本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及那格列奈的新用途，具體涉及那格列奈的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：那格列奈是D-苯丙氨酸衍生物，屬于非磺酰脲類降血糖藥，其作用機(jī)理主要為通過與胰島B細(xì)胞上磺酰脲受體相結(jié)合，阻滯胰島細(xì)胞ATP敏感鉀通道開放，導(dǎo)致細(xì)胞膜去極化，引起鈣通道開放，促進(jìn)胰島素分泌；是一種新型的餐時(shí)血糖調(diào)節(jié)劑，能有效控制餐后血糖水平，具有起效快、作用時(shí)間短，引起心血管副作用和低血糖發(fā)生率低等特點(diǎn)。迄今為止，尚未見那格列奈及其藥物組合物與甲狀腺功能亢進(jìn)癥的相關(guān)性報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種那格列奈的藥物組合物，該藥物組合物中含有那格列奈和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，那格列奈和該天然產(chǎn)物可協(xié)同治療甲狀腺功能亢進(jìn)癥。本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：一種那格列奈的藥物組合物，包括那格列奈、化合物(Ⅰ)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型；所述化合物(Ⅰ)具有下述結(jié)構(gòu)式：進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。上述化合物(Ⅰ)的制備方法，包含以下操作步驟：(a)將青風(fēng)藤粉碎，用60～70％乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用10％乙醇洗脫12個(gè)柱體積，再用70％乙醇洗脫15個(gè)柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70％的甲醇水溶液等度洗脫，收集7～13個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)。進(jìn)一步地，化合物(Ⅰ)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。上述那格列奈的藥物組合物在制備治療甲狀腺功能亢進(jìn)癥的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明提供的那格列奈的藥物組合物中含有那格列奈和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，那格列奈、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)具有治療效果；那格列奈和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療甲狀腺功能亢進(jìn)癥的藥物。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范圍。實(shí)施例1：化合物(Ⅰ)分離制備及結(jié)構(gòu)確證試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。分離方法：(a)將青風(fēng)藤(2kg)粉碎，用65％乙醇熱回流提取(20L×3次)，合并提取液，濃縮至無醇味(4L)，依次用石油醚(4L×3次)、乙酸乙酯(4L×3次)和水飽和的正丁醇(4L×3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步驟(a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10％乙醇洗脫12個(gè)柱體積，再用70％乙醇洗脫15個(gè)柱體積，收集70％洗脫液，減壓濃縮得70％乙醇洗脫濃縮物；(c)步驟(b)中70％乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1(8個(gè)柱體積)、25:1(8個(gè)柱體積)、15:1(8個(gè)柱體積)和5:1(10個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；(d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為10:1(8個(gè)柱體積)、5:1(10個(gè)柱體積)和2:1(5個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；(e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70％的甲醇水溶液等度洗脫，收集7～13個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(Ⅰ)(純度大于98％)。結(jié)構(gòu)確證：HR-ESI-MS顯示[M+Na]+為m/z285.1201，結(jié)合核磁特征可得分子式為C15H18O4，不飽和度為7。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δH(ppm，CD3OD，500MHz)：H-1α(1.49，m)，H-1β(1.23，m)，H-2α(2.78，m)，H-2β(2.91，m)，H-5(2.11，m)，H-6α(2.30，m)，H-6β(2.52，m)，H-9(5.24，s)，H-13(1.84，s)，H-14(1.12，s)，H-15a(5.46，s)，H-15b(5.31，s)；核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δC(ppm，CD3OD，125MHz)：36.7(CH2，1-C)，33.5(CH2，2-C)，198.1(C，3-C)，145.4(C，4-C)，47.1(CH，5-C)，26.2(CH2，6-C)，142.7(C，7-C)，143.0(C，8-C)，138.3(CH，9-C)，39.1(C，10-C)，120.0(C，11-C)，173.1(C，12-C)，8.4(CH3，13-C)，16.1(CH3，14-C)，113.2(CH2，15-C)。紅外光譜表明該化合物含有內(nèi)酯羰基(1736cm-1)結(jié)構(gòu)。1H和13C-NMR顯示該化合物含有一個(gè)α,β-不飽和γ-內(nèi)酯結(jié)構(gòu)[δC142.7(C-7)，143.0(C-8)，120.0(C-11)，173.1(C-12)]，一個(gè)乙烯基甲基[δH1.84(3H，s，H-13)；δC8.4(C-13)]，一個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)[δH1.12(3H，s，H-14)；δC16.1(C-14)]，一個(gè)環(huán)外亞甲基質(zhì)子信號(hào)[δH5.46(1H，s，H-15a)和5.31(1H，s，H-15b)；δC113.2(C-15)和145.4(C-4)]以及一個(gè)烯屬次甲基質(zhì)子信號(hào)[δH5.24(1H，s，H-9)；δC143.0(C-8)和138.3(C-9)]。結(jié)合核磁數(shù)據(jù)信息以及高分辨質(zhì)譜信息可以看出這個(gè)化合物是典型的桉烷型倍半萜內(nèi)酯類化合物。查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，該化合物和已知化合物ent-3-hydroxyatractylenolideIII具有相似的結(jié)構(gòu)，通過和該化合物進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)，新化合物中多了一個(gè)酮羰基碳信號(hào)以及一組雙鍵信號(hào)。對(duì)該化合物的HMBC譜的解析中發(fā)現(xiàn)，H-1/C-3，H-2/C-3，H-5/C-3之間的相關(guān)性說明在新化合物中多出來的酮羰基是位于C-3位的。同時(shí)，H-9/C-8，H-14/C-9之間的相關(guān)信號(hào)說明C-8和C-9之間存在一個(gè)雙鍵。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：實(shí)施例2：藥理作用本實(shí)施例使用甲狀腺素片大鼠造模法制備甲狀腺功能亢進(jìn)大鼠模型，測(cè)定大鼠心率、體溫、體重及血清T3、T4水平的變化。觀察藥物對(duì)大鼠甲狀腺功能亢進(jìn)癥的治療作用。1、材料與方法1.1動(dòng)物SD大鼠60只，體重200±20g，雌雄各半，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2試劑與樣品那格列奈購自中國藥品生物制品檢定所?；衔?Ⅰ)自制，制備方法見實(shí)施例1。他巴唑(上海中西制藥有限公司)；甲狀腺素片(天津君安生物制藥公司)生產(chǎn)。125Ⅰ-三碘甲狀腺原氨酸(T3)放射免疫分析試劑盒、125Ⅰ-四碘甲狀腺素(T4)放射免疫分析試劑盒。1.3儀器實(shí)驗(yàn)動(dòng)物電子秤(上海醫(yī)療器械廠)；肛表、TN型托盤式扭動(dòng)天平(上海第二天秤儀器廠)；心電圖儀(日本產(chǎn))；5417R低溫高速離心機(jī)(德國EPPENDORF公司生產(chǎn))。1.4大鼠分組及模型制備甲亢動(dòng)物模型制作方法：參照文獻(xiàn)(林蘭等，甲亢寧對(duì)甲亢大鼠甲狀腺激素及心鈉素的影響，中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2005)，選用甲狀腺素片大鼠造模法，甲狀腺素片以蒸餾水溶解，按600mg/kg劑量灌胃。造模后的動(dòng)物表現(xiàn)為興奮、好斗、易驚、體重減輕、飲水及飲食量增加、心率加快等為造模成功，與陰虛型甲亢患者臨床表現(xiàn)相近似。取SD大鼠60只，雌雄各半，造模前常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)3d。隨機(jī)取10只作為正常對(duì)照組，其余50只按上述方法進(jìn)行造模。模型制作成功后隨機(jī)分為5組：模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組(他巴唑組，50mg·kg-1)和那格列奈組(80mg·kg-1)、化合物(Ⅰ)組(80mg·kg-1)、那格列奈與化合物(Ⅰ)組合物組【40mg·kg-1那格列奈+40mg·kg-1化合物(Ⅰ)】。造模成功后，按照上述劑量給藥，每日一次，連續(xù)7天。正常對(duì)照組與模型對(duì)照組小鼠灌胃給予純化水。1.5心率測(cè)定實(shí)驗(yàn)分別于治療前、治療后第7d，在大鼠安靜狀況下，用心電圖儀測(cè)定心率。1.6體溫測(cè)定實(shí)驗(yàn)分別于治療前、治療后第7d，于上午8時(shí)測(cè)定大鼠的肛門溫度。1.7體重測(cè)定實(shí)驗(yàn)分別于治療前、治療后第7d，大鼠禁食12h后測(cè)量其體重。1.8血清T3、T4的測(cè)定實(shí)驗(yàn)造模大鼠末次給藥后1d，尾靜脈采血，分離血清，采用放射免疫分析法(RIA)測(cè)定，具體操作按照藥盒說明書進(jìn)行。1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型大鼠心率、體溫的影響與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組心率明顯加快(P＜0.01)，體溫明顯升高(P<0.01)；與模型對(duì)照組比較，那格列奈與化合物(Ⅰ)組合物組和陽性對(duì)照組心率明顯減慢(P＜0.01)，體溫明顯降低(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比較，那格列奈組、化合物(Ⅰ)組心率減慢(P＜0.05)體溫降低(P＜0.05)。試驗(yàn)結(jié)果見表1。2.2對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型大鼠血清T3、T4水平的影響與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組血清T3、T4值明顯升高(P＜0.01)。與模型對(duì)照組比較，那格列奈與化合物(Ⅰ)組合物組和陽性對(duì)照組血清T3、T4值明顯降低(P＜0.01)；與模型對(duì)照組比較，那格列奈組、化合物(Ⅰ)組血清T3、T4值降低(P＜0.05)。試驗(yàn)結(jié)果見表2。表1對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型大鼠心率、體溫、體重的影響組別用藥前后心率差值(次/分)用藥前后體溫差值(℃)正常對(duì)照組13.5±2.10.3±0.06模型對(duì)照組209.3±19.51.9±0.21陽性對(duì)照組84.7±20.50.7±0.21那格列奈組103.8±19.91.1±0.23化合物(Ⅰ)組101.6±19.11.1±0.22那格列奈與化合物(Ⅰ)組合物組83.4±10.20.7±0.11表2對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)模型大鼠血清T3、T4水平的影響組別T3(ng/ml)T4(ng/ml)正常對(duì)照組0.98±0.1835.4±6.81模型對(duì)照組15.83±2.70345.8±25.94陽性對(duì)照組3.32±1.1039.6±7.91那格列奈組8.51±1.52109.7±9.63化合物(Ⅰ)組8.92±1.31108.6±10.22那格列奈與化合物(Ⅰ)組合物組3.69±1.0245.4±6.93甲狀腺功能亢進(jìn)癥又稱甲狀腺毒癥，是由于甲狀腺內(nèi)或甲狀腺外的多種原因引起血中甲狀腺激素過量，作用于全身的組織和器官，造成機(jī)體的神經(jīng)、循環(huán)、消化等各系統(tǒng)興奮性增高和代謝亢進(jìn)為主要表現(xiàn)的疾病總稱。甲亢是危害人類健康的一種常見內(nèi)分泌疾病，患病率約為0.5％～1％，可發(fā)生于任何年齡，以中青年女性多見。中醫(yī)藥在治療甲狀腺功能亢進(jìn)癥、改善臨床癥狀方面療效明顯，但臨床和實(shí)驗(yàn)研究僅在深度和廣度上有所進(jìn)展，并無重大突破，并缺乏以動(dòng)物模型開展的藥理研究報(bào)告和高水平研究。上述結(jié)果表明，那格列奈、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)具有治療效果；那格列奈和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)甲狀腺功能亢進(jìn)的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療甲狀腺功能亢進(jìn)癥的藥物。上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3