段5中所述的用途，其中，所述發(fā)酵液上清通過對所述發(fā)酵液進(jìn)行離心而獲 得。
[0032] 8.如段5中所述的用途，其中，所述污染了 AFBl的目的釀造調(diào)味品或其原料在進(jìn) 行AFBl降解前已經(jīng)過粉碎處理。
[0033]9.如段1-4中任一項(xiàng)所述的用途，其中，所述降解在溫度25_35°C、濕度80%_100%、 pH5. 5-8. 5的條件下通風(fēng)反應(yīng)30-80h。
[0034] 10.如段9中所述的用途，其中，所述降解在恒溫條件下進(jìn)行。
[0035] 11.如段9中所述的用途，其中，所述降解在pH7. 2-7. 4的條件下進(jìn)行。
[0036] 12.如段1-4中任一項(xiàng)所述的用途，其中，所述紅城紅球菌選自于：
[0037] 紅城紅球菌菌株 NHRI-1、NHRI-2、NHRI-3、NHRI-4、NHRI-5、NHRI-6 及 NHRI-7， 所述菌株于2013年12月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心 (CGMCC)，保藏編號分別為CGMCC N〇.8590、CGMCC No.8591、CGMCC No.8592、CGMCC No.8593、 CGMCC No. 8594、CGMCC No.8595 及 CGMCC No. 8596 ;和 / 或
[0038] 保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC)的紅城紅球菌菌 株 CGMCC4. 1491 及 CGMCCL 2362。
[0039] 實(shí)施例
[0040] 下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用來 限制本發(fā)明的范圍。
[0041] 實(shí)施例1紅城紅球菌菌株發(fā)酵液及其上清的制備
[0042]取-80 °C低溫甘油管保藏的七株紅城紅球菌菌株NHRI-I、NHRI-2、NHRI-3、 NHRI-4、NHRI-5、NHRI-6和NHRI-7 (保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物 中心（CGMCC)，保藏編號分別為 CGMCC No. 8590、CGMCC No. 8591、CGMCC No. 8592、CGMCC No. 8593、CGMCC No. 8594、CGMCC No. 8595 及 CGMCC No. 8596)以及購自于中國微生物菌種 保藏管理委員會普通微生物中心的兩株紅城紅球菌菌株CGMCC4. 1491及CGMCC1. 2362的 凍存液各50 ii L加入到50mL液體培養(yǎng)基(組成成分為：蛋白胨1.00%、牛肉膏0.50%、葡萄 糖0. 50%、氯化鈉0. 50% ;pH7. 2-7. 4,121°C高壓滅菌20min)活化培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：溫度為 30°C，轉(zhuǎn)速為100r/min，培養(yǎng)時間48h。鏡檢確定相應(yīng)活化培養(yǎng)液純度后，取上述9種紅城 紅球菌菌株的活化培養(yǎng)液各40mL(活菌濃度彡109CFU/ml)，接種于10L搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基(組 成成分為：蛋白胨1. 〇〇%、牛肉膏0. 50%、葡萄糖0. 50%、氯化鈉0. 50% ;pH7. 2-7. 4,121°C高 壓滅菌20min)中進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)溫度30°C，pH值7. 2-7. 4,轉(zhuǎn)速100r/min，發(fā) 酵時間48h。
[0043] 發(fā)酵結(jié)束后，每個菌株發(fā)酵樣品取5L菌株發(fā)酵液于4°C保存，剩余發(fā)酵液(約5L) 進(jìn)行離心分離得到發(fā)酵液上清，于4°C保存。離心分離條件為：轉(zhuǎn)速10000r/min，溫度4°C， 離心時間10min。
[0044] 實(shí)施例2混合比例5%的紅城紅球菌菌株發(fā)酵液對釀造調(diào)味品原料粉末中AFBl的 降解試驗(yàn)
[0045] 將實(shí)施例1中保存的菌株發(fā)酵液按5% (體積/重量比）的比例均勻混入經(jīng)過粉 碎的污染了 AFBl的釀造調(diào)味品原料(大豆粉、玉米粉及大米粉等混合物）（AFBl含量為 0. 80mg/kg)中，每種菌株發(fā)酵液制備3份混合試驗(yàn)樣品，每份樣品500g，采用無菌水調(diào)整濕 度至80%-100%，無菌紗布包裹后置于32cmX 25cmX 8cm有孔(孔直徑約0. 15cm)托盤中，在 溫度30°C條件下，采用無菌水維持樣品濕度，通風(fēng)充分反應(yīng)48h，在此過程中將pH值保持于 7. 2-7. 4。同時，在同等條件下設(shè)置5%比例的不含紅城紅球菌的發(fā)酵培養(yǎng)基混合樣品作為 對照。
[0046] 反應(yīng)完成后，每份樣品取樣5g，采用試劑盒（MycoSep226Afazon + Multifunctional Columns, Romer Labs Inc. MO, USA,生產(chǎn)批號：226903-1306)來提取反應(yīng) 樣品中殘留的AFBl，采用HPLC-MS法檢測反應(yīng)樣品中殘留的AFBl的含量，計算相應(yīng)釀造調(diào) 味品原料樣品中的AFBl降解率，結(jié)果如表1所示（降解率以3份平行樣品測定值的平均值 土標(biāo)準(zhǔn)差的形式示出）：
[0047] 混合比例5%的紅城紅球菌發(fā)酵液對釀造調(diào)味品原料中AFBl的降解率在48h時最 高達(dá)到82. 6%±2. 6% ;發(fā)酵培養(yǎng)基對照則未顯示出對AFBl的降解作用。
[0048] 表1紅城紅球菌發(fā)酵液（5%)對釀造調(diào)味品原料中AFBl降解率檢測結(jié)果（48h) *
[0049]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 紅城紅球菌在降解釀造調(diào)味品或其原料中的黃曲霉毒素BI (AFBl)中的用途。
2. 如權(quán)利要求1中所述的用途，其中，所述釀造調(diào)味品或其原料選自于各種農(nóng)產(chǎn)品原 材料及各種農(nóng)產(chǎn)品初級加工產(chǎn)品。
3. 如權(quán)利要求2中所述的用途，其中，所述農(nóng)產(chǎn)品原材料為豆類、谷物類或果蔬類；所 述農(nóng)產(chǎn)品初級加工產(chǎn)品為豆餅柏、谷物麩皮或果蔬皮渣； 優(yōu)選地，所述釀造調(diào)味品或其原料為大豆粉、玉米粉及大米粉的混合物。
4. 如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的用途，其中，將所述紅城紅球菌的菌株發(fā)酵液或發(fā) 酵液上清均勻混入污染了 AFBl的目的釀造調(diào)味品或其原料中，從而進(jìn)行AFBl的降解。
5. 如權(quán)利要求4中所述的用途，其中，所述紅城紅球菌的菌株發(fā)酵液或發(fā)酵液上清與 所述污染了 AFBl的目的釀造調(diào)味品或其原料的混合比例分別為：5%-12%及10%-25%，所述 比例均為體積/重量比。
6. 如權(quán)利要求4中所述的用途，其中，所述發(fā)酵液上清通過對所述發(fā)酵液進(jìn)行離心而 獲得。
7. 如權(quán)利要求4中所述的用途，其中，所述污染了 AFBl的目的釀造調(diào)味品或其原料在 進(jìn)行AFBl降解前已經(jīng)過粉碎處理。
8. 如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的用途，其中，所述降解在溫度25-35 °C、濕度 80%-100%、pH5. 5-8. 5 的條件下通風(fēng)反應(yīng) 30-80h ; 優(yōu)選地，所述降解在恒溫條件下進(jìn)行。
9. 如權(quán)利要求8中所述的用途，其中，所述降解在pH7. 2-7. 4的條件下進(jìn)行。
10. 如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的用途，其中，所述紅城紅球菌選自于： 紅城紅球菌菌株 NHRI-1、NHRI-2、NHRI-3、NHRI-4、NHRI-5、NHRI-6 及 NHRI-7,所述菌 株于2013年12月17日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC)， 保藏編號分別為 CGMCC No. 8590、CGMCC No. 8591、CGMCC No. 8592、CGMCC No. 8593、CGMCC No. 8594、CGMCC No. 8595 及 CGMCC No. 8596 ;和 / 或 保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC)的紅城紅球菌菌株 CGMCC4. 1491 及 CGMCCL 2362。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種對釀造調(diào)味品或其原料中的黃曲霉毒素B1（AFB1）進(jìn)行微生物脫毒的方法與用途，具體而言，本發(fā)明涉及將紅城紅球菌（Rhodococcus erythropolis）用于釀造調(diào)味品或其原料中的AFB1的脫毒的方法及用途。通過將含有AFB1的目的釀造調(diào)味品或其原料與紅城紅球菌菌株發(fā)酵液或其發(fā)酵液上清均勻混合并通風(fēng)充分反應(yīng)，就能夠?qū)崿F(xiàn)對釀造調(diào)味品或其原料中AFB1的高效降解脫毒。本發(fā)明提供的降解釀造調(diào)味品或其原料中AFB1的方法能夠高效、溫和且安全地降低釀造調(diào)味品或其原料中AFB1的含量，而且能耗低、設(shè)備要求低、廢液（渣）產(chǎn)量小及環(huán)境污染少，特別適用于釀造調(diào)味品或其原料中AFB1的脫毒。CGMCC No.859020131217 CGMCC No.859120131217 CGMCC No.859220131217 CGMCC No.859620131217 CGMCC No.859320131217 CGMCC No.859420131217 CGMCC No.859520131217
【IPC分類】A23L1-015, A23L1-22
【公開號】CN104738362
【申請?zhí)枴緾N201310734051
【發(fā)明人】李慧, 劉洋, 蔡軍, 黃蔚霞, 歐靜堃, 劉佳佳, 王宇
【申請人】中糧營養(yǎng)健康研究院有限公司, 中糧集團(tuán)有限公司
【公開日】2015年7月1日
【申請日】2013年12月27日