本發(fā)明屬于油料作物加工技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及一種結(jié)合酶與超聲處理由帶內(nèi)種皮核桃仁中提取多酚物質(zhì)的方法，還涉及根據(jù)所述方法得到的核桃多酚粗提物的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

核桃(Juglans regiaL.)又名胡桃、弟桃，是胡桃科胡桃屬植物，位居“四大干果”之首，是一種藥食兼?zhèn)涞膬?yōu)良經(jīng)濟作物。核桃仁富含油脂、蛋白質(zhì)及維生素等營養(yǎng)成份，并具有健胃、補血、潤肺、益腎和補腦等多種功效，是一種很好的滋補品，營養(yǎng)豐富而味美，故又有“萬歲子”、“長壽果”、“益智果”、“美容果”的美譽?，F(xiàn)代研究表明核桃仁的抗氧化、防衰老和預(yù)防心血管疾病等多重功效主要歸功于核桃仁中豐富的油脂、蛋白質(zhì)和多酚類物質(zhì)。核桃仁含油量很高，一般為40～65％，有的高達80％，核桃油脂肪酸組成中亞油酸約占61％，油酸約占23％，亞麻酸約占7.0％，同時含有ω-3和ω-6系列多不飽和脂肪酸使得其在降低血脂和血清膽固醇方面具有顯著的優(yōu)勢，是藥用油或老人和嬰幼兒營養(yǎng)油的良好選擇。在國際市場上，核桃油同橄欖油一樣都倍受消費者青睞，前景非常廣闊。核桃蛋白18種氨基酸種類齊全，且人體所需的8種必需氨基酸含量合理，對人體有重要功能的谷氨酸、天冬氨酸、精氨酸含量較高，作為一種全價的營養(yǎng)蛋白，其可消化率達87.2％。核桃仁皮的主要成分是纖維素、果膠質(zhì)、單寧和色素等。在核桃仁的皮與仁之間存在著果膠質(zhì)，使得仁與皮之間結(jié)合的比較牢固，難于分開。研究表明，核桃仁中的單寧主要存在于表皮中(占總量的90％以上)，是產(chǎn)生苦澀味及導(dǎo)致果實褐變的最主要原因。

目前，在核桃的開發(fā)利用中，堿液浸泡是主要的前處理手段。通過在一定溫度下的堿液浸泡，核桃的皮與仁之間的果膠層先被溶解，然后整皮脫落，可被水流沖洗去除。堿液浸泡法的機理是：果膠質(zhì)在堿液作用下會發(fā)生水解，一部分果膠被解聚，其在水中的溶解度得以提高；另一方面，果膠酸在堿的作用下轉(zhuǎn)變成水溶性好的果膠酸鈉等鹽類。所以堿液浸泡可以較充分地去除果膠質(zhì)，脫除核桃皮。然而該法的缺陷也非常明顯。首先，核桃皮中大量有益的多酚類物質(zhì)被堿液破壞或在脫皮過程中浪費掉；其次，部分核桃仁的形狀不規(guī)則，帶有皺褶的夾縫中的核桃皮往往無法徹底脫除；再次，盡管熱堿液浸泡時間目前已經(jīng)有所縮短(約10min)，經(jīng)過處理的核桃仁還是會發(fā)生蛋白質(zhì)變性和流失等問題。吳世蘭等(吳世蘭，秦禮康，蔣成剛，張帥.核桃仁堿液去皮過程中營養(yǎng)功能成分動態(tài)變化.中國油脂,2013,38(2):84-87)對核桃仁堿液去皮過程中營養(yǎng)功能成分的變化進行了研究。結(jié)果表明：堿液去皮后，核桃仁的粗蛋白、粗脂肪含量分別減少了24.7％、4.1％；必需氨基酸評分(AAS)從1.82降低到1.28；核桃仁內(nèi)種皮總酚和總黃酮含量分別下降81.7％和72.2％；核桃仁蛋白的溶解性也明顯降低。去皮核桃仁在后續(xù)烘干過程中顏色變成暗黃色，且核桃仁油的酸值(KOH)和過氧化值增加(分別增加0.43mg/g、1.78mmol/kg)。堿液去皮工藝廢水COD為17500～21100mg/L，遠遠超過了國家二級污水排放標準。

盡管有研究對堿液嘗試過回收利用，但收益與成本比例并不高。宋浩等對核桃仁去衣液中黃酮的回收開展了研究(宋浩，趙聲蘭，陳朝銀，李汝榮，張?zhí)熵?，武萬興，史丹丹.核桃仁去衣液中核桃黃酮的回收及抗氧化活性研究.食品工業(yè)科技,2015,36(6):94-98,103.)，采用AB-8型大孔樹脂分離和純化核桃黃酮，結(jié)果表明AB-8樹脂在優(yōu)化的工藝條件下可回收81.73％～86.51％的核桃黃酮，產(chǎn)品純度61.35％～74.16％。此法不僅周期較長，而且堿液中不穩(wěn)定的其他多酚類物質(zhì)也被浪費掉。

因此，改進核桃內(nèi)種皮的處理方式，是實現(xiàn)核桃仁高效開發(fā)利用的主要著眼點之一。榮瑞芬等(榮瑞芬，歷重先，劉雪崢，裴東，陳佳，王怡婷.核桃內(nèi)種皮營養(yǎng)與功能成分初步分析研究.食品科學(xué),2008,29(11):541-543.)對核桃內(nèi)種皮營養(yǎng)與功能成分進行了分析研究,發(fā)現(xiàn)核桃內(nèi)種皮中總酚和黃酮類分別為1.038g/100g和0.744g/100g，分別是仁中含量的12.51和1.78倍，表明核桃內(nèi)種皮具有較高的營養(yǎng)和保健價值。Colaric等(Colaric M,Veberic R,Solar A,Hudina M,Stampar F.Phenolic Acids,Syringaldehyde,and Juglone in Fruits of Different Cultivars of Juglans regia L.Journal of Agricultural and Food Chemistry,2005,53(16):6390-6396.)采用高效液相色譜分析了核桃及其內(nèi)種皮中的酚酸(綠原酸、咖啡酸、香豆酸、阿魏酸、芥子酸、鞣花酸、丁香酸)、丁香醛及胡桃醌等酚類物質(zhì)，結(jié)果表明丁香酸、胡桃醌、鞣花酸是核桃和內(nèi)種皮中含量較高的物質(zhì)，核桃中三者含量分別為33.83、11.75、5.90mg/100g，而核桃內(nèi)種皮中三者含量則分別為1003.24、317.90、128.98mg/100g，均為核桃仁中20至30倍左右。萬政敏等(萬政敏,郝艷賓,楊春梅,齊建勛,趙麗芹,王克建.核桃仁種皮中的多酚類物質(zhì)高壓液相色譜分析.食品工業(yè)科技，2007，28(7):212-213,224.)采用高效液相色譜對核桃內(nèi)種皮中的多酚類物質(zhì)進行了分析研究。在核桃內(nèi)種皮中檢測到?jīng)]食子酸、綠原酸、咖啡酸、對羥基苯甲酸、香豆酸和阿魏酸等17種酚酸類物質(zhì)，含量最高的沒食子酸達到146.2mg/100g干樣，而在無種皮的核桃仁中只檢測到7種酚酸類物質(zhì)，其中沒食子酸的含量僅為5.3mg/100g干樣，與前述研究結(jié)論基本一致。

其中一種思路是將核桃內(nèi)種皮與核桃仁分離開再分別加以利用。周曄等(周曄；王偉；裴東.一種核桃內(nèi)種皮的脫除方法.CN201210552825.5)公開了一種核桃內(nèi)種皮的脫除方法。該方法步驟如下：(1)將待處理的核桃浸漬于液氮中進行冷凍；(2)將處理后的核桃置于空氣中，直至所述核桃的表面出現(xiàn)白霜；(3)將出現(xiàn)白霜的核桃仁置于維生素C的水溶液中進行復(fù)水處理；(4)將經(jīng)復(fù)水后的核桃依次進行超聲和震蕩處理，然后經(jīng)沖刷，得到脫除內(nèi)種皮的核桃仁以及脫除的內(nèi)種皮。該發(fā)明本質(zhì)上是利用不同結(jié)構(gòu)組成的物質(zhì)熱脹冷縮系數(shù)不同的原理，進而實現(xiàn)內(nèi)種皮與核桃仁的分離。盡管該法相對環(huán)保、處理難度適中，但使用液氮耗費較大，且該法回收的內(nèi)種皮中多酚流失嚴重(僅保留約28％的多酚物質(zhì))。王群學(xué)等(王群學(xué)，趙西周，賀躍東，梁少華，張富強.核桃仁連續(xù)脫皮的方法.CN201510261863.9)公布了一種核桃仁連續(xù)脫皮的方法。利用堿液浸泡和高壓沖洗相結(jié)合對內(nèi)種皮進行分離，但由于帶皮核桃仁原料往往含有不少碎粒，高壓沖擊造成了很可觀的核桃仁損失，且種皮中多酚也嚴重流失?？惮|麗等對核桃仁去皮方法進行了優(yōu)化研究(康瑋麗，唐軍虎，敬思群.核桃仁去皮方法優(yōu)化.食品與發(fā)酵工業(yè),2013,36(8):127-131)，發(fā)現(xiàn)采用熱風(fēng)烘烤-微波聯(lián)用法可去除核桃仁皮，優(yōu)化工藝條件為：烘烤溫度130℃，烘烤時間16min，微波功率769W，微波時間51s，核桃仁脫皮率為98.01％，核桃油過氧化值為1.65meq/kg。由于核桃油中亞麻酸比例較高，因此這一高強度熱處理不僅會增加油脂過氧化值，還可能造成其它不利影響。

另一種思路是先對內(nèi)種皮中多酚類物質(zhì)進行提取，然后再開發(fā)利用核桃仁。早在1896年，Osborne和Campbell等(Osborne,T.B.；Campbell,G.F.Conglutin and vitellin.J.Am.Chem.Soc.,1896,18:609-623.)研究發(fā)現(xiàn)，用熱水處理英國核桃可除去核桃內(nèi)種皮，達到去除單寧的目的，同時也將脫脂核桃粉的球蛋白溶出率從原來的3.5％左右提高到20％。然而，單純的熱水浸泡，多酚提取效率不高且蛋白等損失也比較高。國內(nèi)有些研究者以純核桃仁內(nèi)種皮為原料，研究了多酚的提取工藝。如魏靜和郝利平(魏靜，郝利平.核桃仁種皮中多酚的提取工藝研究.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2010,30(2):150-153.)研究了核桃仁種皮中多酚的提取工藝。通過對乙醇濃度、料液比、提取時間、提取溫度等因素的探討，確定較佳工藝條件為：60％乙醇、料液比1:8、提取時間30min、提取溫度55℃，實現(xiàn)多酚的粗提得率571mg/g。但此粗提物的多酚類物質(zhì)含量未見報道。張春梅等也以核桃內(nèi)種皮為原料開展了多酚提取工藝的研究(張春梅，陳朝銀，趙聲蘭，黃再強，樊啟猛.核桃內(nèi)種皮多酚提取工藝及其體外抗氧化活性的初步研究.中國釀造,2014,33(7):130-134.)，確定核桃內(nèi)種皮多酚的提取工藝條件為：乙醇體積分數(shù)45％、液固比60:1(mL/g)、提取溫度70℃、提取時間60min。在此條件下，多酚得率為250.5mg/g。王莉等(王莉，趙新亮，董文，賀志龍，李佳，馬亞茹.核桃仁種皮中類黃酮提取工藝的比較.食品與發(fā)酵科技,2013,49(4):90-92.)也以核桃仁種皮為原料，比較了其中類黃酮的提取工藝，得出提取類黃酮的優(yōu)化條件為：水浴溫度65℃，乙醇濃度60％，提取時間為1.5h，固液比為1∶30。上述研究對多酚類物質(zhì)的提取有參考價值，但由于需要先分離出核桃仁內(nèi)種皮，在實際應(yīng)用時受到很大限制。

其他一些新型提取技術(shù)也被應(yīng)用于核桃仁加工上。正如郜海燕等(郜海燕,李興飛,陳杭君,房祥軍.山核桃多酚物質(zhì)提取及抗氧化研究進展.食品科學(xué),2011,32(05):336-341)指出的，微波萃取技術(shù)和超臨界萃取技術(shù)在山核桃油的提取上已經(jīng)達到可應(yīng)用的程度，但由于多酚類物質(zhì)含量相對較低以及微波處理導(dǎo)致的局部溫升等不利因素的限制，這些技術(shù)應(yīng)用于核桃多酚物質(zhì)提取還不成熟。

考慮到核桃仁中多酚主要分布在內(nèi)種皮上，而內(nèi)種皮的物理分離還難以工業(yè)化實現(xiàn)，本發(fā)明人提出一種結(jié)合酶與超聲處理由核桃仁中提取多酚物質(zhì)的方法，在適宜的條件下，結(jié)合乙醇溶液和果膠酶和/或纖維素酶復(fù)合物的作用，利用超聲處理強化傳質(zhì)過程，實現(xiàn)對完整核桃仁的多酚物質(zhì)的高效提取。所得多酚提取液可進一步分離精制，作為抗氧化劑用于膳食補充劑、飲料、果蔬產(chǎn)品及休閑食品；提取多酚后的核桃仁可粉碎制取高品質(zhì)核桃油和低脂核桃粉，兼顧了核桃仁中主要的組分和活性成分，對核桃綜合利用具有重要參考價值。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

[要解決的技術(shù)問題]

本發(fā)明的目的是提供一種結(jié)合酶與超聲處理由帶內(nèi)種皮核桃仁中提取多酚物質(zhì)的方法。

[技術(shù)方案]

本發(fā)明以帶內(nèi)種皮的核桃仁為原料，在果膠酶和/或纖維素酶的輔助下，結(jié)合超聲處理，采用乙醇溶液將核桃仁內(nèi)種皮中的多酚類物質(zhì)高效提取出來，經(jīng)過濾分離得到多酚粗提物和脫酚核桃仁產(chǎn)品。

本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)的。

本發(fā)明涉及一種由帶內(nèi)種皮核桃仁提取核桃多酚的方法，所述方法包括下述步驟：

(1)得到帶種皮的核桃仁

對核桃進行脫殼和清理除雜，然后不經(jīng)破碎處理即可得到帶內(nèi)種皮核桃仁。

在本發(fā)明中，所述的核桃仁可以是由核桃剝殼機或手工剝殼獲得的帶內(nèi)種皮核桃仁，也可以是市售的帶內(nèi)種皮核桃仁，這是最常見的核桃仁產(chǎn)品。

帶內(nèi)種皮核桃仁不經(jīng)過破碎處理可以降低后繼聯(lián)合脫酚處理的溶液消耗，同時降低蛋白等的溶出，既有利于提高多酚粗提物的純度，也對脫酚核桃仁產(chǎn)品的品質(zhì)有利。

(2)制備多酚提取體系

按照以g計帶內(nèi)種皮核桃仁的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積之比1:3～1:15的比例，將步驟(1)得到的帶內(nèi)種皮核桃仁投入到乙醇水溶液中。其中，乙醇水溶液的體積濃度是0～20％，然后用食品級檸檬酸或鹽酸將混合物的pH調(diào)整為3.5～6.5，接著在溫度10～60℃條件下向所述混合物中加入果膠酶和/或纖維素酶復(fù)合物，酶用量為0.01～10.0U/g核桃仁，從而得到多酚提取體系。

本發(fā)明所述的多酚提取體系的準備，是充分考慮乙醇在浸提中對溶液極性和介電系數(shù)的影響、乙醇濃度和pH對酶活的影響、果膠酶和/或纖維素酶對內(nèi)種皮細胞的破壞及多酚的釋放效果而綜合確定的。在該條件下，醇溶液與果膠酶和/或纖維素酶等因素有效發(fā)揮協(xié)同作用，實現(xiàn)核桃內(nèi)種皮中多酚類物質(zhì)的充分釋放。

其中，以g計帶內(nèi)種皮核桃仁的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積之比為1:3～1:15，優(yōu)選地1:5～1:10。

乙醇水溶液的體積濃度是0～20％，如果其體積濃度高于20％，會造成纖維素酶和果膠酶的失活。優(yōu)選地，乙醇水溶液體積濃度為5～15％。當(dāng)乙醇水溶液的體積濃度為0％時，提取時間需要適當(dāng)延長。

在本發(fā)明方法中，使用食品級檸檬酸或鹽酸將帶內(nèi)種皮核桃仁與含有乙醇的水溶液的混合物的pH調(diào)整為3.5～6.5。之所以使用檸檬酸或鹽酸，是由于二者經(jīng)濟性好，且對產(chǎn)品風(fēng)味無不良影響。當(dāng)然，也可以使用檸檬酸或鹽酸混合物調(diào)整pH。所述混合物的pH為3.5～6.5，是為了滿足酶的最適pH的要求，pH值或高或低都不利于酶的高效作用。優(yōu)選地，所述混合物的pH為4.8～6.0。

所述酶是含有聚半乳糖醛酸酶活力的果膠酶和/或纖維素復(fù)合酶，即可以使用果膠酶或纖維素復(fù)合酶，也可以使用果膠酶與纖維素復(fù)合酶的復(fù)合物；當(dāng)使用的酶是果膠酶與纖維素復(fù)合酶的復(fù)合物時，二者的比例是任選的。聚半乳糖醛酸酶活力是指單位時間內(nèi)水解果膠聚半乳糖醛酸主鏈的能力。果膠酶和纖維素復(fù)合酶都是本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的，也是目前市場上銷售的產(chǎn)品，果膠酶例如是由諾維信公司生產(chǎn)銷售的SMASH，纖維素酶例如由天野酶制劑有限公司生產(chǎn)銷售的Cellulase AP3、由諾維信公司生產(chǎn)銷售的Cellic CTec2。

在本發(fā)明方法中，酶的用量是以核桃仁的重量計0.01～10.0U/g核桃仁。如果酶的用量低于0.01U/g核桃仁，會造成提取效率的下降和提取時間的延長；如果高于10.0U/g核桃仁，則會造成成本過高，甚至內(nèi)種皮的脫落。

(3)超聲處理

在超聲功率0.2～20W/g核桃仁的條件下，對步驟(2)得到的多酚提取體系進行超聲處理10～120min，提取多酚類物質(zhì)。

本發(fā)明中，超聲物理場輔助提取的作用主要是強化酶對核桃仁內(nèi)種皮相關(guān)底物的作用，實現(xiàn)對多酚類物質(zhì)的高效釋放。發(fā)明人經(jīng)過多次試驗，確定超聲功率0.2～20W/g核桃仁、超聲處理時間10～120min是合適的。在所用功率較高的情況下，時間可以適當(dāng)縮短，但中等功率結(jié)合適當(dāng)延長的時間對多酚類的提取效果更好。

(4)分離回收

對步驟(3)超聲處理后的多酚提取體系進行固液分離，分別回收脫酚核桃仁和核桃多酚浸提液。

本發(fā)明中的固液分離可以是簡單的過濾或沉降式離心等，由于核桃仁顆粒未破碎，個體較大，可以顯著提高分離效率。

所得脫酚核桃仁即可作為脫苦味(因單寧絕大部分被去除)核桃仁直接消費，也可以作為加工核桃油和核桃蛋白粉的原料。特別地，在本實驗室已經(jīng)建立了以該脫酚核桃仁為原料通過水媒法(以水為主要媒介)聯(lián)產(chǎn)原香核桃油和核桃蛋白粉的技術(shù)，實現(xiàn)核桃仁的高效綜合開發(fā)利用。

所得的核桃多酚浸提液含有一定量乙醇，可以根據(jù)生產(chǎn)需要對其進行蒸餾回收使用。

特別地，上述步驟(2)～(4)可重復(fù)1～4次以達到更好的提取效果。

(5)精制

步驟(4)得到的核桃多酚浸提液經(jīng)過真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，接著濃縮，然后經(jīng)真空冷凍干燥脫除水分，得到核桃多酚粗提物。

多酚粗提物可直接真空濃縮后經(jīng)真空冷凍干燥得到粉末產(chǎn)品。本發(fā)明方法中使用的真空濃縮和真空冷凍干燥都是本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的方法。真空濃縮例如在-1～-20kPa壓力與20～50℃溫度下進行。

根據(jù)本發(fā)明方法制備得到的核桃多酚粗提物，經(jīng)冷凍干燥后其干物質(zhì)總重量占原帶皮核桃仁的2％以上，核桃多酚粗提物中多酚類有效物含量則達到15％以上。

此外，還可采用大孔吸附樹脂和工業(yè)色譜對得到的核桃多酚粗提物進行進一步分離，制備鞣花酸、水解單寧、胡桃醌等產(chǎn)品。

核桃多酚粗提物的UPLC-PDA-MS/MS分析結(jié)果見附圖2。采用Waters公司的UPLC系統(tǒng)，色譜條件如下：Gemini C18色譜柱；柱溫35℃；流動相A：純乙腈；流動相B：1％的甲酸水溶液；流速0.3mL/min；梯度洗脫：0～0.1min/2％～2％A；0.1～18min/2％～30％A；18～20min/30％～50％A；20～25min/50％～100％A；25～27min/100％～100％A。質(zhì)譜采用負離子掃描模式，數(shù)據(jù)通過Masslynx v4.1軟件進行分析。

[有益效果]

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明主要具有以下有益效果：

(1)從帶內(nèi)種皮核桃仁中直接提取種皮中的多酚類物質(zhì)，脫酚效果與熱堿液浸泡脫除法相當(dāng)，所提取的多酚物質(zhì)可開發(fā)利用，顯著提升了本發(fā)明的經(jīng)濟價值；

(2)無需從核桃仁表面脫除內(nèi)種皮，使得本發(fā)明技術(shù)成果應(yīng)用便利性大幅改進；脫酚核桃仁的開發(fā)利用中，殘留的內(nèi)種皮對油脂提取、蛋白粉制備基本無不良影響。

(3)充分發(fā)揮生物酶處理和超聲處理的作用特性，使得核桃多酚的提取效果和效率得到大幅的改進；

(4)本發(fā)明提出的方法可為其他食品功能因子的提取提供有益參考。

【附圖說明】

圖1：本發(fā)明方法的工藝流程

圖2：本發(fā)明的核桃多酚粗提物的UPLC洗脫曲線；

其中，A為總粒子流圖；B為紫外吸收(280nm)圖。

【具體實施方式】

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的說明，但不限于實施例。

在本發(fā)明中，如無特殊說明，用于描述濃度的“％”均為重量百分比。

實施例1：本發(fā)明的核桃多酚粗提物的提取

稱取市售的帶內(nèi)種皮核桃仁(碎仁率5％左右)1000g，按照以g計核桃仁的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積之比1:4的比例，將其與4L體積濃度為5％的乙醇溶液混合，以1M的鹽酸調(diào)節(jié)體系pH至4.0，將體系溫度升至55℃，按0.2U/g核桃仁的比例加入諾維信公司的果膠酶SMASH，將得到的多酚提取體系置于超聲清洗機(如昆山舒美KQ-J2000GKDE高功率恒溫超聲波清洗器)中，按照超聲功率0.25W/g核桃仁的比例調(diào)節(jié)超聲功率250W，超聲處理120min，而后紗布過濾分別回收脫酚核桃仁和核桃多酚粗提液。將得到的脫酚核桃仁采用與上述相同的條件再次浸提，再次回收脫酚核桃仁和核桃多酚粗提液。合并兩次所得粗提液，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇后濃縮至適當(dāng)濃度，而后經(jīng)真空冷凍干燥脫除水分，得到21.6g核桃多酚粗提物粉末。經(jīng)UPLC分析，其酚酸和黃酮等有效物占比17.0％。

實施例2：本發(fā)明的核桃多酚粗提物的提取

將市售新疆紙皮核桃剝殼，得到核桃仁200g(碎仁率2％左右)，按照以g計核桃仁的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積之比1:15的比例，將其與3L的體積濃度為20％的乙醇溶液混合，以1M的檸檬酸調(diào)節(jié)體系pH至6.0，將體系溫度升至40℃，按5U/g核桃仁的比例加入諾維信公司的纖維素酶Cellic CTec2，將混合體系放置于超聲清洗機中，按照超聲功率10W/g核桃仁的比例調(diào)節(jié)超聲功率2000W，超聲處理20min，而后布氏漏斗過濾，分別回收核桃仁和浸提液。將浸提液真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇后濃縮至適當(dāng)濃度，而后經(jīng)真空冷凍干燥脫除水分，得到4.76g核桃多酚粗提物粉末。經(jīng)UPLC分析，其酚酸和黃酮等有效物占比15.4％。

實施例3：本發(fā)明的核桃多酚粗提物的提取

按照以g計核桃仁的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積之比1:10的比例，將市售帶內(nèi)種皮核桃仁(碎仁率10％左右)500g與5L體積濃度為10％的乙醇溶液混合，以1M的檸檬酸調(diào)節(jié)體系pH至4.5，將體系溫度升至50℃，分別按0.1U/g、0.2U/g核桃仁的比例加入諾維信公司的復(fù)合酶SMASH和Max，將混合體系置于超聲清洗機中，按照超聲功率2W/g核桃仁的比例調(diào)節(jié)超聲功率1000W，超聲處理30min，而后紗布過濾分別回收核桃仁和浸提液。將核桃仁采用與上述相同的條件重復(fù)浸提2次，回收脫酚核桃仁和浸提液。合并三次所得浸提液，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇后濃縮至適當(dāng)濃度，而后經(jīng)真空冷凍干燥脫除水分，得到11.4g核桃多酚粗提物粉末。UPLC分析顯示其酚酸和黃酮等有效物占比17.6％。

實施例4：本發(fā)明的核桃多酚粗提物的提取

按照以g計核桃仁的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積之比1:3的比例，將市售帶內(nèi)種皮核桃仁(碎仁率10％左右)50g與0.15L體積濃度為0％的乙醇溶液(即純水)混合，以1M的檸檬酸調(diào)節(jié)體系pH至3.5，將體系溫度升至60℃，按10U/g核桃仁的比例加入諾維信公司的果膠酶SMASH，將混合體系置于超聲清洗機中，按照超聲功率20W/g核桃仁的比例調(diào)節(jié)超聲功率1000W，超聲處理10min，而后紗布過濾分別回收核桃仁和浸提液。將核桃仁采用與上述相同的條件重復(fù)浸提2次，回收脫酚核桃仁和浸提液。合并三次所得浸提液，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇后濃縮至適當(dāng)濃度，而后經(jīng)真空冷凍干燥脫除水分，得到1.22g核桃多酚粗提物粉末。UPLC分析顯示其酚酸和黃酮等有效物占比15.2％。

實施例5：本發(fā)明的核桃多酚粗提物的提取

將市售新疆紙皮核桃剝殼，得到核桃仁200g(碎仁率2％左右)，按照以g計核桃仁的質(zhì)量與以mL計乙醇水溶液的體積之比1:8的比例，將其與1.6L的體積濃度為15％的乙醇溶液混合，以1M的檸檬酸調(diào)節(jié)體系pH至6.5，將體系溫度升至10℃，按0.01U/g核桃仁的比例加入諾維信公司的纖維素酶Cellic CTec2，將混合體系放置于超聲清洗機中，按照超聲功率0.2W/g核桃仁的比例調(diào)節(jié)超聲功率40W，超聲處理120min，而后布氏漏斗過濾，分別回收核桃仁和浸提液。將浸提液真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇后濃縮至適當(dāng)濃度，而后經(jīng)真空冷凍干燥脫除水分，得到4.68g核桃多酚粗提物粉末。經(jīng)UPLC分析，其酚酸和黃酮等有效物占比15.5％。