本發(fā)明涉及中藥提取
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種午時茶顆粒及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：現(xiàn)有技術(shù)中午時茶顆粒提取方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，有效成分含量低，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，嚴(yán)重影響了本品在臨床上應(yīng)用。技術(shù)實現(xiàn)要素：發(fā)明目的：為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種午時茶顆粒及其制備方法和應(yīng)用。技術(shù)方案：本發(fā)明的目的是通過如下的方案實現(xiàn)的：一種午時茶顆粒，制備方法為：取蒼術(shù)50g，柴胡50g，羌活50g，防風(fēng)50g，白芷50g，川芎50g，廣藿香50g，前胡50g，連翹50g，陳皮50g，山楂50g，枳實50g，炒麥芽75g，甘草50g，桔梗75g，六炒神曲50g，紫蘇葉75g，厚樸75g，紅茶1600g，加藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小時，過濾，藥渣再加入藥材8倍重量的水，煎煮1小時，藥液濾出，合并兩次煎煮液，濃縮至60℃相對密度為1.05，加乙醇使含醇量的體積百分比達(dá)75％，攪拌，靜置，過濾，濾液濃縮至65℃時相對密度為1.25，并回收乙醇，得濃縮液，使用超臨界萃取，得超臨界萃取物，干燥，按常規(guī)方法制備成午時茶顆粒。所述午時茶顆粒，制備方法中將水提醇沉濃縮液加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6％，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生藥·min，萃取時間150-180min，得超臨界萃取物，優(yōu)選條件為：所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5％，所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40℃，CO2流量2ml/g生藥·min，萃取時間160min。所述午時茶顆粒，上述提取方法中濃縮使用裝置，包括濃縮筒體，設(shè)置在所述濃縮筒體底部的蒸發(fā)器，在所述濃縮筒體的頂部設(shè)有出氣孔和凝結(jié)面板，在所述凝結(jié)面板內(nèi)設(shè)有降溫液存儲腔，在所述濃縮筒體的頂部設(shè)有與所述降溫液存儲腔相連通的進液管和排出管，其特征在于：在所述濃縮筒體內(nèi)的頂壁設(shè)有向下延伸的旋轉(zhuǎn)桿，所述旋轉(zhuǎn)桿上設(shè)有刮垢刀盤，所述刮垢刀盤的盤邊與濃縮筒體的內(nèi)壁相接觸，在所述濃縮筒體的頂壁上設(shè)有升降氣缸，所述旋轉(zhuǎn)桿的頂部穿過所述濃縮筒體的頂壁且頂端與所述升降氣缸相連接，在所述旋轉(zhuǎn)桿內(nèi)設(shè)有旋轉(zhuǎn)電機，所述旋轉(zhuǎn)電機的主軸與所述刮垢刀盤的中心相連接，在所述濃縮筒體的頂部還設(shè)有穿過頂壁的升降桿，在所述升降桿的底部設(shè)有喇叭狀吸泡嘴，在所述升降桿內(nèi)設(shè)有與所述喇叭狀吸泡嘴相連通的吸泡通道，在所述升降桿的頂部設(shè)有吸附泵體，在所述濃縮筒體的頂壁與所述升降桿之間設(shè)有調(diào)節(jié)氣缸，所述升降桿在所述調(diào)節(jié)氣缸的作用下在所述濃縮筒體內(nèi)做升降移動。所述午時茶顆粒，上述提取方法中濃縮裝置所述濃縮筒體的側(cè)壁上設(shè)有觀察窗，在所述觀察窗內(nèi)設(shè)有密封玻璃，所述刮垢刀盤為圓環(huán)狀，所述刮垢刀盤的外徑與濃縮筒體的內(nèi)徑相同且刮垢刀盤的內(nèi)環(huán)面通過連接筋桿與旋轉(zhuǎn)電機的主軸相連接，所述蒸發(fā)器為圓筒形結(jié)構(gòu)，所述蒸發(fā)器通過連接法蘭連接在濃縮筒體的底壁，在所述蒸發(fā)器內(nèi)設(shè)有蒸發(fā)管，在所述蒸發(fā)器的側(cè)壁上設(shè)有與所述蒸發(fā)管相連通的蒸汽進口和蒸汽出口。所述午時茶顆粒，上述提取方法中干燥使用裝置，包括干燥室、與所述干燥室相連通的風(fēng)量調(diào)節(jié)室，在所述干燥室的頂壁上設(shè)有進料口，在所述干燥室的底部設(shè)有出料口，在所述風(fēng)量調(diào)節(jié)室上設(shè)有進風(fēng)通道，在所述干燥室上設(shè)有排風(fēng)通道，其特征在于：在所述風(fēng)量調(diào)節(jié)室與所述干燥室之間設(shè)有隔板，在所述隔板上均勻設(shè)有氣孔，在所述隔板上還設(shè)有側(cè)面開口的凹腔，所述凹腔設(shè)置在靠干燥室的一側(cè)，在所述凹腔內(nèi)設(shè)有旋轉(zhuǎn)電機，還設(shè)有與所述旋轉(zhuǎn)電機主軸相連接的旋轉(zhuǎn)桿，在所述旋轉(zhuǎn)桿的表面設(shè)有翻轉(zhuǎn)攪拌葉，所述旋轉(zhuǎn)桿伸入所述干燥室內(nèi)，在所述旋轉(zhuǎn)桿的中心設(shè)有導(dǎo)氣通道，在所述翻轉(zhuǎn)攪拌葉上均勻設(shè)有與所述導(dǎo)氣通道相連通的熱氣噴嘴，所述旋轉(zhuǎn)桿的端部伸入所述風(fēng)時調(diào)節(jié)室內(nèi)，在所述導(dǎo)氣通道內(nèi)設(shè)有導(dǎo)熱風(fēng)機，在所述風(fēng)時調(diào)節(jié)室內(nèi)設(shè)有移動板，在所述移動板的側(cè)面設(shè)有與所述氣孔相配合的風(fēng)量調(diào)節(jié)塞和設(shè)置在相鄰風(fēng)量調(diào)節(jié)塞之間的風(fēng)孔，在所述移動板與所述風(fēng)量調(diào)節(jié)室的側(cè)壁之間設(shè)有移動調(diào)節(jié)氣缸。所述午時茶顆粒，上述提取方法中干燥使用裝置所述所述風(fēng)量調(diào)節(jié)室的頂壁設(shè)有滑槽，在所述風(fēng)量調(diào)節(jié)室的底壁設(shè)有移動槽，所述移動槽與所述滑槽的走向一致，所述移動板的頂部通過滾動輪活動設(shè)置在所述滑槽內(nèi)，所述移動板的底部通過移動塊活動設(shè)置在所述移動槽內(nèi)，所述移動調(diào)節(jié)氣缸設(shè)置在所述移動塊與移動槽的端壁之間。所述午時茶顆粒，上述提取方法中干燥使用裝置所述旋轉(zhuǎn)電機的主軸上設(shè)有驅(qū)動齒盤，在所述旋轉(zhuǎn)桿上設(shè)有與所述驅(qū)動齒盤相齒合的齒槽，所述凹腔的開口處設(shè)有防護網(wǎng)，所述旋轉(zhuǎn)桿穿過所述防護網(wǎng)設(shè)置?，F(xiàn)有技術(shù)中，午時茶顆粒原來提取方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，本發(fā)明制備的桔梗皂苷D含量增加，含量高。本發(fā)明中的濃縮設(shè)備結(jié)構(gòu)簡單、操作便捷，其不但可以根據(jù)需要啟動刮垢刀盤并根據(jù)需要做升降調(diào)節(jié)從而可以實現(xiàn)對濃縮筒體的內(nèi)壁進行刮垢處理，同時還可以根據(jù)需要調(diào)節(jié)升降桿的升降操作使喇叭狀吸泡嘴處于藥物液面的稍上方通過吸附泵體將表面的泡沫吸除，解決了傳統(tǒng)技術(shù)藥物濃縮裝置中管壁藥垢清除困難的技術(shù)不足，使用穩(wěn)定性好且適用性強。本干燥設(shè)備結(jié)構(gòu)簡單、操作便捷，設(shè)有翻轉(zhuǎn)攪拌葉且在翻轉(zhuǎn)攪拌葉內(nèi)設(shè)有與風(fēng)量調(diào)節(jié)室相連通的熱氣噴嘴，使在攪拌藥材的同時對藥材進行干燥，增加了與藥材接觸的速度，可有效的提高藥材干燥效率，而且使用穩(wěn)定性好，解決了傳統(tǒng)技術(shù)藥物干燥器干燥效率低的技術(shù)不足，適用性強且實用性好。并發(fā)現(xiàn)午時茶顆粒在制備抑制大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。附圖說明為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)具體實施例并結(jié)合附圖，對本發(fā)明作進一步詳細(xì)的說明，其中：圖1為本發(fā)明濃縮裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。圖2為本發(fā)明干燥裝置的結(jié)構(gòu)示意圖。具體實施方式以下通過實施例形式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。實施例1取蒼術(shù)50g，柴胡50g，羌活50g，防風(fēng)50g，白芷50g，川芎50g，廣藿香50g，前胡50g，連翹50g，陳皮50g，山楂50g，枳實50g，炒麥芽75g，甘草50g，桔梗75g，六炒神曲50g，紫蘇葉75g，厚樸75g，紅茶1600g，加藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小時，過濾，藥渣再加入藥材8倍重量的水，煎煮1小時，藥液濾出，合并兩次煎煮液，濃縮至60℃相對密度為1.05，加乙醇使含醇量的體積百分比達(dá)75％，攪拌，靜置，過濾，濾液濃縮至65℃時相對密度為1.25，并回收乙醇，得濃縮液，使用超臨界萃取，得超臨界萃取物，干燥，按常規(guī)方法制備成午時茶顆粒。所述超臨界萃取方法為：將水提醇沉濃縮液加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4％，萃取壓力30MPa，溫度30℃，CO2流量3m1/g生藥·min，萃取時間150min，得超臨界萃取物。見圖1：所述午時茶顆粒，上述兩次濃縮使用裝置，包括濃縮筒體1，設(shè)置在所述濃縮筒體1底部的蒸發(fā)器2，在所述濃縮筒體1的頂部設(shè)有出氣孔3和凝結(jié)面板4，在所述凝結(jié)面板4內(nèi)設(shè)有降溫液存儲腔5，在所述濃縮筒體1的頂部設(shè)有與所述降溫液存儲腔5相連通的進液管6和排出管7，設(shè)有凝結(jié)面板，可以將藥夜蒸發(fā)的氣體部分凝結(jié)成水分，可以防止藥物揮發(fā)掉，在所述濃縮筒體1內(nèi)的頂壁設(shè)有向下延伸的旋轉(zhuǎn)桿8，所述旋轉(zhuǎn)桿8上設(shè)有刮垢刀盤9，所述刮垢刀盤9的盤邊與濃縮筒體1的內(nèi)壁相接觸，在所述濃縮筒體1的頂壁上設(shè)有升降氣缸10，所述旋轉(zhuǎn)桿8的頂部穿過所述濃縮筒體1的頂壁且頂端與所述升降氣缸10相連接，在所述旋轉(zhuǎn)桿8內(nèi)設(shè)有旋轉(zhuǎn)電機11，所述旋轉(zhuǎn)電機11的主軸與所述刮垢刀盤9的中心相連接，在所述濃縮筒體1的頂部還設(shè)有穿過頂壁的升降桿12，在所述升降桿12的底部設(shè)有喇叭狀吸泡嘴13，在所述升降桿12內(nèi)設(shè)有與所述喇叭狀吸泡嘴13相連通的吸泡通道14，在所述升降桿12的頂部設(shè)有吸附泵體15，在所述濃縮筒體1的頂壁與所述升降桿12之間設(shè)有調(diào)節(jié)氣缸16，所述升降桿在所述調(diào)節(jié)氣缸的作用下在所述濃縮筒體內(nèi)做升降移動。在所述濃縮筒體1的側(cè)壁上設(shè)有觀察窗17，在所述觀察窗內(nèi)設(shè)有密封玻璃18。所述刮垢刀盤為圓環(huán)狀，所述刮垢刀盤的外徑與濃縮筒體的內(nèi)徑相同且刮垢刀盤的內(nèi)環(huán)面通過連接筋桿與旋轉(zhuǎn)電機的主軸相連接。由于刮垢與吸泡并不是同時進行，故而兩者并不會造成相互限制。所述蒸發(fā)器2為圓筒形結(jié)構(gòu)，所述蒸發(fā)器2通過連接法蘭19連接在濃縮筒體1的底壁，在所述蒸發(fā)器內(nèi)設(shè)有蒸發(fā)管20，在所述蒸發(fā)器2的側(cè)壁上設(shè)有與所述蒸發(fā)管20相連通的蒸汽進口21和蒸汽出口22。見圖2：所述午時茶顆粒，上述干燥使用裝置，包括包括干燥室1、與所述干燥室1相連通的風(fēng)量調(diào)節(jié)室2，在所述干燥室1的頂壁上設(shè)有進料口3，在所述干燥室1的底部設(shè)有出料口4，在所述風(fēng)量調(diào)節(jié)室2上設(shè)有進風(fēng)通道5，在所述干燥室1上設(shè)有排風(fēng)通道6，在所述風(fēng)量調(diào)節(jié)室2與所述干燥室1之間設(shè)有隔板7，在所述隔板7上均勻設(shè)有氣孔8，在所述隔板7上還設(shè)有側(cè)面開口的凹腔9，所述凹腔9設(shè)置在靠干燥室1的一側(cè)，在所述凹腔9內(nèi)設(shè)有旋轉(zhuǎn)電機10，還設(shè)有與所述旋轉(zhuǎn)電機10主軸相連接的旋轉(zhuǎn)桿11，在所述旋轉(zhuǎn)桿11的表面設(shè)有翻轉(zhuǎn)攪拌葉12，所述旋轉(zhuǎn)桿11伸入所述干燥室1內(nèi)，在所述旋轉(zhuǎn)桿11的中心設(shè)有導(dǎo)氣通道13，在所述翻轉(zhuǎn)攪拌葉12上均勻設(shè)有與所述導(dǎo)氣通道13相連通的熱氣噴嘴14，所述旋轉(zhuǎn)桿11的端部伸入所述風(fēng)時調(diào)節(jié)室2內(nèi)，在所述導(dǎo)氣通道13內(nèi)設(shè)有導(dǎo)熱風(fēng)機15，在所述風(fēng)時調(diào)節(jié)室2內(nèi)設(shè)有移動板16，在所述移動板16的側(cè)面設(shè)有與所述氣孔8相配合的風(fēng)量調(diào)節(jié)塞17和設(shè)置在相鄰風(fēng)量調(diào)節(jié)塞之間的風(fēng)孔18，在所述移動板16與所述風(fēng)量調(diào)節(jié)室2的側(cè)壁之間設(shè)有移動調(diào)節(jié)氣缸19。在所述風(fēng)量調(diào)節(jié)室2的頂壁設(shè)有滑槽20，在所述風(fēng)量調(diào)節(jié)室2的底壁設(shè)有移動槽21，所述移動槽21與所述滑槽20的走向一致，所述移動板16的頂部通過滾動輪22活動設(shè)置在所述滑槽20內(nèi)，所述移動板16的底部通過移動塊23活動設(shè)置在所述移動槽21內(nèi)，所述移動調(diào)節(jié)氣缸19設(shè)置在所述移動塊23與移動槽21的端壁之間。在所述旋轉(zhuǎn)電機的主軸上設(shè)有驅(qū)動齒盤24，在所述旋轉(zhuǎn)桿上設(shè)有與所述驅(qū)動齒盤相齒合的齒槽25。在所述凹腔的開口處設(shè)有防護網(wǎng)26，所述旋轉(zhuǎn)桿穿過所述防護網(wǎng)設(shè)置。實施例2取蒼術(shù)50g，柴胡50g，羌活50g，防風(fēng)50g，白芷50g，川芎50g，廣藿香50g，前胡50g，連翹50g，陳皮50g，山楂50g，枳實50g，炒麥芽75g，甘草50g，桔梗75g，六炒神曲50g，紫蘇葉75g，厚樸75g，紅茶1600g，加藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小時，過濾，藥渣再加入藥材8倍重量的水，煎煮1小時，藥液濾出，合并兩次煎煮液，濃縮至60℃相對密度為1.05，加乙醇使含醇量的體積百分比達(dá)75％，攪拌，靜置，過濾，濾液濃縮至65℃時相對密度為1.25，并回收乙醇，得濃縮液，使用超臨界萃取，得超臨界萃取物，干燥，按常規(guī)方法制備成午時茶顆粒。所述超臨界萃取方法為：將水提醇沉濃縮液加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為6％，萃取壓力15MPa，溫度50℃，CO2流量1m1/g生藥·min，萃取時間180min，得超臨界萃取物。濃縮和干燥設(shè)備同上。實施例3取蒼術(shù)50g，柴胡50g，羌活50g，防風(fēng)50g，白芷50g，川芎50g，廣藿香50g，前胡50g，連翹50g，陳皮50g，山楂50g，枳實50g，炒麥芽75g，甘草50g，桔梗75g，六炒神曲50g，紫蘇葉75g，厚樸75g，紅茶1600g，加藥材10倍重量的水，浸泡0.5h，煎煮1小時，過濾，藥渣再加入藥材8倍重量的水，煎煮1小時，藥液濾出，合并兩次煎煮液，濃縮至60℃相對密度為1.05，加乙醇使含醇量的體積百分比達(dá)75％，攪拌，靜置，過濾，濾液濃縮至65℃時相對密度為1.25，并回收乙醇，得濃縮液，使用超臨界萃取，得超臨界萃取物，干燥，按常規(guī)方法制備成午時茶顆粒。所述超臨界萃取方法為：將水提醇沉濃縮液加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5％，所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40℃，CO2流量2ml/g生藥·min，萃取時間160min，得超臨界萃取物。濃縮和干燥設(shè)備同上。上述實施例中藥材均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。實施例4：本發(fā)明午時茶顆粒中桔梗皂苷D含量測定實驗研究資料1.1實驗藥物：本發(fā)明午時茶顆粒：按實施例1-3方法制備。對照組中參考實施例1采用普通濃縮和干燥方法制備成午時茶顆粒。1.2儀器：高效液相色譜儀系統(tǒng)包括高效液相色譜儀(Waters515)；P200高壓泵；Waters2487紫外檢測器及GJ605型高壓六通進樣閥；色譜柱為Shim-PackC18(4.6mm×250mm,5μm)；數(shù)據(jù)采集及處理采用HS色譜數(shù)據(jù)工作站V4.0+(杭州英譜科技)1.3測定條件：照高效液相色譜法(通則0512)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：色譜柱：Shim-PackC18(4.6mm×250mm,5μm)；流動相：乙腈-水(體積比25∶75)，檢測波長300nm；柱溫40℃；進樣量10μl。理論板數(shù)按桔梗皂苷D峰計算應(yīng)不低于2000。取桔梗皂苷D對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含5ug的溶液，即得。供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品，研細(xì)，取約0.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20ul注入液相色譜儀，測定，即得。1.4實驗結(jié)果各實施例制備的午時茶顆粒中桔梗皂苷D含量測定結(jié)果樣品來源桔梗皂苷D含量(％)實施例10.52實施例20.40實施例30.51對照組0.03根據(jù)上表的試驗結(jié)果可知，本發(fā)明實施例1-3制備的午時茶顆粒中桔梗皂苷D含量明顯高于對照組。實施例5：本發(fā)明午時茶顆粒抑制大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖的實驗研究資料1實驗材料1.1實驗用細(xì)胞株大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實驗室細(xì)胞庫，DMEM+10％FBS常規(guī)培養(yǎng)。1.2實驗藥物研究藥物：本發(fā)明午時茶顆粒：按實施例1方法制備。藥液儲液：稱取100mg午時茶顆粒，溶于5ml無水乙醇中，0.2μm濾器過濾，500μldoff管分裝，-20℃存儲，同時0.2μm濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。1.3實驗試劑DMEM(GIBCO公司Cat.No.12100-061Lot.No.758137)；胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419)；NaHCO3(上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat.No.11810-033Lot.No.1088387)；Trypsin(AMRESCO公司批號：2010/04)；EDTA(AMRESCO公司批號：2009/10)；PenicillinGSodiumSalt(AMRESCO公司批號：2010242)；StreptomycinSulfate(AMRESCO公司批號：2010382)；無水乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號：080310182)；MTT(Biosharp批號：0793)；PBS(實驗室自配)；1.4實驗器材萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號：DM1L)；可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號：SPECTRAMAX190)；CO2培養(yǎng)箱(FORMA型號：3111)；超凈臺(蘇凈集團安泰公司制造型號：SW-CJ-ZFD)；純水儀(美國Spring公司型號：S/N020579)；精密移液器(法國吉爾森公司型號：P2)；電子天平(德國賽多利斯有限公司型號：BT323S)；全自動高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號：MLS-3020)；臺式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實驗設(shè)備公司型號：DHG9123A)；冰箱(西門子公司型號：KG18V21TI)；液氮罐(CBS型號：2001)；低速離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠型號：KA-1000)；0.2μm濾器(MILLIPORE型號：SLGP033RB)；10cm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細(xì)胞計數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。2實驗方法1)大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞用DMEM+10％FBS于37℃、5％CO2進行常規(guī)培養(yǎng)(10cm培養(yǎng)皿)，當(dāng)細(xì)胞生長至對數(shù)期時，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0.25％胰蛋白酶-0.04％EDTA，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，1000rpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3×104個/ml。2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180μl，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37℃，5％CO2)常規(guī)培養(yǎng)。3)根據(jù)細(xì)胞生長情況，一般長至50％-70％，加入午時茶顆粒溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。4)24h后加入20μlMTT溶液(5mg/ml，即0.5％MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)4h。5)4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200μl二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。6)同時設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液)，對照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個復(fù)孔。7)結(jié)果以藥物對細(xì)胞的抑制率表示：細(xì)胞增值抑制率(％)＝(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值×100％。實驗重復(fù)3次。3統(tǒng)計處理采用MicrosoftExcel2003軟件中的相關(guān)分析和Studentt檢驗，數(shù)據(jù)以mean±S.D.表示。4實驗結(jié)果MTT法實驗后統(tǒng)計結(jié)果顯示，與對照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時，對大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖抑制有差異(P<0.05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P<0.01)，當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時有極顯著性差異(P<0.001)。午時茶顆粒對大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖抑制影響研究(X±SD)注：與對照組比較，*P<0.01；**P<0.0015實驗結(jié)論午時茶顆?？梢砸种拼笫竽I上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞增殖，減少大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤PC-12細(xì)胞的細(xì)胞生長數(shù)目，該作用呈劑量依賴性。當(dāng)前第1頁1 2 3