型的編碼序列對(duì)比示出分別以小寫字母和大些字母交替表 示的連續(xù)外顯子以及用于通過(guò)RT-PCR區(qū)分同工型的引物的位置（下劃線處）。起始密碼 子（起始位置 1)以粗體表示。AC108870 = SEQ ID NO :11，AP005291 = SEQ ID NO :12， AP000399 = SEQ ID NO ：13, AP004236 = SEQ ID NO ：14〇
[0148] 圖7 :通過(guò)Clustal W對(duì)比Fad2同工型的推導(dǎo)的多肽序列。注意F_1品系相應(yīng)于 0s02g48560, F_2 相應(yīng)于 0s07g23410, F_3 相應(yīng)于 0s07g23430, 0_4 相應(yīng)于 0s07g23390。使 用 ClustalW(Fast)程序默認(rèn)參數(shù)。ProteinF_l = SEQ ID NO : 15, ProteinF_3 = SEQ ID NO :16, ProteinF_2 = SEQ ID NO :17, ProteinF_4 = SEQ ID NO :18。
[0149] 圖8 :Fad2序列的對(duì)比示出同工型AP004047中Y UTR位置（小寫字母）和用于 通過(guò)RT-PCR進(jìn)行擴(kuò)增的引物的位置（下劃線處）。終止密碼子的位置在方框中示出，終止 密碼子下游的非翻譯區(qū)以小寫字母表示。AP005168 = SEQ ID N0:19，AP004047 = SEQ ID NO ：20, Contig2654 = SEQ ID NO ：21〇
[0150] 圖9 :水稻Fad2基因結(jié)構(gòu)。
[0151 ] 圖10 :水稻Fad2基因的蛋白質(zhì)編碼區(qū)的核昔酸序列對(duì)比。品系0_2相應(yīng)于 0s07g23410, 0_4 相應(yīng)于 0s07g23390, 0_1 相應(yīng)于 0s02g48560,0_3 相應(yīng)于 0s07g23410。使 用 ClustalW 程序默認(rèn)參數(shù)。CdsFAD20_2 = SEQ ID NO :22，CdsFAD20_4 = SEQ ID NO :23， CdsFAD20_l = SEQ ID NO ：24, CdsFAD20_3 = SEQ ID NO ：25〇
[0152] 圖11 :通過(guò)GC分析指定基因型谷粒的總油級(jí)分確定的棕櫚酸、油酸和亞油酸的相 對(duì)百分比示意圖。
[0153] 圖12 :在對(duì)指定基因型谷粒進(jìn)行的GC總脂質(zhì)分析中棕櫚酸與油酸的相對(duì)百分比 示意圖。
[0154] 圖13 :在對(duì)指定基因型谷粒進(jìn)行的GC總脂質(zhì)分析中亞油酸與油酸的相對(duì)百分比 示意圖。
[0155] 圖14 :散點(diǎn)圖示出指定基因型的水稻植物谷粒中亞油酸對(duì)油酸的百分比。注意這 兩種脂肪酸量之間的關(guān)系（反應(yīng)在直線的斜率中）在分析的所有品系中基本相同，但是庫(kù) 大小容量（pool size capacity)看起來(lái)不同（以不同品系沿著分析的空間位移表示）。
[0156] 圖15 :不同基因型的亞油酸對(duì)棕櫚酸的百分比散點(diǎn)圖。注意FatB中受影響的品 系與在Fad2中受影響的品系的不同斜率。這提示這些成分之間的關(guān)系在不同基因型中是 不同的，很可能反映了影響步驟中的不同。
[0157] 圖16 :不同基因型的油酸對(duì)棕櫚酸百分比散點(diǎn)圖。注意斜率的不同。
[0158] 圖17 :對(duì)Fad2 RNAi植物和FatB RNAi植物的油組成變異的主成分分析示意圖。 結(jié)果示出主成分2是亞油酸對(duì)油酸，主成分2是棕櫚酸對(duì)亞油酸和油酸。
[0159] 圖18 :Western印跡示出抗肽抗血清反應(yīng)。通過(guò)SDS-PAGE分析FatB-99抗總?cè)~蛋 白提取物。在Tos-17品系中缺少大約20kDa的肽。圖中示出用免疫前血清的反應(yīng)。R是指 FatB RNAi品系，T是指Tos-17品系，Wl和W2是野生型。
[0160] 序列表索引
[0161] SEQ ID NO :1-水稻 FatB2 蛋白
[0162] SEQ ID NO :2_ 水稻 FatB3 蛋白
[0163] SEQ ID NO :3_ 水稻 FatBl 蛋白
[0164] SEQ ID勵(lì)：4-水稻卩&七84蛋白
[0165] SEQ ID NO :5_ 水稻 FatB3 基因
[0166] SEQ ID NO :6_ 水稻 FatB2 基因
[0167] SEQ ID NO :7_ 水稻 FatBl 基因
[0168] SEQ ID NO :8_ 水稻 FatB4 基因
[0169] SEQ ID NO :9_ 編碼水稻 FatBl 蛋白的 cDNA.
[0170] SEQ ID NO :10_編碼水稻FatBl蛋白的基因（僅部分序列，見圖5-包括所有外顯 子序列和一些側(cè)翼序列和內(nèi)含子序列）
[0171] SEQ ID NO : 11-編碼水稻FatB2蛋白的開放讀框
[0172] SEQ ID NO : 12-編碼水稻FatB3蛋白的開放讀框
[0173] SEQ ID NO :13_編碼水稻FatBl蛋白的開放讀框
[0174] SEQ ID NO : 14-編碼水稻FatB4蛋白的開放讀框
[0175] SEQ ID NO :15_ 水稻 Fad2 同工型 1
[0176] SEQ ID NO :16_ 水稻 Fad2 同工型 3
[0177] SEQ ID NO :17_ 水稻 Fad2 同工型 2
[0178] SEQ ID NO :18_ 水稻 Fad2 同工型 4
[0179] SEQ ID NO :19_ 水稻 Fad2_3cDNA
[0180] SEQ ID NO :20-水稻 Fad2-lcDNA.
[0181] SEQ ID NO :21-水稻 Fad2_2cDNA
[0182] SEQ ID NO :22-編碼水稻Fad2_2的開放讀框
[0183] SEQ ID NO :23_編碼水稻Fad2_4的開放讀框
[0184] SEQ ID NO :24_編碼水稻Fad2_l的開放讀框
[0185] SEQ ID NO :25_編碼水稻Fad2_3的開放讀框
[0186] SEQ ID NO :26_FatB 共有序列
[0187] SEQ ID NO :27-33-Fad2 共有序列
[0188] SEQ ID NO :34-55 和 60-63-寡核苷酸引物
[0189] SEQ ID NO :56-59-抗原性水稻 FatB 肽
[0190] SEQ ID NO :64-83-可用于RNAi的單鏈分子序列
[0191] 發(fā)明詳沐
[0192] 一般摶術(shù)
[0193] 除非特別指出，本文所用所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)均具有本領(lǐng)域技術(shù)人員通常了解的 相同含義（例如在細(xì)胞培養(yǎng)、植物分子生物學(xué)、分子遺傳學(xué)、免疫學(xué)、免疫組織化學(xué)、蛋白質(zhì) 化學(xué)和生物化學(xué)領(lǐng)域）。
[0194] 除非特別指出，本發(fā)明利用的重組蛋白、細(xì)胞培養(yǎng)和免疫學(xué)技術(shù)均是為本領(lǐng) 域技術(shù)人員熟知的標(biāo)準(zhǔn)程序。這些技術(shù)在例如如下文獻(xiàn)中描述和解釋：J.Perbal，A Practical Guide to Molecular Cloning，John Wiley and Sons(1984)，J. Sambrook et al.，Molecular Cloning ：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbour Laboratory Press (1989)，T. A. Brown (editor)，Essential Molecular Biology ：A Practical Approach,Volumes land 2, IRL Press(1991),D. M. Glover and B. D. Hames(editors), DNA Cloning :A Practical Approach,Volumes 1-4,IRL Press (1995and 1996)和F. M. Ausubel et al. (editors)，Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley_Interscience(1988,包括迄今為止的所有更新），Ed Harlow and David Lane(editors)Antibodies ：A Laboratory Manual， Cold Spring Harbour Laboratory, (1988)，以及 J. E. Coligan et al. (editors)Current Protocols in Immunology, John Wiley&Sons (包括迄今為止的所有更新）。
[0195] 詵擇的宙義
[0196] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"Fad2多肽"是指進(jìn)行將油酸轉(zhuǎn)變?yōu)閬営退岬娜ワ柡兔阜磻?yīng)的蛋 白質(zhì)。因此，術(shù)語(yǔ)"Fad2活性"是指將油酸轉(zhuǎn)變?yōu)閬営退?。這些脂肪酸可以是酯化形式，例 如是磷脂的一部分。水稻Fad2多肽的例子包括包含圖7和SEQ ID NO :15-18所示的一種 氨基酸序列的蛋白質(zhì)以及其變體和/或突變體。這種變體和/或突變體與圖7和SEQ ID NO : 15-18所示任一多肽可是至少80 %、更優(yōu)選至少90 %、更優(yōu)選至少95 %、還更優(yōu)選至少 99%相同的。
[0197] "Fad2多核苷酸"或"Fad2基因"編碼Fad2多肽。Fad2多核苷酸的例子包括包含 圖8或圖10以及SEQ ID NO :19-25所示的一種核苷酸序列的核酸以及其等位基因變體和 /或突變體。Fad2基因的例子包括包含圖8和SEQ ID NO :19-21所示的一種核苷酸序列的 核酸以及其等位基因變體和/或突變體。這種等位基因變體和/或突變體與圖8和/或圖 10和/或SEQ ID NO :19-25所示任一多核苷酸可是至少80%、優(yōu)選至少90%、更優(yōu)選至少 95 %、還更優(yōu)選至少99 %相同的。
[0198] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"FatB多肽"是指水解棕櫚酰-ACP產(chǎn)生游離棕櫚酸的蛋白質(zhì)。因 此，術(shù)語(yǔ)"FatB活性"是指水解棕櫚酰-ACP產(chǎn)生游離棕櫚酸。水稻FatB多肽的例子包括包 含圖2和SEQ ID NO :1-4所示的一種氨基酸序列的蛋白質(zhì)以及其變體和/或突變體。這種 變體和/或突變體與圖2和SEQ ID NO :1-4所示任一多肽可是至少80%、優(yōu)選至少90%、 更優(yōu)選至少95 %、還更優(yōu)選至少99 %相同的。
[0199] "FatB多核苷酸"或"FatB基因"編碼FatB多肽。FatB多核苷酸的例子包括包含 圖4和圖6以及SEQ ID NO :5-8和11-14所示的一種核苷酸序列的核酸以及其等位基因變 體和/或突變體。FatB基因的例子包括包含圖4和SEQ ID NO :5-8所示的一種核苷酸序 列的核酸以及其等位基因變體和/或突變體。這種等位基因變體和/或突變體與圖4和/ 或圖6和/或SEQ ID NO :5-8及11-14所示任一多核苷酸可是至少80%、優(yōu)選至少90%、 更優(yōu)選至少95 %、還更優(yōu)選至少99 %相同的。
[0200] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"水稻"是指稻屬的任何物種，包括其祖先，以及通過(guò)與其它物種 雜交產(chǎn)生的后代。優(yōu)選所述植物是商業(yè)培育的稻屬物種例如稻（Oryza sativa)的株系或 栽培種或者變種或者適于商業(yè)產(chǎn)生谷粒的品系。
[0201 ] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"米糠油"是指得自水稻植物的種子/谷粒或者其一部分如糠皮 的組合物，其包含至少60% (w/w)脂質(zhì)。米糠油在室溫典型是液態(tài)。優(yōu)選地，所述脂質(zhì)包含 長(zhǎng)度為至少6個(gè)碳原子的脂肪酸。所述脂肪酸典型是酯化形式，例如三酰甘油、磷脂。本發(fā) 明的米糠油包含油酸。本發(fā)明的米糠油也可以包含至少一些其它脂肪酸，例如棕櫚酸、亞油 酸、豆蔻酸、硬脂酸和/或亞麻酸。所述脂肪酸可以是游離脂肪酸和/或三酰甘油（TAG)。在 一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的米糠油中至少50 %、更優(yōu)選至少70 %、更優(yōu)選至少80 %的脂肪 酸是TAG。本發(fā)明的米糠油可以形成水稻谷粒/種子或其部分如糊粉層或胚/盾片，其統(tǒng)稱 作"米糠"?；蛘撸景l(fā)明的米糠油已經(jīng)從水稻谷粒/種子或者米糠中提取。這種提取方法的 例子在實(shí)施例1中提供。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的"米糠油"是"基本純化的"或 者"純化的"米糠油，其已經(jīng)與一或多種其它脂質(zhì)、核酸、多肽或者與其天然狀態(tài)相關(guān)的其它 污染分子分開。優(yōu)選所述基本純化的米糠油至少60%、更優(yōu)選至少75%、更優(yōu)選至少90% 沒(méi)有預(yù)期天然相關(guān)的其它成分。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，當(dāng)與完整種子/谷?；蛘呖分斜嚷?相比時(shí)，提取時(shí)油酸與亞油酸、棕櫚酸與油酸和/或棕櫚酸與亞油酸的比率無(wú)明顯改變（例 如不超過(guò)5 %的變化）。在再一個(gè)實(shí)施方案中，米糠油未暴露于如氫化等方法，與完整種子 /谷?；蛘呖分斜嚷氏啾葧r(shí)，所述方法可以改變油酸與亞油酸的比率、棕櫚酸與油酸的比率 和/或棕櫚酸與亞油酸的比率。本發(fā)明的米糠油可進(jìn)一步包含非脂肪酸分子，例如但不限 于γ-谷維素和固醇。
[0202] 米糠油可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法從水稻種子或者糠中提取。這典型包括用 非極性溶劑提取，所述溶劑例如是乙醚、石油醚、氯仿/甲醇或者丁醇混合物。谷粒中與淀 粉相關(guān)的脂質(zhì)可以用水-飽和丁醇提取。米糠油可以通過(guò)本領(lǐng)域已知方法"脫膠"以除去 多糖或者以其它方式處理以除去污染物或者改良純度、穩(wěn)定性或者色澤。油中的三酰甘油 及其它酯可以被水解釋放游離脂肪酸或者如本領(lǐng)域所已知對(duì)油進(jìn)行氫化或者經(jīng)化學(xué)或酶 處理。
[0203] 從水稻種子或者糠中提取后的米糠油典型包含稱作γ-谷維素的脂質(zhì)基團(tuán)。如本 文所用，"包含γ-谷維素"是指所述油中存在至少0.1% (w/w)y-谷維素化合物。在提取 后和從TAG取出之前的米糠油中γ-谷維素的水平典型為1.5-3. 5% (w/w)。所述化合物典 型是阿魏酸（4-羥基-3-甲氧基桂皮酸）的固醇酯及其它三萜酯的混合物。阿魏酸環(huán)阿屯 酯（Cycloartenyl ferulate)、24_亞甲基環(huán)阿屯醇阿魏酸酯（24-methylene cycloartanyl ferulate)和菜油甾醇阿魏酸酯（campesteryl ferulate)是谷維素中的主要阿魏酸酯，阿 魏酸β-谷留醇酯和阿魏酸豆留醇酯水平較低。據(jù)認(rèn)為γ-谷維素的存在幫助米糠油的食 用者對(duì)抗慢性疾病如心臟病和癌癥，因此γ-谷維素的存在是有益的。
[0204] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"米糠"是指內(nèi)部精白米谷粒與水稻種子/谷粒的外殼之間的層 (糊粉層）以及谷粒的胚/盾片。米糠通過(guò)對(duì)糙米拋光產(chǎn)生精白米的主要副產(chǎn)物。
[0205] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"貯存期延長(zhǎng)"是指通過(guò)本發(fā)明的方法產(chǎn)生的種子/谷粒在收獲 時(shí)可以作為糙米貯存，與例如自野生型（未遺傳修飾的）水稻植物中收獲的糙米相比可貯 存更長(zhǎng)時(shí)間。如本文所述，一種測(cè)量糙米的"貯存期延長(zhǎng)"的方法是在40°C貯存至少8周后 測(cè)量己醛產(chǎn)生情況（見實(shí)施例8)。
[0206] 術(shù)語(yǔ)"植物"包括完整植物、植物結(jié)構(gòu)（例如葉、莖）、根、花器官/結(jié)構(gòu)、種子（包 括胚、胚乳和種皮）、植物組織（例如維管結(jié)構(gòu)、基本組織等）、細(xì)胞及其后代等。
[0207] "轉(zhuǎn)基因植物"、"遺傳修飾的植物"或者其變化用語(yǔ)是指含有在相同物種、變種或 栽培種的野生型植物中未發(fā)現(xiàn)的基因構(gòu)建體（轉(zhuǎn)基因）的植物。"轉(zhuǎn)基因"在本文具有生物
技術(shù)領(lǐng)域的正常含義，包括通過(guò)重組DNA或RNA技術(shù)產(chǎn)生或改變的并已經(jīng)導(dǎo)入植物細(xì)胞中 的遺傳序列。轉(zhuǎn)基因可包括衍生自植物細(xì)胞的遺傳序列。典型地，轉(zhuǎn)基因通過(guò)人工操作例 如通過(guò)轉(zhuǎn)化方法導(dǎo)入植物中，但是可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)的任何方法。
[0208] 術(shù)語(yǔ)"種子"和"谷粒"在本文可互換應(yīng)用。"谷粒"通常是指成熟的、收獲的谷粒， 但是根據(jù)情況也可以是指吸漲或發(fā)芽后的谷粒。成熟谷粒的含水量通常小于大約18-20%。
[0209] 如本文所用，術(shù)語(yǔ)"相應(yīng)未修飾的植物"是指野生型植物。如本文所用"野生型"是 指未根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行修飾的細(xì)胞、組織或植物。野生型細(xì)胞、組織或植物可以用作對(duì)照物以 與如本文所述修飾的細(xì)胞、組織或植