本發(fā)明涉及鐵皮石斛葉茶技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鐵皮石斛葉茶的制作方法。

背景技術(shù)：

石斛是我國(guó)名貴的中藥材，最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為上品，具有滋陰清熱、生津益胃、強(qiáng)身等功效。其中，鐵皮石斛(Dendrobium Officinale)是我國(guó)目前種植面積最大，應(yīng)用最廣的石斛佳品，已被國(guó)家列為食品新資源。鐵皮石斛俗稱黑節(jié)草，是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥材，含有多糖、芪類、生物堿、氨基酸、微量元素等多種成分，多糖是鐵皮石斛的主要藥效成分之一，具有抗腫瘤、降血糖、抗氧化和增強(qiáng)免疫等作用。最新版2010年《中國(guó)藥典》將鐵皮石斛從石斛中單列出來(lái)，將其莖多糖含量、醇溶性浸出物等作為品質(zhì)評(píng)價(jià)的主要標(biāo)準(zhǔn)。鐵皮石斛鮮莖和干品可食用，花晾干或烘干后可作花茶。而有關(guān)葉茶的制作和品質(zhì)研究較少。

鐵皮石斛作為保健食品開(kāi)發(fā)超過(guò)70種，越來(lái)越受到消費(fèi)者的推崇，現(xiàn)有鐵皮石斛相關(guān)保健食品涵蓋劑型有顆粒、膠囊、浸膏、片劑(含普通片劑、含片、咀嚼片)、丸劑、口服液、袋泡茶以及飲料，主要加工原料為鐵皮石斛莖。而作為具有相似藥用功能的花和葉經(jīng)常作為廢棄物被舍棄(陳素紅，顏美秋，呂圭源，等.2013，鐵皮石斛保健食品開(kāi)發(fā)現(xiàn)狀與進(jìn)展.中國(guó)藥學(xué)雜志，19:1625-1628)。經(jīng)過(guò)含量分析檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，鐵皮石斛莖、葉具有類似成分，有較高相似度，因此可考慮將鐵皮石斛葉作為藥用部位(黃月純，楊麗娥，劉宏源，等.2012，鮮鐵皮石斛莖、葉高效液相色譜特征圖譜比較.廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，29(5)：561-565.)，并且，其葉也含有獨(dú)特的成分，以黃酮類和各類揮發(fā)油為主(周桂芬，呂圭源.2012，鐵皮石斛不同部位黃酮碳苷類成分及清除DPPH自由基能力比較研究.中國(guó)中藥雜志，11:1536-1540.)，有較高的藥用價(jià)值，適用于各種代茶飲品的開(kāi)發(fā)及綜合利用。目前已報(bào)道的關(guān)于鐵皮石斛葉茶制作工藝和功效研究論文較少。宋燕華等(宋燕華，蔡德雷，傅劍云，等.2016，鐵皮石斛葉對(duì)二代繁殖雌性大鼠免疫水平影響的研究.浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，28(2)：109-112)報(bào)道，鐵皮石斛葉一定程度上提高二代繁殖雌性大鼠的免疫水平。以鐵皮石斛葉、花，綠梅花，代代花，白菊花等為主要成分，擬定了和胃茶配方。該配方對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)有較明顯抑制作用，能解除腸痙攣(付玲珠，鄭婷，朱飛葉,等.2014，以鐵皮石斛花、葉配伍的和胃茶對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的影響.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，37(5)：27-31)。經(jīng)國(guó)家專利局網(wǎng)站檢索，有關(guān)鐵皮石斛葉茶制作申請(qǐng)的專利如下：一種鐵皮石斛葉酵素茶生產(chǎn)工藝(CN201511017163.1)，鐵皮石斛葉制備鐵皮石斛保健茶的方法(CN201310626375.4)，一種鐵皮石斛葉茶的加工方法(CN201510001961.9)，一種鐵皮石斛干葉制茶的加工方法(CN201410058319.X)，一種鐵皮石斛茶的加工方法(CN201510691754.0)，一種解酒護(hù)肝的鐵皮石斛保健茶及其制備方法(CN201510458020.8)?，F(xiàn)有技術(shù)主要采用鐵皮石斛鮮葉進(jìn)行萎凋、殺青、揉捻、低溫烘干等工藝制作，其中，低溫烘制的石斛葉茶具有難以清除的酸澀口味，在一定程度上，影響其茶產(chǎn)品的口感和市場(chǎng)認(rèn)可度。并且，現(xiàn)有技術(shù)所制得的鐵皮石斛茶還存在水悶味，且其滋味不夠醇厚。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種鐵皮石斛葉茶的制作方法，該鐵皮石斛葉茶的制作方法所制得的鐵皮石斛葉茶沒(méi)有酸澀口味，也不存在水悶味，且滋味醇厚、濃郁、具蜜香，香氣高長(zhǎng)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

提供一種鐵皮石斛葉茶的制作方法，它包括以下步驟：

步驟一，原料準(zhǔn)備：采摘新鮮的鐵皮石斛的嫩葉作為原料；

步驟二，原料檢測(cè)：將步驟一采摘的新鮮的鐵皮石斛葉進(jìn)行重金屬和農(nóng)藥殘留檢測(cè)，以保證重金屬和農(nóng)藥殘留達(dá)標(biāo)；

步驟三，萎凋工藝：采用一定的方法使新鮮的鐵皮石斛葉失水45％～55％；

步驟四，揉捻工藝：將經(jīng)萎凋工藝步驟的鐵皮石斛葉投入揉捻機(jī)中進(jìn)行揉捻一定時(shí)間，當(dāng)鐵皮石斛葉緊卷成條，無(wú)松散折疊現(xiàn)象，手握所揉捻的鐵皮石斛葉有葉汁溢出即可結(jié)束揉捻；

步驟五，解塊工藝：將步驟四中結(jié)束揉捻的鐵皮石斛葉經(jīng)茶葉解塊機(jī)或手工進(jìn)行解塊；

步驟六，堆渥工藝：將步驟五解塊后的鐵皮石斛葉放入竹子制作的框內(nèi)進(jìn)行堆渥一定時(shí)間，并控制堆渥環(huán)境的溫度和濕度；

步驟七，干燥工藝：將完成堆渥工藝的鐵皮石斛葉放入烘干機(jī)內(nèi)，先進(jìn)行高溫干燥，然后再進(jìn)行低溫干燥，即制得鐵皮石斛葉茶。

上述技術(shù)方案中，一種鐵皮石斛葉茶的制作方法還包括步驟八，精制工藝：將經(jīng)干燥工藝的鐵皮石斛葉進(jìn)行篩除碎末，然后剔除鐵皮石斛葉中的粗老葉，即得到精制的鐵皮石斛葉茶。

上述技術(shù)方案中，所述步驟三萎凋工藝步驟中，采用日光曬、鼓風(fēng)吹、空凋制冷或空調(diào)抽濕的方法使新鮮的鐵皮石斛葉失水45％～55％。

上述技術(shù)方案中，所述步驟四揉捻工藝步驟中，揉捻時(shí)間為50min～70min。

上述技術(shù)方案中，所述步驟四揉捻工藝步驟中，整個(gè)揉捻過(guò)程的加壓原則是“輕-重-輕”原則。

上述技術(shù)方案中，所述步驟六堆渥工藝步驟中，堆渥時(shí)間為3h～6h，堆渥高度為5cm～15cm。

上述技術(shù)方案中，所述步驟六堆渥工藝步驟中，堆渥環(huán)境的溫度為25℃～27℃，堆渥環(huán)境的濕度為80％～90％。

上述技術(shù)方案中，所述步驟七干燥工藝步驟中，高溫干燥的溫度為115℃～125℃，高溫干燥的時(shí)間為20min～40min。

上述技術(shù)方案中，所述步驟七干燥工藝步驟中，低溫干燥的溫度為100℃～110℃，低溫干燥的時(shí)間為50min～70min。

上述技術(shù)方案中，所述步驟七干燥工藝步驟中，所述攤晾時(shí)間為50min～70min

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比較，有益效果在于：

(1)本發(fā)明提供的一種鐵皮石斛葉茶的制作方法，解塊工藝和堆渥工藝相結(jié)合，能夠使得所制得的鐵皮石斛葉茶沒(méi)有酸澀口味，且能提高鐵皮石斛葉茶的香氣和滋味。

(2)本發(fā)明提供的一種鐵皮石斛葉茶的制作方法，步驟七干燥工藝步驟中，先進(jìn)行高溫干燥，然后再進(jìn)行低溫干燥，先高溫干燥的目的是快速去除鐵皮石斛葉中的部分水分，并形成鐵皮石斛葉茶特有的香氣，通過(guò)攤晾后，鐵皮石斛葉的水分重新分布均勻，然后再采用低溫干燥，以進(jìn)一步鞏固鐵皮石斛葉茶的香氣，進(jìn)而使得所制得的鐵皮石斛葉茶沒(méi)有水悶味，且香氣高長(zhǎng)，滋味更醇和。另外，干燥工藝中，先高溫干燥，再低溫干燥，能便于鐵皮石斛葉的蜜糖香味析出，使得鐵皮石斛葉茶得口感更醇厚、濃郁。

(3)本發(fā)明提供的一種鐵皮石斛葉茶的制作方法，與現(xiàn)有技術(shù)鐵皮石斛葉制茶的制作工藝相比，本發(fā)明通過(guò)堆渥工藝和先高溫后低溫的干燥工藝相結(jié)合，能夠使得所制作的鐵皮石斛葉茶的滋味醇厚、濃郁、具蜜香，且無(wú)酸澀味。

(4)本發(fā)明提供的一種鐵皮石斛葉茶的制作方法，步驟六的堆渥工藝步驟中，堆渥過(guò)程是為了產(chǎn)生濕熱作用，此濕熱作用能夠促進(jìn)鐵皮石斛葉內(nèi)部物質(zhì)的降解，進(jìn)而為所制得的鐵皮石斛葉茶的香氣、滋味的形成奠定基礎(chǔ)。另外，該堆渥工藝步驟能夠降解鐵皮石斛葉內(nèi)部的淀粉和多糖，進(jìn)而提高所制得的鐵皮石斛葉茶的醇和度和甜香度。

(5)本發(fā)明提供的一種鐵皮石斛葉茶的制作方法，步驟三萎凋工藝步驟中，鐵皮石斛葉的失水率達(dá)到45％～55％時(shí)最適宜下一步的揉捻工藝，如果鐵皮石斛葉失水過(guò)高或過(guò)低，均不利于揉捻，具體表現(xiàn)為鐵皮石斛葉在揉捻后保持不了其完整性。

(6)本發(fā)明提供的一種鐵皮石斛葉茶的制作方法，具有方法簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，并能夠適用于大規(guī)模生產(chǎn)的特點(diǎn)。另外，本發(fā)明所制得的鐵皮石斛葉茶成條狀，造型美觀，且具有茶底透亮和口感佳的優(yōu)點(diǎn)。

說(shuō)明書附圖

圖1是不同月份鐵皮石斛葉多糖、水浸出物和總酚含量的比較圖。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題、技術(shù)方案及有益效果更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

實(shí)施例1。

一種鐵皮石斛葉茶的制作方法，它包括以下步驟：

步驟一，原料準(zhǔn)備：采摘新鮮的鐵皮石斛的嫩葉作為原料；

步驟二，原料檢測(cè)：將步驟一采摘的新鮮的鐵皮石斛葉進(jìn)行重金屬和農(nóng)藥殘留檢測(cè)，以保證重金屬和農(nóng)藥殘留達(dá)標(biāo)；

步驟三，萎凋工藝：采用日光曬的方法使新鮮的鐵皮石斛葉失水50％；

步驟四，揉捻工藝：將經(jīng)萎凋工藝步驟的鐵皮石斛葉投入揉捻機(jī)中進(jìn)行揉捻60min，當(dāng)鐵皮石斛葉緊卷成條，無(wú)松散折疊現(xiàn)象，手握所揉捻的鐵皮石斛葉有葉汁溢出即可結(jié)束揉捻；其中，整個(gè)揉捻過(guò)程的加壓原則是“輕-重-輕”原則；

步驟五，解塊工藝：將步驟四中結(jié)束揉捻的鐵皮石斛葉經(jīng)茶葉解塊機(jī)或手工進(jìn)行解塊；

步驟六，堆渥工藝：將步驟五解塊后的鐵皮石斛葉放入竹子制作的框內(nèi)進(jìn)行堆渥4.5h，且堆渥高度為10cm，并控制堆渥環(huán)境的溫度為26℃，堆渥環(huán)境的濕度為85％；

步驟七，干燥工藝：將完成堆渥工藝的鐵皮石斛葉放入烘干機(jī)內(nèi)，先進(jìn)行高溫干燥，攤晾60min后，再進(jìn)行低溫干燥，即制得鐵皮石斛葉茶。本實(shí)施例中，高溫干燥的溫度為120℃，高溫干燥的時(shí)間為30min，低溫干燥的溫度為105℃，低溫干燥的時(shí)間為60min。

實(shí)施例2。

一種鐵皮石斛葉茶的制作方法，它包括以下步驟：

步驟一，原料準(zhǔn)備：采摘新鮮的鐵皮石斛的嫩葉作為原料；

步驟二，原料檢測(cè)：將步驟一采摘的新鮮的鐵皮石斛葉進(jìn)行重金屬和農(nóng)藥殘留檢測(cè)，以保證重金屬和農(nóng)藥殘留達(dá)標(biāo)；

步驟三，萎凋工藝：采用鼓風(fēng)吹的方法使新鮮的鐵皮石斛葉失水45％；

步驟四，揉捻工藝：將經(jīng)萎凋工藝步驟的鐵皮石斛葉投入揉捻機(jī)中進(jìn)行揉捻50min，當(dāng)鐵皮石斛葉緊卷成條，無(wú)松散折疊現(xiàn)象，手握所揉捻的鐵皮石斛葉有葉汁溢出即可結(jié)束揉捻；其中，整個(gè)揉捻過(guò)程的加壓原則是“輕-重-輕”原則；

步驟五，解塊工藝：將步驟四中結(jié)束揉捻的鐵皮石斛葉經(jīng)茶葉解塊機(jī)或手工進(jìn)行解塊；

步驟六，堆渥工藝：將步驟五解塊后的鐵皮石斛葉放入竹子制作的框內(nèi)進(jìn)行堆渥3h，且堆渥高度為5cm，并控制堆渥環(huán)境的溫度為25℃，堆渥環(huán)境的濕度為80％；

步驟七，干燥工藝：將完成堆渥工藝的鐵皮石斛葉放入烘干機(jī)內(nèi)，先進(jìn)行高溫干燥，攤晾50min后，再進(jìn)行低溫干燥。本實(shí)施例中，高溫干燥的溫度為115℃，高溫干燥的時(shí)間為40min，低溫干燥的溫度為100℃，低溫干燥的時(shí)間為70min；

步驟八，精制工藝：將經(jīng)干燥工藝的鐵皮石斛葉進(jìn)行篩除碎末，然后剔除鐵皮石斛葉中的粗老葉，即得到精制的鐵皮石斛葉茶。

實(shí)施例3。

一種鐵皮石斛葉茶的制作方法，它包括以下步驟：

步驟一，原料準(zhǔn)備：采摘新鮮的鐵皮石斛的嫩葉作為原料；

步驟二，原料檢測(cè)：將步驟一采摘的新鮮的鐵皮石斛葉進(jìn)行重金屬和農(nóng)藥殘留檢測(cè)，以保證重金屬和農(nóng)藥殘留達(dá)標(biāo)；

步驟三，萎凋工藝：采用空凋制冷的方法使新鮮的鐵皮石斛葉失水55％；

步驟四，揉捻工藝：將經(jīng)萎凋工藝步驟的鐵皮石斛葉投入揉捻機(jī)中進(jìn)行揉捻70min，當(dāng)鐵皮石斛葉緊卷成條，無(wú)松散折疊現(xiàn)象，手握所揉捻的鐵皮石斛葉有葉汁溢出即可結(jié)束揉捻；其中，整個(gè)揉捻過(guò)程的加壓原則是“輕-重-輕”原則；

步驟五，解塊工藝：將步驟四中結(jié)束揉捻的鐵皮石斛葉經(jīng)茶葉解塊機(jī)或手工進(jìn)行解塊；

步驟六，堆渥工藝：將步驟五解塊后的鐵皮石斛葉放入竹子制作的框內(nèi)進(jìn)行堆渥6h，且堆渥高度為15cm，并控制堆渥環(huán)境的溫度為27℃，堆渥環(huán)境的濕度為90％；

步驟七，干燥工藝：將完成堆渥工藝的鐵皮石斛葉放入烘干機(jī)內(nèi)，先進(jìn)行高溫干燥，攤晾70min后，再進(jìn)行低溫干燥。本實(shí)施例中，高溫干燥的溫度為125℃，高溫干燥的時(shí)間為20min，低溫干燥的溫度為110℃，低溫干燥的時(shí)間為50min；

步驟八，精制工藝：將經(jīng)干燥工藝的鐵皮石斛葉進(jìn)行篩除碎末，然后剔除鐵皮石斛葉中的粗老葉，即得到精制的鐵皮石斛葉茶。

實(shí)施例4。

一種鐵皮石斛葉茶的制作方法，它包括以下步驟：

步驟一，原料準(zhǔn)備：采摘新鮮的鐵皮石斛的嫩葉作為原料；

步驟二，原料檢測(cè)：將步驟一采摘的新鮮的鐵皮石斛葉進(jìn)行重金屬和農(nóng)藥殘留檢測(cè)，以保證重金屬和農(nóng)藥殘留達(dá)標(biāo)；

步驟三，萎凋工藝：采用空調(diào)抽濕的方法使新鮮的鐵皮石斛葉失水48％；

步驟四，揉捻工藝：將經(jīng)萎凋工藝步驟的鐵皮石斛葉投入揉捻機(jī)中進(jìn)行揉捻55min，當(dāng)鐵皮石斛葉緊卷成條，無(wú)松散折疊現(xiàn)象，手握所揉捻的鐵皮石斛葉有葉汁溢出即可結(jié)束揉捻；其中，整個(gè)揉捻過(guò)程的加壓原則是“輕-重-輕”原則；

步驟五，解塊工藝：將步驟四中結(jié)束揉捻的鐵皮石斛葉經(jīng)茶葉解塊機(jī)或手工進(jìn)行解塊；

步驟六，堆渥工藝：將步驟五解塊后的鐵皮石斛葉放入竹子制作的框內(nèi)進(jìn)行堆渥4h，且堆渥高度為8cm，并控制堆渥環(huán)境的溫度為26℃，堆渥環(huán)境的濕度為83％；

步驟七，干燥工藝：將完成堆渥工藝的鐵皮石斛葉放入烘干機(jī)內(nèi)，先進(jìn)行高溫干燥，攤晾55min后，再進(jìn)行低溫干燥。本實(shí)施例中，高溫干燥的溫度為118℃，高溫干燥的時(shí)間為38min，低溫干燥的溫度為103℃，低溫干燥的時(shí)間為65min；

步驟八，精制工藝：將經(jīng)干燥工藝的鐵皮石斛葉進(jìn)行篩除碎末，然后剔除鐵皮石斛葉中的粗老葉，即得到精制的鐵皮石斛葉茶。

實(shí)施例5。

一種鐵皮石斛葉茶的制作方法，它包括以下步驟：

步驟一，原料準(zhǔn)備：采摘新鮮的鐵皮石斛的嫩葉作為原料；

步驟二，原料檢測(cè)：將步驟一采摘的新鮮的鐵皮石斛葉進(jìn)行重金屬和農(nóng)藥殘留檢測(cè)，以保證重金屬和農(nóng)藥殘留達(dá)標(biāo)；

步驟三，萎凋工藝：采用日光曬的方法使新鮮的鐵皮石斛葉失水52％；

步驟四，揉捻工藝：將經(jīng)萎凋工藝步驟的鐵皮石斛葉投入揉捻機(jī)中進(jìn)行揉捻65min，當(dāng)鐵皮石斛葉緊卷成條，無(wú)松散折疊現(xiàn)象，手握所揉捻的鐵皮石斛葉有葉汁溢出即可結(jié)束揉捻；其中，整個(gè)揉捻過(guò)程的加壓原則是“輕-重-輕”原則；

步驟五，解塊工藝：將步驟四中結(jié)束揉捻的鐵皮石斛葉經(jīng)茶葉解塊機(jī)或手工進(jìn)行解塊；

步驟六，堆渥工藝：將步驟五解塊后的鐵皮石斛葉放入竹子制作的框內(nèi)進(jìn)行堆渥5h，且堆渥高度為12cm，并控制堆渥環(huán)境的溫度為25℃，堆渥環(huán)境的濕度為88％；

步驟七，干燥工藝：將完成堆渥工藝的鐵皮石斛葉放入烘干機(jī)內(nèi)，先進(jìn)行高溫干燥，攤晾65min后，再進(jìn)行低溫干燥。本實(shí)施例中，高溫干燥的溫度為122℃，高溫干燥的時(shí)間為25min，低溫干燥的溫度為108℃，低溫干燥的時(shí)間為55min；

步驟八，精制工藝：將經(jīng)干燥工藝的鐵皮石斛葉進(jìn)行篩除碎末，然后剔除鐵皮石斛葉中的粗老葉，即得到精制的鐵皮石斛葉茶。

鐵皮石斛葉茶的品質(zhì)評(píng)價(jià)：

上述實(shí)施例1的一種鐵皮石斛葉茶的制作方法所制作的鐵皮石斛葉茶的品質(zhì)評(píng)價(jià)方法，它包括以下步驟：

步驟一，選用的材料為10月份和次年2月份采摘的新鮮的鐵皮石斛葉作為兩種原料，然后分別依據(jù)實(shí)施例1的一種鐵皮石斛葉茶的制作方法進(jìn)行制作兩種鐵皮石斛葉茶；

步驟二，對(duì)步驟一制得的兩種鐵皮石斛葉茶分別測(cè)定氨基酸含量、多糖含量、水浸出物含量、總酚含量；

步驟三，數(shù)據(jù)處理：對(duì)步驟二測(cè)定的氨基酸含量、多糖含量、水浸出物含量和總酚含量的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析；

步驟四，數(shù)據(jù)分析：比較兩種鐵皮石斛葉茶經(jīng)方差分析后的氨基酸含量、多糖含量、水浸出物含量和總酚含量的數(shù)據(jù)；

步驟五，得出結(jié)論：10月份采摘的鐵皮石斛葉比較嫩，水分含量較高，未完全成熟，烘制后的茶條呈墨青色；次年2月份采摘的鐵皮石斛葉成熟，水分含量偏低，加工的茶條顏色呈深墨青色；次年2月份采摘制作的鐵皮葉茶的多糖、水浸出物以及總酚含量均顯著高于10月份采摘制作的鐵皮石斛葉茶；氨基酸營(yíng)養(yǎng)均衡性也是次年2月份采摘制作的鐵皮葉茶較好；同時(shí)從口感審評(píng)結(jié)果來(lái)看，也是次年2月份采摘制作的鐵皮葉茶口感更佳，沒(méi)有傳統(tǒng)制作的青味、酸味，且香味濃郁；可見(jiàn)，次年2月份采摘制作的鐵皮葉茶更具營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和更好的風(fēng)味。

其中，氨基酸含量測(cè)定方法如下：

(1)標(biāo)準(zhǔn)溶液制備：準(zhǔn)確稱取10mg氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品，用水溶解并定容至50ml，得到200mg/L的游離氨基酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，臨用時(shí)用空白溶劑稀釋得到1.0、5.0、10.0mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。

(2)樣品制備：取0.25g樣品置于250ml容量瓶中，加入0.1mol/L鹽酸超聲處理30min，過(guò)濾，再取2ml水解處理，取水解前后的溶液各100μl于液相色譜樣品小瓶中，60℃加熱并氮?dú)獯蹈桑〕龊?，加?00μl 3.5mol/L鹽酸正丁醇，用鉗口鋁蓋密封樣品瓶，置于60℃烘箱中衍生化反應(yīng)30min。然后開(kāi)啟密封蓋，60℃加熱并氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?ml 80％乙腈振蕩1min，溶解，并用0.45μm針筒式濾器過(guò)濾，于LC-MS/MS測(cè)定。

(3)色譜條件：色譜柱：BDS HYPERSIL C18(2.1mm×150mm，2.4μm)，流動(dòng)相：乙腈-水(0.2％的甲酸，10mmol.l^-1甲酸銨)梯度洗脫，流速：0.2ml/min，進(jìn)樣量1μl。

(4)質(zhì)譜條件：離子源：電噴霧(ESI)，正離子電離模式；干燥氣(N₂)流量：9.0L/min；溫度：350℃；霧化氣(N₂)壓力：275.8kPa；電噴霧電壓：4000V；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式。

其中，多糖含量的測(cè)定方法如下：

采用改良的苯酚－硫酸法測(cè)定多糖含量(中華人民共和國(guó)藥典，2010)。

(1)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液制備：精密稱定干重至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品0.1g，用蒸餾水定容至100mL，取10mL溶液至100mL容量瓶中加蒸餾水定容至刻度，制成每1mL含100μg的溶液，即得。

(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取對(duì)照品溶液0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，分別置10mL具塞試管中，各加蒸餾水補(bǔ)至1.0mL，精密加入5％苯酚溶液1mL(臨用新配)，搖勻，再精密加硫酸5mL，搖勻，置沸水浴中加熱20分鐘，取出，置冰浴中冷卻5分鐘，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在488nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

(3)供試品溶液的制備：取樣品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.3g，精密稱定，加水100mL(V₁)，加熱回流2小時(shí)，放冷，轉(zhuǎn)移至100mL量瓶中，用少量水分次洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液2mL(V₂)，置15mL離心管中，精密加入無(wú)水乙醇10mL，搖勻，冷藏1小時(shí)，取出，4000ppm離心20分鐘，棄上清液，沉淀加80％乙醇洗滌2次，每次8mL，棄上清液，沉淀加熱水溶解，轉(zhuǎn)移至10mL(V₃)量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，即得。

(4)石斛多糖含量的測(cè)定：精密量取供試品溶液0.3mL(V₄)，蒸餾水0.7mL，置10mL具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中無(wú)水葡萄糖的量，計(jì)算，即得

C：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的多糖含量(mg)

V₁：樣品提取時(shí)定容體積mL；

V₂：沉淀多糖時(shí)取液量，mL；

V₃：測(cè)定多糖時(shí)定容體積mL；

V₄：樣品測(cè)定時(shí)取樣液體積mL；

m：樣品稱量質(zhì)量，g

其中，水浸出物含量測(cè)定方法如下：

參照2010版《中華人民共和國(guó)藥典》的方法(國(guó)家藥典委員會(huì).2010，中華人民共和國(guó)藥典(一部).北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社.)。

石斛干燥至恒重后粉碎，使能過(guò)2號(hào)篩，并混合均勻。精密稱取石斛干粉2g，置于250mL錐形瓶中，精密加水100mL(V₁)，稱定重量，靜置1h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持沸騰1h。待冷卻后取出，密塞，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過(guò)，精密量取濾液25mL(V₂)，置于干燥至恒重的蒸發(fā)皿(m₁)中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置于干燥器中冷卻30min，迅速精密稱定重量(m₂)。

m₁：干燥至恒重的蒸發(fā)皿凈重；

m₂：干燥至恒重的蒸發(fā)皿加濾液的質(zhì)量；

V₁：提取液的體積；

V₂：測(cè)定液的體積。

其中，總酚含量測(cè)定方法如下：

參考李娟(2013)等方法改良(李娟,麻曉雪,李順祥,等.2013,，鐵皮石斛中總酚的含量測(cè)定.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,24:60-62.)。

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:對(duì)照品溶液的制備：精密稱取干燥至恒重的沒(méi)食子酸對(duì)照品5mg，用蒸餾水溶解并定容至25mL棕色量瓶中，搖勻即得0.2mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

(2)標(biāo)準(zhǔn)溶液的測(cè)定:精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1mL，0.2mL，0.3mL，0.4mL，0.5mL置于分別按照表中所示取標(biāo)準(zhǔn)溶液置于15mL試管中，加0.5mL福林酚試劑，充分搖勻，再加入1.5mL 20％Na₂CO₃，搖勻，最后用蒸餾水定容至10mL，搖勻，50℃水浴10min，以相應(yīng)試劑為空白，765nm處測(cè)定吸光度。

(3)樣品提取液制備:精密稱取0.3g(m)樣品置100mL具塞錐形瓶，加50％乙醇50mL(V₁)，稱定重量，于80℃水浴回流1h后取出冷卻，再稱重，用50％乙醇補(bǔ)足減失重量，過(guò)濾，續(xù)濾液作為供試品。量取1mL(V₂)待測(cè)液，如標(biāo)曲測(cè)定方法測(cè)定其吸光值，根據(jù)回歸方程計(jì)算其含量：

C-----根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的沒(méi)食子酸含量，mg

V₁：提取液體積(mL)

V₂：測(cè)定時(shí)提取液的體積(mL)

M：樣品質(zhì)量(mg)

其中，數(shù)據(jù)處理：

采用氨基酸比值系數(shù)法(王芳,高瑜瓏,阮琴,等.2015,山茶花氨基酸組成分析及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)價(jià).浙江師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),03:342-347.)對(duì)石斛花的氨基酸進(jìn)行分析評(píng)價(jià)，即以世界衛(wèi)生組織(WHO)/聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)的標(biāo)準(zhǔn)模式譜作為對(duì)照，計(jì)算鐵皮石斛葉中必需氨基酸的各項(xiàng)指標(biāo)：

氨基酸比值(RAA)＝鐵皮石斛葉中某種氨基酸的含量/標(biāo)準(zhǔn)模式譜中同種氨基酸的含量

氨基酸比值系數(shù)(RC)＝RAA/RAA的均數(shù)

氨基酸比值系數(shù)分(SRC)＝100-CV×100，式中CV為RC的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

鐵皮石斛葉原料10月采收的比較嫩，水分含量較高，未完全成熟，烘制后的茶條呈墨青色；次年2月份采收的材料成熟，水分含量偏低，加工的茶條顏色呈深墨青色。

多糖、水溶性浸出物含量測(cè)定方法參考《中華人民共和國(guó)藥典》(2010)經(jīng)典方法，使之所測(cè)鐵皮石斛葉的多糖和水溶性浸出物含量與藥典規(guī)定的其鐵皮石斛莖的多糖及茶葉的水溶性浸出物含量具有可比性。

氨基酸含量數(shù)據(jù)處理對(duì)其藥效氨基酸和鮮味氨基酸等指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，旨在比較不同采收季節(jié)鐵皮石斛葉的藥效和口感。

實(shí)驗(yàn)：

1.不同烘制方法鐵皮石斛葉的口感比較

1.1參考綠茶工藝的烘制方法

(1)采集鐵皮石斛葉片；(2)萎凋，使其變軟，失去45-55％水分；(3)高溫殺青；(4)揉捻；(5)85℃烘制約2h。

1.2參考紅茶工藝的烘制方法

與專利所述方法同。

1.3兩種工藝茶制品的口感審評(píng)

表1兩種工藝茶制品口感審評(píng)表

2.不同月份鐵皮石斛葉的營(yíng)養(yǎng)成分含量比較

2.1實(shí)驗(yàn)材料：利用本發(fā)明最佳方法制備的同一鐵皮石斛品種10月份和次年2月鐵皮石斛葉茶

2.2不同月份鐵皮石斛葉茶營(yíng)養(yǎng)成分含量比較

(1)多糖、水溶性浸出物和總酚含量比較

由圖1可知，兩個(gè)月份之間鐵皮葉茶中的多糖、水浸出物以及總酚含量都存在著顯著性差異。2月份葉茶中多糖、水浸出物含量和總酚含量分別為13.82％、50.53％、1.18％，顯著高于10月份采摘制作的葉茶，因此，若根據(jù)這三種營(yíng)養(yǎng)成分高低確定鐵皮石斛葉茶的采收季節(jié)的話，則2月份采摘為宜。

(2)氨基酸含量比較

表2鐵皮葉茶中的氨基酸組成及含量比較(％)

注：*為必需氨基酸；#為藥效氨基酸或藥效氨基酸總量；F為鮮味氨基酸(天冬氨酸(Asp)+谷氨酸(Glu))的量。

表3鐵皮葉茶中必需氨基酸的組成比例與WHO/FAO推薦的氨基酸模式譜的比較

表4鐵皮葉茶中的氨基酸比值系數(shù)分

由表2可知，2月份和10月份采摘的鐵皮石斛葉茶中各氨基酸含量之間幾乎均有明顯的差別，2月份材料中各種氨基酸的含量幾乎均顯著高于10月份，說(shuō)明10月份葉茶中水解氨基酸含量較少。不同月份的鐵皮葉茶中均含有蘇氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和賴氨酸7種必需氨基酸，2月份和10月份葉茶中必需氨基酸含量分別占氨基酸總量的40％和42％，均符合WHO/FAO規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)(40％)；必需氨基酸總量占非必需氨基酸總量的比率分別為66％和72％，均高于WHO/FAO的規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)(60％)。不同月份鐵皮葉茶均含有精氨酸、甘氨酸、蛋氨酸等9種藥效氨基酸，其含量分別達(dá)到氨基酸總量的66％、68％。此外，2月份和10月份葉茶中的鮮味氨基酸(天冬氨酸和谷氨酸)含量均占氨基酸總量的24％。以上分析在一定程度上說(shuō)明了鐵皮葉茶具有較高的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值，并且還具有較好的風(fēng)味。

由表3可知，不同月份的鐵皮石斛葉茶中，除了蛋氨酸+半胱氨酸占總氨基酸的比例低于標(biāo)準(zhǔn)模式譜外，其他必需氨基酸的比例均明顯高于或接近于標(biāo)準(zhǔn)模式譜，說(shuō)明鐵皮葉茶中必需氨基酸的組成比例較為均衡，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。

由表4可知，在不同月份鐵皮葉茶的各種必需氨基酸中，蛋氨酸+半胱氨酸的氨基酸比值系數(shù)(RC)值均最小，為第一限制氨基酸。2月份和10月份葉茶的SRC分別為63.64和61.56，2月份葉茶的SRC明顯高于10月份，說(shuō)明2月份采摘制作的葉茶具有更均衡的營(yíng)養(yǎng)。

綜上所述，2月份鐵皮葉茶的多糖、水浸出物以及總酚含量均顯著高于10月份；氨基酸營(yíng)養(yǎng)均衡性也是2月份葉茶較好；同時(shí)從口感審評(píng)結(jié)果來(lái)看，也是2月份鐵皮石斛葉口感更佳，沒(méi)有傳統(tǒng)制作的青味、酸味，香味濃郁?？梢?jiàn)，2月份采摘的鐵皮石斛葉制作的茶葉更具營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和更好的風(fēng)味。

最后應(yīng)當(dāng)說(shuō)明的是，以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)地說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。