然后過濾并將兩種濾液混合得到第二混合水;與第一混合水的制作過程類似,為了方便過濾,可以先將180-220份土豆用800-1200份水煮20-40min后過濾去除土豆得到土豆水,然后將180-220份麥麩用布袋裝好,再將用布袋裝好的麥麩放入800-1200份水中煮20-40min后取出并得到麥麩水,然后將土豆水和麥麩水混合后得到第二混合水。
[0032]再將18-22份葡萄糖、0.8-1.2份硫酸鎂、0.25-1份維生素BI加入第二混合水中并煮15-25min得到第二培養(yǎng)液;將第二培養(yǎng)液分裝到搖瓶并進(jìn)行加熱滅菌處理,待第二培養(yǎng)液冷卻至20-23°C,然后在無菌環(huán)境下接入母種,再將搖瓶放置于搖床,搖床的旋轉(zhuǎn)頻率為350-500rpm,在20-23 °C下?lián)u動(dòng)培養(yǎng)3_6天后得到第一液體菌種。
[0033]現(xiàn)有的固體菌種的制作要經(jīng)過從母種到原種再到栽培種三級(jí)制種過程,而且要更換培養(yǎng)基,手續(xù)繁雜。而本發(fā)明的液體菌種的制作,只要同一種培養(yǎng)基,培養(yǎng)出來的菌種,即克作為母種使用,也可作為原種,栽培的使用,減少了培養(yǎng)基的更換和培養(yǎng)環(huán)境的改變。
[0034]液體菌種發(fā)育快,每一個(gè)液體菌種的菌絲球都是一個(gè)生長中心,由于菌絲球數(shù)量多、分布均勻、接種后菌絲可迅速發(fā)育,短時(shí)間內(nèi)完成營養(yǎng)生長期,避免污染的發(fā)生和危害??商崆鞍l(fā)現(xiàn)菌球的生長情況至栽培種的菌絲纏繞強(qiáng)弱。此外,本發(fā)明的各種培養(yǎng)液總采用了最佳的碳氮比,采用本發(fā)明的羊肚菌的液體菌種繁育方法,菌絲球齡一致、生長旺盛、長勢好、生活力好。
[0035]固體生產(chǎn)用種的發(fā)育是從接種的種塊上蔓延開始的,整個(gè)培養(yǎng)瓶(袋)內(nèi)的菌絲從上部到下部菌齡相差20?30天,其生活力相差較大。液體菌種的各個(gè)菌絲小球基本上是同一時(shí)間開始形成的,菌齡一致,整個(gè)菌種的培養(yǎng)時(shí)間非常短,若在菌絲體生長指數(shù)期(培養(yǎng)時(shí)間在5?7天)使用液體菌種,即最佳接種期,菌絲能很快定植,旺盛生長。
[0036]作為優(yōu)選,液體菌種制作步驟中的加熱滅菌處理的條件為:在壓力為0.1-0.2Pa且溫度為100-130°C的條件下滅菌40-50min。
[0037]若是少量生產(chǎn),可以直接用第一液體菌種制作菌包并進(jìn)行工廠化栽培。
[0038]—種羊肚菌的工廠化栽培方法,包括羊肚菌的液體菌種繁育方法的步驟以及以下步驟:
[0039]菌包制作步驟:小麥、木肩、土、麥麩、石灰、石膏、糖、硫酸鎂和谷殼混合得到混合物;混合物中,各個(gè)組分的重量百分?jǐn)?shù)分別為:小麥36-40%,木肩32-38%,土8-12%,麥麩8-12%,石灰 1-3%,石膏0.8-1.2%,糖0.8-1.2%,硫酸鎂0.8-1.2%,谷殼 1-3% ;然后將混合物裝袋并進(jìn)行加熱滅菌處理,再將第一液體菌種在無菌環(huán)境下接種到混合物,然后在15-22°C條件下培養(yǎng)15-20天得到菌包;
[0040]脫袋栽培步驟:先在栽培區(qū)挖掘出土坑,然后將菌包脫袋后擺放在土坑內(nèi),再向土坑內(nèi)填土并且覆蓋菌包,然后向栽培區(qū)澆水。
[0041]作為優(yōu)選,菌包制作步驟中的加熱滅菌處理的條件為:在壓力為0.1-0.2Pa且溫度為100-130°C的條件下滅菌4-6h。
[0042]作為優(yōu)選,土坑的深度為12-18cm的,向栽培區(qū)澆水后的栽培區(qū)的土壤的濕度為60-70 %,相鄰的菌包之間間隔3-5cm,再向土坑內(nèi)填土并且覆蓋菌包,菌包的頂部的土層厚度為3_5cm。
[0043]栽培區(qū)可以設(shè)置在培養(yǎng)室內(nèi),也可以設(shè)置在大棚內(nèi)。
[0044]作為優(yōu)選,栽培區(qū)為多個(gè)并分布在培養(yǎng)室內(nèi),培養(yǎng)室內(nèi)的溫度為10_22°C,培養(yǎng)室內(nèi)的空氣濕度為75-90 %。
[0045]作為優(yōu)選,培養(yǎng)室內(nèi)設(shè)置有2-6層層架,每層層架的寬度為1-1.5m,長度為4-6m,層架的底部設(shè)置有漏水孔。
[0046]作為優(yōu)選,栽培區(qū)為多個(gè)并分布在大棚內(nèi),大棚內(nèi)的溫度為10-22°C,大棚內(nèi)的空氣濕度為75-90 %。
[°047 ]作為優(yōu)選,大棚內(nèi)設(shè)置有2-6層層架,每層層架的寬度為1-1.5m,長度為4-6m,層架的底部設(shè)置有漏水孔。
[0048]作為優(yōu)選,大棚呈拱形,大棚的最高點(diǎn)距離地面2-2.4m,大棚覆蓋了隔熱保溫膜,大棚覆蓋了透光率為25%-35%的遮陽網(wǎng)或者遮陽布。
[0049]作為進(jìn)一步優(yōu)選,遮陽網(wǎng)或者遮陽布的透光率為30%。
[0050]羊肚菌喜歡在陰暗的環(huán)境下生長,所以需要通過遮陽網(wǎng)或者遮陽布減少陽光的照射量。行業(yè)內(nèi)通俗的說法是7分陰3分陽最好。
[0051 ]若是產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn),還需要對第一液體菌種進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),以增大液體菌種的量。
[0052]作為優(yōu)選,羊肚菌的液體菌種繁育方法還包括擴(kuò)大培養(yǎng)步驟;
[0053]擴(kuò)大培養(yǎng)步驟為:將第一液體菌種在無菌環(huán)境下接入發(fā)酵罐,向發(fā)酵罐內(nèi)通入無菌空氣并對發(fā)酵罐內(nèi)的第三培養(yǎng)液進(jìn)行吹氣攪拌,培養(yǎng)3-6天后得到第二液體菌種;
[0054]按照與發(fā)酵罐的容積的比例,發(fā)酵液由以下組分制成:麥麩40_60g/100L、淀粉1.2-1.8kg/100L、硫酸鎂 0.8-1.2kg/100L、磷酸二氫鉀 0.1-0.3kg/100L、葡萄糖 0.4-0.6kg/100L、白糖0.4-0.6kg/100L、蛋白胨0.2-0.4kg/100L和食用油0.01-0.03kg/100L,余量為水。
[0055]淀粉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、葡萄糖、白糖、蛋白胨和食用油的用量均與配制得到的第三培養(yǎng)液的體積相關(guān),通常發(fā)酵罐的容積為100L、200L、400L和500L,相應(yīng)地第三培養(yǎng)液的體積通常為100L、200L、400L和500L。糊狀淀粉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、葡萄糖、白糖、蛋白胨和食用油均可直接使用。麥麩相對于其他組分更特殊下,麥麩需要加水煮25-35min,然后經(jīng)過過濾去除麥麩得到麥麩水,再將麥麩水加入發(fā)酵罐內(nèi)和其他組分混合。淀粉最好先加適量水潤濕成糊狀淀粉使用。食用油可以選用菜籽油、大豆油等常見的食用油。
[0056]產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)時(shí),是用第二液體菌種制作菌包,具體制作過程與用第一液體菌種制作菌包完全一樣。
[0057]一種羊肚菌的工廠化栽培方法,包括以下步驟:
[0058]菌包制作步驟:將小麥、木肩、土、麥麩、石灰、石膏、糖、硫酸鎂和谷殼混合得到混合物;混合物中,各個(gè)組分的重量百分?jǐn)?shù)分別為:小麥36-40 %,木肩32-38%,土8_12 %,麥麩8-12%,石灰 1-3%,石膏0.8-1.2%,糖0.8-1.2%,硫酸鎂0.8-1.2%,谷殼 1-3% ;然后將混合物裝袋并進(jìn)行加熱滅菌處理,再將第二液體菌種在無菌環(huán)境下接種到混合物,然后在15-22 0C條件下培養(yǎng)15-20天得到菌包;
[0059]脫袋栽培步驟:先在栽培區(qū)挖掘出土坑,然后將菌包脫袋后擺放在土坑內(nèi),再向土坑內(nèi)填土并且覆蓋菌包,然后向栽培區(qū)澆水。
[0060]實(shí)施例1
[0061]本實(shí)施例提供了一種羊肚菌的液體菌種繁育方法,包括以下步驟:
[0062](I)母種制作步驟:先將200g土豆用100mL水煮30min后過濾去除土豆得到土豆水,然后將50g木肩用布袋裝好,再將用布袋裝好的木肩放入100mL水中煮30min后取出并得到木肩水,然后將土豆水和木肩水混合后得到第一混合水。
[0063]然后將20g葡萄糖、Ig硫酸鎂、10g土和20g瓊脂加入第一混合水中并煮20min得到第一培養(yǎng)液,將第一培養(yǎng)液攪拌均勻后備用。其中每片維生素BI的重量為0.5g,每片酵母片的重量為0.3g。
[0064]再將第一培養(yǎng)液分裝在試管內(nèi),在壓力為0.15Pa且溫度為120°C的條件下滅菌45min;然后將試管試傾斜放置并與水平面保持15°的夾角在陰涼的環(huán)境下進(jìn)行冷卻;第一培養(yǎng)液冷卻凝固4天后得到第一培養(yǎng)基;采摘生長完好、強(qiáng)壯的新鮮羊肚菌,然后將新鮮羊肚菌用膠布包裹后在20°C條件下放置4天;在無菌的環(huán)境下,取羊肚菌的菌柄和菌帽的銜接處的組織放入第一培養(yǎng)基中培養(yǎng),在18°C的環(huán)境下培養(yǎng)并得到母種。
[0065](2)液體菌種制作步驟:先將200g 土豆用100mL水煮30min后過濾去除土豆得到土豆水,然后將200g麥麩用布袋裝好,再將用布袋裝好的麥麩放入100mL水中煮30min后取出并得到麥麩水,然后將土豆水和麥麩水混合后得到第二混合水;
[0066]再將20g葡萄糖、Ig硫酸鎂和I片維生素BI加入第二混合水中并煮20min得到第二培養(yǎng)液;將第二培養(yǎng)液攪拌均勻后分裝到搖瓶,在壓力為0.15Pa且溫度為120°C的條件下滅菌45min;待第二培養(yǎng)液冷卻至22°C,然后在無菌環(huán)境下接入