本發(fā)明涉及天然植物提取物領(lǐng)域，具體是一種連翹葉提取物在阻斷N-亞硝胺形成中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
N-亞硝胺是世界公認(rèn)的四大食品污染物之一，一系列研究表明N-亞硝胺可誘使有機(jī)體發(fā)生基因突變，具有致畸性和強(qiáng)致癌性，主要可引起食管癌、胃癌、肝癌和大腸癌等。因此，如何抑制N-亞硝胺在體內(nèi)外的合成，以及減少其對(duì)人類(lèi)和環(huán)境的危害是當(dāng)今研究的主要熱點(diǎn)。目前，使用外源性食品添加劑、食品配料以及植物營(yíng)養(yǎng)素是控制食品中N-亞硝胺形成的主要措施，通過(guò)植物來(lái)源的生物黃酮類(lèi)或生物多酚等天然抗氧化劑阻斷N-亞硝胺形成是目前研究的熱點(diǎn)。
連翹葉是木犀科連翹屬植物連翹的干燥葉，含有豐富的生物多酚類(lèi)成分，并具有較強(qiáng)的抗氧化活性，因此，在民間連翹葉主要用于制作連翹葉茶，具有清熱解毒、下火等功效。而且長(zhǎng)期使用連翹葉茶的結(jié)果表明連翹葉未發(fā)現(xiàn)毒副作用?；谝陨显?，本發(fā)明提供一種連翹葉提取物在阻斷N-亞硝胺形成和清除亞硝酸鹽中的應(yīng)用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種連翹葉提取物在阻斷N-亞硝胺形成中的應(yīng)用，以及提供一種連翹葉提取物在清除亞硝酸鹽中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的一種連翹葉提取物在阻斷N-亞硝胺形成中的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的一種連翹葉提取物在清除亞硝酸鹽中的應(yīng)用。
所述的連翹葉提取物，是以連翹葉為原料，經(jīng)水提取、大孔樹(shù)脂分離有效組分制備而成。提取物中有效部位多酚含量為40％以上(總酚含量以沒(méi)食子酸當(dāng)量計(jì)算)，連翹葉提取物具體制備方法，包括如下步驟：
(1)提?。喝「稍镞B翹葉、粉碎，加入8～10倍量去離子水，加熱至微沸提取2-3次，每次提取0.5-1.5h，過(guò)濾，合并濾液，60℃減壓濃縮至比重為1.05～1.10的連翹葉提取液；
(2)分離：將連翹葉提取液載入非極性或弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱中，分別用水和20％乙醇水溶液依次淋洗2～4個(gè)柱體積至淋洗液呈淺黃色，再用40％乙醇水溶液淋洗2～4個(gè)柱體積，收集40％乙醇水溶液淋洗液，60℃減壓濃縮干燥，得連翹葉有效部位。利用福林酚法測(cè)定有效部位提取物中的總多酚含量，連翹葉的有效部位中總多酚的含量在40％以上(總酚含量以沒(méi)食子酸當(dāng)量計(jì)算)。
步驟(2)中所述的非極性或弱極性大孔吸附樹(shù)脂柱的材料，可為非極性大孔吸附樹(shù)脂D101或弱極性大孔吸附樹(shù)脂AB-8的任意一種。
經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，所獲得的連翹葉有效部位對(duì)亞硝酸鈉具有清除作用、對(duì)亞硝胺的形成具有阻斷作用。
將上述獲得的連翹葉有效部位作為活性組分，可以進(jìn)一步與其他載體、賦型劑等混合應(yīng)用于預(yù)防體內(nèi)N-亞硝胺產(chǎn)生所導(dǎo)致的癌變風(fēng)險(xiǎn)的保健食品組合物，劑型可以是液體、膠囊、顆粒劑等形式。
將上述獲得的連翹葉有效部位作為活性組分，可以進(jìn)一步與載體、賦型劑混合制成用于阻斷食品儲(chǔ)存過(guò)程中N-亞硝胺產(chǎn)生的食品添加劑，劑型可以是液體、顆粒劑等形式。
所述的載體可為乳糖、蔗糖、山梨醇、淀粉、聚乙二醇、明膠、去離子水等。還可加入潤(rùn)滑劑、矯味劑、懸浮劑等賦型劑。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：
本發(fā)明是以連翹葉為原料，經(jīng)水提取、大孔樹(shù)脂分離有效組分制備而成的提取物，提取物中多酚含量為40％以上(總酚含量以沒(méi)食子酸當(dāng)量計(jì)算)。提取物對(duì)亞硝酸鈉具有明顯的清除作用、對(duì)N-亞硝胺的形成具有較好的阻斷作用，阻斷效果與維生素C相當(dāng)，且無(wú)毒副作用。提取物可望在阻斷N-亞硝胺形成中的應(yīng)用，以及在清除亞硝酸鹽中的應(yīng)用。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明。這些實(shí)施例應(yīng)理解為僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
實(shí)施例1 連翹葉提取物的制備
取干燥連翹葉、粉碎，加入原材料量10倍量的去離子水，加熱至微沸提取兩次，每次提取1h，過(guò)濾，合并兩次濾液，60℃減壓濃縮至比重為1.05～1.10的連翹葉提取液，用D101大孔吸附樹(shù)脂柱層析分離，分別用水和20％乙醇水溶液依次淋洗3個(gè)柱體積至淋洗液呈淺黃色，再用40％乙醇水溶液淋洗3個(gè)柱體積，收集40％乙醇水溶液淋洗液，60℃減壓濃縮干燥，得連翹葉有效部位提取物。利用福林酚法測(cè)定有效部位提取物中的總多酚含量，有效部位提取物中總多酚含量為45.4％(總酚含量以沒(méi)食子酸當(dāng)量計(jì)算)。
實(shí)施例2 連翹葉提取物的制備
取干燥連翹葉、粉碎，加入原材料量9倍量的去離子水，加熱至微沸提取兩次，每次提取1h，過(guò)濾，合并兩次濾液，60℃減壓濃縮至比重為1.05～1.10的連翹葉提取液，用AB-8大孔吸附樹(shù)脂柱層析分離，分別用水和20％乙醇水溶液依次淋洗4個(gè)柱體積至淋洗液呈淺黃色，再用40％乙醇水溶液淋洗4個(gè)柱體積，收集40％乙醇水溶液淋洗液，60℃減壓濃縮干燥，得連翹葉有效部位提取物。利用福林酚法測(cè)定有效部位提取物中的總多酚含量，有效部位提取物中總多酚含量為48.5％(總酚含量以沒(méi)食子酸當(dāng)量計(jì)算)。
實(shí)施例3 連翹葉提取物對(duì)亞硝酸鹽的清除作用
將Vc和按實(shí)施例1制備的連翹葉提取物用50％乙醇配制成不同濃度的溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。取1mL檸檬酸鈉-鹽酸緩沖液(pH＝3，0.5M)置于10mL容量瓶中，取0.5mL不同濃度的Vc或樣品依次加入容量瓶中，再分別加入1mL 10μg/mL的NaNO2溶液，在37℃恒溫水浴中反應(yīng)30min，取出后立即加入0.4mL 0.4％對(duì)氨基苯磺酸溶液，混勻，靜置5min后加入0.2mL0.2％鹽酸萘乙二胺溶液，加緩沖液到刻度，混勻，靜置15min，于538nm處測(cè)定吸光度值，平行測(cè)定三次。同時(shí)各做3份NaNO2標(biāo)準(zhǔn)管和清除劑本底標(biāo)準(zhǔn)管。用下式計(jì)算清除率。結(jié)果見(jiàn)表1。
式中：A0為未加清除劑的標(biāo)準(zhǔn)管吸光度；Ax為加入不同濃度清除劑的反應(yīng)液吸光度；Axi為加入不同濃度清除劑本底的吸光度。
表1阻斷劑對(duì)亞硝酸鹽的清除作用
結(jié)果表明：按實(shí)施例1制備的連翹葉提取物對(duì)亞硝酸鹽具有清除作用。
實(shí)施例4 連翹葉提取物對(duì)N-亞硝胺形成的阻斷作用
基于高效液相色譜法分析NaNO2和鹽酸二甲胺反應(yīng)生成的N-亞硝基二甲胺(NDMA)量。色譜條件：Agilent 1260高效液相色譜系統(tǒng)，Zorbax XDBC18(250mm*4.6mm,5μm)反相色譜柱，進(jìn)樣量15μL，柱溫35℃，流動(dòng)相為甲醇-水(10：90，V/V)，流速1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)230nm。
取2mL不同濃度按實(shí)施例1制備的連翹葉提取物的DMSO溶液和7mL檸檬酸鈉-鹽酸緩沖液(pH＝3，0.1M)置于10mL棕色容量瓶中，加入0.5mL鹽酸二甲胺(0.4M)和0.5mL NaNO2(0.1M)，在37℃水浴中反應(yīng)4h。取出后立即加入100μL氨基磺酸銨(0.4M)終止亞硝化反應(yīng)。取1mL反應(yīng)液，用1.5mL的二氯甲烷萃取，萃取液用0.45μm濾膜過(guò)濾，HPLC分析。以2mL DMSO代替樣品作為空白對(duì)照，按上述實(shí)驗(yàn)方法，平行三次。用下式計(jì)算阻斷率。結(jié)果見(jiàn)表1。
式中：Px為加入按實(shí)施例1制備的連翹葉提取物的峰面積；Pb為不加樣品的峰面積。
結(jié)果表明：按實(shí)施例1制備的連翹葉提取物對(duì)N-亞硝胺形成具有阻斷作用。