本發(fā)明涉及一種肽的分離方法，特別是涉及一種從冬蟲夏草中運(yùn)用生物酶解技術(shù)對(duì)小分子活性肽的提取方法。

背景技術(shù)：

冬蟲夏草又名蟲草，是一種名貴滋補(bǔ)藥材，其營(yíng)養(yǎng)成分高于人參，可入藥，也可食用，是上乘的佳肴，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。冬蟲夏草可以增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，滋補(bǔ)肺腎，對(duì)肺癌、肝癌等有明顯的抑制作用。在臨床上對(duì)肺虛久咳，氣喘，肺結(jié)核咯血，盜汗，腎虛腰膝酸痛，陽(yáng)痿遺精，神經(jīng)衰弱及化療、放療后的紅細(xì)胞下降都有療效。

長(zhǎng)久以來(lái)，人們大多通過(guò)原草研磨、煲湯等方式服用冬蟲夏草，不僅耗時(shí)費(fèi)力，還會(huì)因人體機(jī)能不同產(chǎn)生不易吸收等問(wèn)題。目前市面上的冬蟲夏草產(chǎn)品主要有膠囊粉、口服液、壓制含片等，這些制劑中含有大量雜質(zhì)，雖然其包含蟲草中發(fā)揮作用的有效成分：蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖等，而物理加工冬蟲夏草卻很難做到這些有效成分的精細(xì)化提取。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明是為了解決以上技術(shù)問(wèn)題，而提供了一種蟲草肽的提取方法，該方法能夠?qū)⒍x夏草中的各種營(yíng)養(yǎng)素運(yùn)用生物酶解方式進(jìn)行小分子的轉(zhuǎn)化和提取，極大的保留了蟲草中的有效成分，經(jīng)過(guò)從大分子到小分子的轉(zhuǎn)化，具有極高的消化吸收性和利用率。

蟲草肽是將優(yōu)質(zhì)冬蟲夏草經(jīng)特殊的植物蛋白酶降解萃取后制成的，其分子量均在1000道爾頓以下，可直接被人體吸收利用，有效的保證了人體對(duì)蟲草中營(yíng)養(yǎng)素的補(bǔ)充。

本發(fā)明涉及一種蟲草肽的提取方法，所述提取方法包括以下步驟：

一、原料破壁：取蟲體完整的冬蟲夏草用清水浸泡1～3h，然后用清洗機(jī)沖洗15～25min，用破壁機(jī)破壁，得到蟲草粉；

二、浸泡：將步驟一所得蟲草粉加水?dāng)嚢?，升溫?0～80℃，保溫并繼續(xù)攪拌7～9h，過(guò)濾，得濾液；重復(fù)步驟二三次，合并三次所得濾液即為提取液；

三、排湯：將提取液轉(zhuǎn)入滅菌后的湯儲(chǔ)罐中(此時(shí)湯溫在44-45℃左右)；

四、水解：將提取液轉(zhuǎn)入水解罐，升溫至100～120℃保持10min滅菌，降溫至58～62℃并保持，加入堿液調(diào)整pH值至中性，加入植物蛋白酶制劑水解6h，酶解結(jié)束后升溫至90～100℃保溫15～20min滅酶活，得到水解液；

五、過(guò)濾：將步驟四所得水解液靜置，粗過(guò)濾至清液儲(chǔ)罐，然后用板框過(guò)濾器循環(huán)過(guò)濾1h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將步驟五所得清液濃縮至濃度11～13°Bé；

當(dāng)濃縮液澄清時(shí)，將濃縮液噴霧干燥，即制得蟲草肽；

當(dāng)濃縮液混濁時(shí)，先將濃縮液進(jìn)行板框過(guò)濾或用管式離心機(jī)分離至澄清；然后噴霧干燥，即制得蟲草肽；

其中，所述步驟一中清水與冬蟲夏草的質(zhì)量比為1～2:1。

優(yōu)選地，所述步驟一中破壁機(jī)破壁時(shí)，破壁機(jī)轉(zhuǎn)速為45000～65000r/min，破壁時(shí)間為6min。

優(yōu)選地，所述步驟二在夾層反應(yīng)罐中進(jìn)行。

優(yōu)選地，所述步驟三中采用真空抽提罐將提取液轉(zhuǎn)入湯儲(chǔ)罐中。

優(yōu)選地，所述步驟四中的堿液為NaOH溶液。

優(yōu)選地，所述步驟五中粗過(guò)濾為依次采用桶式過(guò)濾器、兩級(jí)板框過(guò)濾器過(guò)濾。

優(yōu)選地，所述步驟六中噴霧干燥的參數(shù)為：進(jìn)風(fēng)溫度100℃，出風(fēng)溫度85℃。

蟲草肽可調(diào)節(jié)人體免疫系統(tǒng)平衡，增加免疫系統(tǒng)細(xì)胞、組織數(shù)量，促進(jìn)抗體產(chǎn)生，增加吞噬、殺傷細(xì)胞數(shù)量、增強(qiáng)其功能。

蟲草肽還具有多種藥理作用，對(duì)急性病毒性心肌炎有明顯保護(hù)作用，對(duì)血小板減少及血小板超微結(jié)構(gòu)的損傷均有明顯的保護(hù)作用，具有較強(qiáng)的擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈并增加冠脈流量的功能，能抑制血栓形成，調(diào)節(jié)支氣管平滑肌，減輕老年慢性支氣管炎、哮喘、肺氣腫、肺心病等癥狀，延緩復(fù)發(fā)時(shí)間，對(duì)結(jié)核桿菌等引起肺部感染的病菌有強(qiáng)烈抑制和殺滅作用，且蟲草酸和蟲草多糖能修復(fù)已受損的肺泡細(xì)胞，對(duì)體液免疫功能有增強(qiáng)或減弱的雙向調(diào)節(jié)作用，對(duì)肝臟的保護(hù)和防治。

本發(fā)明蟲草肽的提取方法與現(xiàn)有技術(shù)不同之處在于：

1.本發(fā)明的方法為將冬蟲夏草生物酶解提取而得到的蟲草肽，不含任何化學(xué)成分與激素，對(duì)人體沒(méi)有任何毒副作用，極大的保留了蟲草中的有效成分，蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖含量極高，是十分純凈的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

2.采用本發(fā)明的方法制得的蟲草肽無(wú)需攪拌即可迅速溶于水，水溶液清亮透明，為淡黃色透明液體，不會(huì)析出任何雜質(zhì)和沉淀物。因此，本發(fā)明的方法制備得到的蟲草肽利用率可達(dá)到96％。

具體實(shí)施方式

通過(guò)以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的蟲草肽的提取方法作進(jìn)一步的說(shuō)明。

實(shí)施例1

本實(shí)施例的蟲草肽的提取方法按以下步驟進(jìn)行：

一、原料破壁：取蟲體完整的冬蟲夏草用清水浸泡1h，然后用清洗機(jī)沖洗25min，用破壁機(jī)破壁，得到蟲草粉；破壁機(jī)轉(zhuǎn)速為50000r/min，破壁時(shí)間為6min；

二、浸泡：將步驟一所得蟲草粉在夾層反應(yīng)罐中加水?dāng)嚢?，升溫?5℃，保溫并繼續(xù)攪拌7h，過(guò)濾，得濾液；重復(fù)步驟二三次，合并三次所得濾液即為提取液；

三、排湯：將提取液用真空抽提罐轉(zhuǎn)入滅菌后的湯儲(chǔ)罐中(此時(shí)湯溫在44-45℃左右)；

四、水解：將提取液轉(zhuǎn)入水解罐，升溫至115℃保持10min滅菌，降溫至58℃并保持，加入NaOH溶液調(diào)整pH值至中性，加入植物蛋白酶制劑水解6h，酶解結(jié)束后升溫至100℃保溫15min滅酶活，得到水解液；

五、過(guò)濾：將步驟四所得水解液靜置，依次采用桶式過(guò)濾器、兩級(jí)板框過(guò)濾器過(guò)濾進(jìn)行粗過(guò)濾，然后轉(zhuǎn)移至清液儲(chǔ)罐，然后用板框過(guò)濾器循環(huán)過(guò)濾1h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將步驟五所得清液濃縮至濃度12°Bé；

此時(shí)濃縮液混濁，先將濃縮液進(jìn)行板框過(guò)濾或用管式離心機(jī)分離至澄清；然后噴霧干燥，即制得蟲草肽；

其中，步驟一中清水與冬蟲夏草的質(zhì)量比為1:1；

噴霧干燥的參數(shù)為：進(jìn)風(fēng)溫度100℃，出風(fēng)溫度85℃。

實(shí)施例2

本實(shí)施例的蟲草肽的提取方法按以下步驟進(jìn)行：

一、原料破壁：取蟲體完整的冬蟲夏草用清水浸泡3h，然后用清洗機(jī)沖洗15min，用破壁機(jī)破壁，得到蟲草粉；破壁機(jī)轉(zhuǎn)速為60000r/min，破壁時(shí)間為6min；

二、浸泡：將步驟一所得蟲草粉在夾層反應(yīng)罐中加水?dāng)嚢?，升溫?5℃，保溫并繼續(xù)攪拌9h，過(guò)濾，得濾液；重復(fù)步驟二三次，合并三次所得濾液即為提取液；

三、排湯：將提取液用真空抽提罐轉(zhuǎn)入滅菌后的湯儲(chǔ)罐中(此時(shí)湯溫在44-45℃左右)；

四、水解：將提取液轉(zhuǎn)入水解罐，升溫至110℃保持10min滅菌，降溫至62℃并保持，加入NaOH溶液調(diào)整pH值至中性，加入植物蛋白酶制劑水解6h，酶解結(jié)束后升溫至90℃保溫20min滅酶活，得到水解液；

五、過(guò)濾：將步驟四所得水解液靜置，依次采用桶式過(guò)濾器、兩級(jí)板框過(guò)濾器過(guò)濾進(jìn)行粗過(guò)濾，然后轉(zhuǎn)移至清液儲(chǔ)罐，然后用板框過(guò)濾器循環(huán)過(guò)濾1h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將步驟五所得清液濃縮至濃度13°Bé；

此時(shí)濃縮液澄清，將濃縮液噴霧干燥，即制得蟲草肽；

其中，步驟一中清水與冬蟲夏草的質(zhì)量比為1:1；

噴霧干燥的參數(shù)為：進(jìn)風(fēng)溫度100℃，出風(fēng)溫度85℃。

實(shí)施例3

本實(shí)施例的蟲草肽的提取方法按以下步驟進(jìn)行：

一、原料破壁：取蟲體完整的冬蟲夏草用清水浸泡1h，然后用清洗機(jī)沖洗20min，用破壁機(jī)破壁，得到蟲草粉；破壁機(jī)轉(zhuǎn)速為55000r/min，破壁時(shí)間為6min；

二、浸泡：將步驟一所得蟲草粉在夾層反應(yīng)罐中加水?dāng)嚢瑁郎刂?0℃，保溫并繼續(xù)攪拌8h，過(guò)濾，得濾液；重復(fù)步驟二三次，合并三次所得濾液即為提取液；

三、排湯：將提取液用真空抽提罐轉(zhuǎn)入滅菌后的湯儲(chǔ)罐中(此時(shí)湯溫在44-45℃左右)；

四、水解：將提取液轉(zhuǎn)入水解罐，升溫至100℃保持10min滅菌，降溫至60℃并保持，加入NaOH溶液調(diào)整pH值至中性，加入植物蛋白酶制劑水解6h，酶解結(jié)束后升溫至95℃保溫18min滅酶活，得到水解液；

五、過(guò)濾：將步驟四所得水解液靜置，依次采用桶式過(guò)濾器、兩級(jí)板框過(guò)濾器過(guò)濾進(jìn)行粗過(guò)濾，然后轉(zhuǎn)移至清液儲(chǔ)罐，然后用板框過(guò)濾器循環(huán)過(guò)濾1h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將步驟五所得清液濃縮至濃度11°Bé；

此時(shí)濃縮液澄清，將濃縮液噴霧干燥，即制得蟲草肽；

其中，步驟一中清水與冬蟲夏草的質(zhì)量比為2:1；

噴霧干燥的參數(shù)為：進(jìn)風(fēng)溫度100℃，出風(fēng)溫度85℃。

實(shí)施例4

本實(shí)施例的蟲草肽的提取方法按以下步驟進(jìn)行：

一、原料破壁：取蟲體完整的冬蟲夏草用清水浸泡2h，然后用清洗機(jī)沖洗22min，用破壁機(jī)破壁，得到蟲草粉；破壁機(jī)轉(zhuǎn)速為65000r/min，破壁時(shí)間為6min；

二、浸泡：將步驟一所得蟲草粉在夾層反應(yīng)罐中加水?dāng)嚢?，升溫?0℃，保溫并繼續(xù)攪拌8h，過(guò)濾，得濾液；重復(fù)步驟二三次，合并三次所得濾液即為提取液；

三、排湯：將提取液用真空抽提罐轉(zhuǎn)入滅菌后的湯儲(chǔ)罐中(此時(shí)湯溫在44-45℃左右)；

四、水解：將提取液轉(zhuǎn)入水解罐，升溫至100℃保持10min滅菌，降溫至58℃并保持，加入NaOH溶液調(diào)整pH值至中性，加入植物蛋白酶制劑水解6h，酶解結(jié)束后升溫至100℃保溫20min滅酶活，得到水解液；

五、過(guò)濾：將步驟四所得水解液靜置，依次采用桶式過(guò)濾器、兩級(jí)板框過(guò)濾器過(guò)濾進(jìn)行粗過(guò)濾，然后轉(zhuǎn)移至清液儲(chǔ)罐，然后用板框過(guò)濾器循環(huán)過(guò)濾1h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將步驟五所得清液濃縮至濃度13°Bé；

此時(shí)濃縮液混濁，先將濃縮液進(jìn)行板框過(guò)濾或用管式離心機(jī)分離至澄清；然后噴霧干燥，即制得蟲草肽；

其中，步驟一中清水與冬蟲夏草的質(zhì)量比為1:1；

噴霧干燥的參數(shù)為：進(jìn)風(fēng)溫度100℃，出風(fēng)溫度85℃。

實(shí)施例5

本實(shí)施例的蟲草肽的提取方法按以下步驟進(jìn)行：

一、原料破壁：取蟲體完整的冬蟲夏草用清水浸泡3h，然后用清洗機(jī)沖洗18min，用破壁機(jī)破壁，得到蟲草粉；破壁機(jī)轉(zhuǎn)速為45000r/min，破壁時(shí)間為6min；

二、浸泡：將步驟一所得蟲草粉在夾層反應(yīng)罐中加水?dāng)嚢?，升溫?0℃，保溫并繼續(xù)攪拌7h，過(guò)濾，得濾液；重復(fù)步驟二三次，合并三次所得濾液即為提取液；

三、排湯：將提取液用真空抽提罐轉(zhuǎn)入滅菌后的湯儲(chǔ)罐中(此時(shí)湯溫在44-45℃左右)；

四、水解：將提取液轉(zhuǎn)入水解罐，升溫至120℃保持10min滅菌，降溫至62℃并保持，加入NaOH溶液調(diào)整pH值至中性，加入植物蛋白酶制劑水解6h，酶解結(jié)束后升溫至90℃保溫18min滅酶活，得到水解液；

五、過(guò)濾：將步驟四所得水解液靜置，依次采用桶式過(guò)濾器、兩級(jí)板框過(guò)濾器過(guò)濾進(jìn)行粗過(guò)濾，然后轉(zhuǎn)移至清液儲(chǔ)罐，然后用板框過(guò)濾器循環(huán)過(guò)濾1h，得到清液；

六、濃縮：利用真空濃縮器將步驟五所得清液濃縮至濃度11°Bé；

此時(shí)濃縮液澄清，將濃縮液噴霧干燥，即制得蟲草肽；

其中，步驟一中清水與冬蟲夏草的質(zhì)量比為2:1；

噴霧干燥的參數(shù)為：進(jìn)風(fēng)溫度100℃，出風(fēng)溫度85℃。

以上實(shí)施例將冬蟲夏草生物酶解提取而得到的蟲草肽，不含任何化學(xué)成分與激素，對(duì)人體沒(méi)有任何毒副作用，極大的保留了蟲草中的有效成分，蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖含量極高，是十分純凈的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

經(jīng)驗(yàn)證，以上實(shí)施例的方法制得的蟲草肽無(wú)需攪拌即可迅速溶于水，水溶液清亮透明，為淡黃色透明液體，不會(huì)析出任何雜質(zhì)和沉淀物。因此，本發(fā)明的方法制備得到的蟲草肽利用率可達(dá)到96％。

雖然以上描述了本發(fā)明的具體實(shí)施方式，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，這些僅是舉例說(shuō)明，本發(fā)明的保護(hù)范圍是由所附權(quán)利要求書限定的。本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不背離本發(fā)明的原理和實(shí)質(zhì)的前提下，可以對(duì)這些實(shí)施方式作出多種變更或修改，但這些變更和修改均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。