紅城紅球菌在降解釀造調(diào)味品或其原料中的黃曲霉毒素b1中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種對釀造調(diào)味品或其原料中的黃曲霉毒素BI (AFBl)進行微生物 脫毒的方法與用途，具體而言，本發(fā)明涉及將能高效降解AFBl的紅城紅球菌（Rhodococcus erythropolis)用于釀造調(diào)味品或其原料中的AFBl的微生物降解脫毒的方法與用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 霉菌毒素是霉菌生長過程中產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物。霉菌毒素污染一直是全球食 品、釀造調(diào)味品及農(nóng)產(chǎn)品等行業(yè)的重大威脅，每年都給生產(chǎn)帶來巨大的經(jīng)濟損失。黃曲霉毒 素是所有真菌毒素中毒性最強的一種，廣泛存在于各種釀造調(diào)味品或其原料中。黃曲霉毒 素（Aflatoxin，AFT)現(xiàn)已分離出 AFBl、AFB2、AFGl、AFG2、AFMl、AFM2、AFB2a、AFG2a、AFBM2a 及AFGM2a等18種之多，其中AFBl的毒性最強且化學性質(zhì)最穩(wěn)定，它具有很強的致癌性、致 突變性和致畸形性，是國際上認可的A類致癌物。黃曲霉毒素中毒（Aflatoxicosis)主要 表現(xiàn)在動物采食量降低、生長速度緩慢、組織器官受損以及影響原始細胞的發(fā)育和胎兒的 分化等。
[0003] 黃曲霉毒素廣泛存在于濕度較大的釀造調(diào)味品或其原料的混合、儲存及運輸?shù)雀?個環(huán)節(jié)之中，既嚴重影響我國相關(guān)產(chǎn)品的進出口及國內(nèi)貿(mào)易，帶來了巨大的經(jīng)濟損失；又嚴 重影響了我國的釀造調(diào)味品品質(zhì)與食用安全。
[0004] 然而，針對釀造調(diào)味品或其原料中黃曲霉毒素脫毒的方法目前尚未見專利報道。 因此，發(fā)明和推廣一種對釀造調(diào)味品或其原料中的黃曲霉毒素進行脫毒的方法與應用，對 保障釀造調(diào)味品質(zhì)量安全和確保消費者健康安全顯得尤為重要。
[0005] 目前對黃曲霉毒素脫毒方法的研究主要都集中在化學處理法和物理脫毒法等，包 括氨化法、堿法、介質(zhì)吸附法、混合溶劑萃取法、高溫法、紫外線照射法、超濾_滲濾法、霉粒 挑選法等，這些方法存在效果不穩(wěn)定、效率低、需要添加防毒害的安全設備、難以規(guī)?；?產(chǎn)等缺點，有些方法需要的設備價格昂貴，從而限制了實際生產(chǎn)中的應用。
[0006] 因此，黃曲霉毒素微生物脫毒法由于效率高、條件溫和、無副作用等越來越受到關(guān) 注。利用微生物脫毒的方法和應用近十五年國內(nèi)外逐漸見報道，所采用菌株多集中在乳酸 菌、雙歧桿菌、酵母菌、白腐真菌、橙色黃桿菌、假密環(huán)菌及根霉菌等。國內(nèi)相關(guān)研究主要包 括劉大嶺等報道(真菌提取液對黃曲霉毒素降解作用的研究[J].廣東藥學院學報，1995， 11 (2) :92~94)發(fā)現(xiàn)一種真菌代謝產(chǎn)物具有降解毒素作用；計成等報道（降解黃曲霉毒素 枯草芽孢桿菌的解毒性、抗菌性及抗逆性研究，飼料工業(yè)，2011，32 (24) : 23~27)發(fā)現(xiàn)一株 芽孢桿菌具有降解毒素作用；及劉陽等報道(高產(chǎn)漆酶平菇的篩選及其在降解黃曲霉毒素 Bl中的用途，核農(nóng)學報，2012, 26 (7) :1025-1030)發(fā)現(xiàn)一株平菇具有降解毒素作用等。但對 這些細菌及真菌的脫毒研究發(fā)現(xiàn)，大部分菌的毒素降解效率不高，通常低于50%。此外，降解 效率影響因素較多，包括作用時間、溶液PH值、溶液成分、菌體數(shù)量、毒素濃度和金屬離子 等，同時降解操作工藝復雜，難以大規(guī)模實施。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的旨在克服現(xiàn)有黃曲霉毒素生物脫毒技術(shù)的不足而提供一種高效的、 適用面廣的、溫和的、安全的、工藝簡單的釀造調(diào)味品或其原料中的黃曲霉毒素的降解方 法。
[0008] 至今為止，國內(nèi)外尚無關(guān)于利用紅城紅球菌降解黃曲霉毒素的報道。本發(fā)明人則 通過深入研究，首次發(fā)現(xiàn)紅城紅球菌能夠高效率地降解AFB1，由此提供了一種紅城紅球菌 在降解釀造調(diào)味品或其原料中AFBl的用途，從而完成了本發(fā)明。
[0009] 本發(fā)明提供的利用紅城紅球菌進行釀造調(diào)味品或其原料中AFBl的脫毒的方法及 用途具有以下有益效果，從而有效解決了傳統(tǒng)黃曲霉毒素脫毒方法中存在的問題：
[0010] (1)本發(fā)明提供的降解釀造調(diào)味品或其原料中AFBl的方法具有脫毒活性高、操作 簡單、安全、反應條件溫和、能耗低、設備要求低、廢液(渣）產(chǎn)量小及環(huán)境污染少等優(yōu)勢；
[0011] (2)本發(fā)明提供的用途特別適于釀造調(diào)味品或其原料中的AFBl的脫毒，可用于高 效去除釀造調(diào)味品或其原料中的AFB1。
【具體實施方式】
[0012] 本發(fā)明提供的利用紅城紅球菌進行釀造調(diào)味品或其原料中AFBl的脫毒的方法及 用途適用范圍廣泛，可用于各種釀造調(diào)味品或其原料的AFBl脫毒。根據(jù)本發(fā)明的一些實施 方式，所述釀造調(diào)味品或其原料選自于各種農(nóng)產(chǎn)品原材料(包括豆類、谷物類及果蔬類等） 及各種農(nóng)產(chǎn)品初級加工產(chǎn)品（包括豆餅柏、谷物麩皮和果蔬皮渣等)，但本發(fā)明并不限于此。 在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式中，可利用紅城紅球菌在大豆粉、玉米粉及大米粉的混合物 中進行AFBl脫毒。
[0013] 根據(jù)本發(fā)明的一個實施方式，可將紅城紅球菌菌株發(fā)酵液或其發(fā)酵液上清均勻混 入污染了 AFBl的目的釀造調(diào)味品或其原料中，從而進行AFBl脫毒處理。
[0014] 根據(jù)本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式，所述紅城紅球菌菌株發(fā)酵液或其發(fā)酵液上清同 污染了 AFBl的目的釀造調(diào)味品或其原料的混合比例分別為：5%-12%及10%-25% (均為體積 /重量比）。
[0015] 對于上述發(fā)酵液上清，可基于本領(lǐng)域技術(shù)人員掌握的常規(guī)方法由發(fā)酵液獲得，例 如，采用離心的方式。
[0016] 根據(jù)本發(fā)明一個優(yōu)選的實施方式，所述污染了 AFBl的目的釀造調(diào)味品或其原料 可先經(jīng)過粉碎處理。
[0017] 根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，所述脫毒處理在溫度25-35 °C、濕度80%-100%、 pH5. 5-8. 5的條件下通風反應30-48h。優(yōu)選地，所述脫毒處理在恒溫條件下進行。在本發(fā) 明一些優(yōu)選的實施方式中，可采用7. 2-7. 4的pH值。
[0018] 根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，可用于本發(fā)明方法及用途中的紅城紅球菌可分別為 紅城紅球菌（Rhodococcus erythropolis)菌株 NHRI-1、NHRI-2、NHRI-3、NHRI-4、NHRI-5、 NHRI-6及NHRI-7,所述菌株于2013年12月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會 普通微生物中心（CGMCC)(北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所)， 保藏編號分別為 CGMCC No. 8590、CGMCC No. 8591、CGMCC No. 8592、CGMCC No. 8593、CGMCC No. 8594、CGMCC No. 8595 及 CGMCC No. 8596,但本發(fā)明并不限于此。
[0019] 根據(jù)本發(fā)明的一些實施方式，可用于本發(fā)明方法及用途中的紅城紅球菌還可分別 為購自于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC4. 1491及 CGMCC1. 2362的紅城紅球菌菌株，但本發(fā)明并不限于此。
[0020] 根據(jù)本發(fā)明一個最為優(yōu)選的實施方式，可用于本發(fā)明方法及用途中的紅城紅球菌 菌株為NHRI-1，所述菌株于2013年12月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通 微生物中心（CGMCC)，保藏編號為CGMCC No. 8590。
[0021] 對于黃曲霉毒素脫毒的效果檢測，可采用本領(lǐng)域常規(guī)的檢測方法進行，包括但不 限于HPLC-MS方法。根據(jù)本發(fā)明的一個實施方式，可在反應完成后采用可商購的試劑盒來 提取反應樣品中殘留的黃曲霉毒素，并采用HPLC-MS檢測反應樣品中殘留的黃曲霉毒素的 含量。
[0022] 除非另有說明，本文中的含量百分比是指重量體積百分比。例如，"培養(yǎng)基中含有 0. 10%的AFB1"是指每100mL培養(yǎng)基中含有0.1 Og AFBl。
[0023] 在利用紅城紅球菌對釀造調(diào)味品或其原料中的AFBl進行處理時，術(shù)語"降解"及 "脫毒"在本文中可互換使用。
[0024] 本發(fā)明可由以下編號的段落中的任一項表示：
[0025] 1.紅城紅球菌在降解釀造調(diào)味品或其原料中的黃曲霉毒素BI (AFBl)中的用途。
[0026] 2.如段1中所述的用途，其中，所述釀造調(diào)味品或其原料選自于各種農(nóng)產(chǎn)品原材 料及各種農(nóng)產(chǎn)品初級加工產(chǎn)品。
[0027] 3.如段2中所述的用途，其中，所述農(nóng)產(chǎn)品原材料為豆類、谷物類或果蔬類；所述 農(nóng)產(chǎn)品初級加工產(chǎn)品為豆餅柏、谷物麩皮或果蔬皮渣。
[0028] 4.如段1中所述的用途，其中，所述釀造調(diào)味品或其原料為大豆粉、玉米粉及大米 粉的混合物。
[0029] 5.如段1-4中任一項所述的用途，其中，將所述紅城紅球菌的菌株發(fā)酵液或發(fā)酵 液上清均勻混入污染了 AFBl的目的釀造調(diào)味品或其原料中，從而進行AFBl的降解。
[0030] 6.如段5中所述的用途，其中，所述紅城紅球菌的菌株發(fā)酵液或發(fā)酵液上清與所 述污染了 AFBl的目的釀造調(diào)味品或其原料的混合比例分別為：5%-12%及10%-25%，所述比 例均為體積/重量比。
[0031] 7.如