本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體為一種抗Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞骨架損傷的組合物。

背景技術(shù)：

阿爾茨海默氏病(Alzheimer’s disease, AD)是老年癡呆的一種，主要表現(xiàn)為進(jìn)行性的認(rèn)知障礙和人格改變，特征性病理學(xué)改變?yōu)榧?xì)胞內(nèi)神經(jīng)元纏結(jié)、細(xì)胞外大量由β-淀粉樣蛋白肽（β-amyloid peptide，Aβ）構(gòu)成的老年斑以及神經(jīng)元缺失。目前，人們對AD的發(fā)病機(jī)制還不是十分清楚，有研究認(rèn)為，過氧化損傷和自由基的生成與AD的發(fā)病密切相關(guān)。Aβ可以導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞的過氧化損傷，且許多抗氧化劑都有保護(hù)原代神經(jīng)細(xì)胞及克隆的細(xì)胞系免受Aβ的毒性作用。

大豆，是豆類中營養(yǎng)價(jià)值最高的品種，在百種天然的食品中，它名列榜首，含有大量的不飽和脂肪酸，多種微量元素、維生素及優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)。大豆肽是指大豆蛋白質(zhì)經(jīng)蛋白酶作用后，再經(jīng)特殊處理而得到的蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物，它由大豆蛋白水解后的許多種肽分子混合物所組成，產(chǎn)品中還含有少量游離氨基酸、糖類和無機(jī)鹽等成分。大豆肽含有人體必需的8種氨基酸，除蛋氨酸為限制氨基酸外，其它氨其酸，均超過或接近WHO推薦標(biāo)準(zhǔn)，因此大豆肽具有較高的營養(yǎng)價(jià)值。中國是大豆生產(chǎn)大國，但有關(guān)大豆肽功能活性研究及機(jī)制探討遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于西方發(fā)達(dá)國家。開發(fā)大豆肽相關(guān)產(chǎn)品及深入研究大豆肽功能活性機(jī)制任重道遠(yuǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服人們對AD的發(fā)病機(jī)制還不是十分清楚，無法克服Aβ毒性的缺陷，提供抗Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞骨架損傷的組合物。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

一種抗Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞骨架損傷的組合物，包含由2～10個(gè)氨基酸組成的大豆肽。

所述的大豆肽由大豆蛋白經(jīng)復(fù)合酶水解所得。進(jìn)一步的，所述的復(fù)合酶由凝乳酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和米黑毛酶組成。優(yōu)先的，所述經(jīng)復(fù)合酶由質(zhì)量比為1:3:6:2～4:5的凝乳酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和米黑毛酶組成。

本發(fā)明的大豆肽具有較強(qiáng)的抗氧化作用，其內(nèi)含有多種抗氧化物質(zhì)，可通過消除自由基及螯合金屬離子等方式發(fā)揮抗氧化作用。Aβ_25-35為Aβ位于第25-35個(gè)氨基酸位點(diǎn)的基因片段，是引起神經(jīng)毒性的主要活性部位。Aβ毒性可引起小鼠原代神經(jīng)細(xì)胞凋亡及神經(jīng)細(xì)胞骨架的改變，而本發(fā)明的大豆肽對Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞骨架損傷具有明顯的修復(fù)和保護(hù)作用。由于大豆是我國重要的糧食作物之一，大豆蛋白含量豐富，大豆肽來源非常廣泛。而作為小分子蛋白質(zhì)，大豆肽又非常容易被人體吸收。大豆肽對Aβ誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞損傷所起的保護(hù)作用提示大豆肽可能對一些神經(jīng)退行性疾病的預(yù)防和恢復(fù)有一定療效，在天然藥物及保健食品的開發(fā)方面有重要的研究和應(yīng)用價(jià)值。

附圖說明

附圖用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與本發(fā)明的實(shí)施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。在附圖中：

圖1是利用MTT法檢測各組神經(jīng)細(xì)胞活力圖

圖2是DAPI染色顯示各組神經(jīng)細(xì)胞的凋亡情況的柱狀圖；

圖3是DAPI染色顯示各組神經(jīng)細(xì)胞的凋亡的形態(tài)變化圖；

圖4是western blot檢測各組神經(jīng)細(xì)胞凋亡蛋白的表達(dá)圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

實(shí)施例

一種抗Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞骨架損傷的組合物，包含由2～10個(gè)氨基酸組成的大豆肽。

所述的大豆肽由大豆蛋白經(jīng)復(fù)合酶水解所得，所述的復(fù)合酶由質(zhì)量比為1:3:6:2～4:5的凝乳酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和米黑毛酶組成。

以下應(yīng)用Aβ_25-35作用于原代培養(yǎng)的小鼠海馬神經(jīng)元，建立體外AD神經(jīng)元模型，研究大豆肽對Aβ 損傷的海馬神經(jīng)元是否具有保護(hù)作用。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：C57BL/6小鼠，購于南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所。

原代神經(jīng)元培養(yǎng)：取孕18.5天母鼠拉頸處死，取出胎鼠，剝離胎鼠海馬，0.25%胰酶消化15分鐘（min），加入神經(jīng)元預(yù)培養(yǎng)液（MEM，10%FBS，1 mM丙酮酸鈉，100U 青/鏈霉素雙抗，1x GlutaMAX）終止酶反應(yīng)，并反復(fù)吹打10-20次，將海馬組織吹散成單細(xì)胞；計(jì)數(shù)后按照1x105個(gè)/ml分別接種至24孔板、96孔板以及6 cm 培養(yǎng)皿中。隨后放入37℃ CO2培養(yǎng)箱3-5小時(shí)（h）后，換成神經(jīng)元培養(yǎng)液（Neurobasal medium，1x B27，1x GlutaMAX，100U 青/鏈霉素雙抗）。每隔3天半量換液。

造模與組別設(shè)置：小鼠原代神經(jīng)元培養(yǎng)7天后使用Aβ25-35造模。方法如下：首先使用0.01M PBS將Aβ25-35（Sigma, A4559）稀釋成1μg/μl 溶液，在37℃培養(yǎng)箱中孵育7天，使Aβ25-35聚集以增加其毒性。隨后分裝4℃保存，備用。取一支已處理好的Aβ25-35加入原代神經(jīng)元培養(yǎng)基內(nèi)，使其終濃度為10μM。繼續(xù)孵育24小時(shí)后，即為造模完成。分為5組，分別為：正常對照組，模型對照組，不同劑量SBP（0.1%，0.5%，1%）處理組。

法檢測SBP對海馬神經(jīng)細(xì)胞活力的影響：神經(jīng)元經(jīng)造模及SBP處理48 h后，利用MTT法檢測各組神經(jīng)細(xì)胞的活力。方法如下：在神經(jīng)元培養(yǎng)基中加入 5mg/ml 的MTT ，使其終濃度為0.5mg/ml；4 h后終止培養(yǎng)，小心吸棄培養(yǎng)基，每孔加入DMSO 150μl，37℃振蕩10 min混勻，采用酶聯(lián)免疫檢測儀在490 nm處檢測其光吸收值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。細(xì)胞活力/% = (實(shí)驗(yàn)組-空白組)/(對照組-空白組)×100%。

檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡形態(tài)變化：Aβ毒性會(huì)增加細(xì)胞的死亡，為了研究SBP對抗Aβ毒性的作用，利用DAPI（Invitrogen, D1306）檢測各組凋亡的神經(jīng)細(xì)胞。首先使用dd H2O將DAPI配制成2.5mg/ml 儲存液，再用0.01 mol/L的PBS將其按照1:2000稀釋成工作液。在神經(jīng)元經(jīng)造模及SBP處理48 h后，吸棄神經(jīng)元培養(yǎng)基，加入4% 多聚甲醛4℃固定 15 min，0.01 mol/L的PBS洗2次。24孔板每孔加200μl DAPI工作液，室溫避光孵育5 min。吸棄廢液，0.01 mol/L的PBS洗2次。抗熒光淬滅封片劑封片，隨后在熒光顯微鏡下觀察拍照。

檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡蛋白的表達(dá)變化：取3只孕18.5天母鼠按1.2所述方法提取原代神經(jīng)元后，接種至10個(gè)6 cm 培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)7天后進(jìn)行造模及SBP處理。48 h后，搜集各組細(xì)胞，利用RIPA裂解液提取蛋白。采用Lowry’s法（抗干擾Lowry法蛋白定量試劑盒，購自珠海健康元生物技術(shù)公司）測定各組總蛋白，定量后加入5X SDS緩沖液，煮沸10 min變性，于12% SDS聚丙稀酰胺凝膠中電泳。隨后采用濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)移蛋白至NC膜；5％脫脂奶粉封閉，4℃孵育過夜，次日分別加入一抗，分別是：小鼠抗caspase 3(1:1500, Santa Cruz, sc136219)；小鼠抗caspase 9 (1:1000, Santa Cruz, sc56076)。隨后室溫孵育3 h；TBST緩沖液漂洗后分別加入HRP標(biāo)記的二抗：羊抗小鼠IgG（1:10000，北京中杉金橋生物公司, ZB2305）；室溫孵育1 h，TBST緩沖液漂洗3次，每次5 min；ECL化學(xué)發(fā)光法顯示結(jié)果，壓片曝光。以兔抗β-Actin多克隆抗體(1:1000, Santa Cruz，sc-130656)為內(nèi)參照，ImageJ 軟件分析條帶灰度值，結(jié)果以對照組的百分率表示。

免疫熒光檢測原代神經(jīng)元細(xì)胞骨架的形態(tài)變化：神經(jīng)元經(jīng)造模及SBP處理48 h后，吸去培養(yǎng)基，經(jīng)0.01 mol/L的PBS漂洗后，4% 多聚甲醛4℃固定 15 min。0.01 mol/L的PBS漂洗3次后，加入一抗（一抗稀釋液為： 10% 正常山羊血清，0.3% TritonX-100，1％ BSA，0.01 mol/L的PBS配制），所用一抗分別是：兔抗β-III-tublin多克隆抗體（1:2000, abcam, ab18207），小鼠抗MAP2單克隆抗體(1:500, abcam, ab11267)。一抗4℃孵育過夜。切片經(jīng)0.01 mol/L的PBS漂洗后入二抗，二抗分別是：Alexa 568羊抗小鼠IgG（1:600，Moleular probes, A11004）；Alexa 488羊抗兔IgG（1:300, Moleular probes, A11008）；室溫下避光孵育3 h，之后0.01 mol/L的PBS漂洗，熒光封片介質(zhì)封片。在羅達(dá)明和FTC激發(fā)光下，用Olympus 熒光顯微鏡（BX61，日本產(chǎn)）進(jìn)行觀察，拍片。

統(tǒng)計(jì)分析：使用Image J軟件對以上指標(biāo)進(jìn)行測量和統(tǒng)計(jì)，全部數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示，所有實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次，組間差異顯著性檢驗(yàn)釆用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件中的ANOVA法進(jìn)行差異顯著性分析，P<0.05 即有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.01為顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

結(jié)果

2.1 SBP對Aβ25-35所致神經(jīng)損傷模型中細(xì)胞活力的影響

利用MTT法檢測各組神經(jīng)細(xì)胞活力的結(jié)果顯示，神經(jīng)元經(jīng)Aβ25-35造模處理后，相對于對照組細(xì)胞存活率顯著降低（P< 0.01），僅為55.8%；經(jīng)0.1%濃度的SBP 處理后相對于對照組細(xì)胞存活率仍然是明顯降低（P< 0.05），為65.3%；經(jīng)0.5%濃度的SBP 處理后，能提高細(xì)胞存活率至89.7%；1%濃度的SBP亦能提高細(xì)胞存活率至80%以上，但相較0.5%濃度的SBP，量效并無明顯提升（結(jié)果如圖1所示）。2.2 SBP對Aβ25-35所致神經(jīng)損傷模型中細(xì)胞凋亡狀態(tài)的影響

DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，是一種能夠與DNA強(qiáng)力結(jié)合的熒光染料。DAPI染色可用于細(xì)胞凋亡的檢測，在熒光顯微鏡下可以看到到細(xì)胞核的形態(tài)變化，細(xì)胞凋亡時(shí)，染色質(zhì)凝集，胞核碎裂，熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。原代神經(jīng)元DAPI染色結(jié)果表明，在正常培養(yǎng)組及DMSO處理組，神經(jīng)元細(xì)胞核圓潤無皺縮，僅有少量細(xì)胞的核則呈現(xiàn)碎裂和固縮的特征；Aβ25-35作用24小時(shí)后，細(xì)胞凋亡現(xiàn)象明顯增加，出現(xiàn)大量明亮固縮的胞核碎片（結(jié)果如圖2所示）；不同濃度SBP處理48小時(shí)后，凋亡現(xiàn)象有所改善，且呈一定的劑量依賴關(guān)系，0.5%與1.0%的SBP處理組，細(xì)胞凋亡率與模型組相比明顯降低，但兩組之間沒有明顯差別，結(jié)果如圖3所示。

DAPI核染提示可能存在細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，進(jìn)一步采用western blot檢測各組神經(jīng)細(xì)胞凋亡蛋白的表達(dá)結(jié)果顯示，Aβ25-35作用24小時(shí)后，模型組Caspase-3 、Caspase-9蛋白表達(dá)量顯著高于對照組；0.1% 濃度的SBP作用模型組48小時(shí)后，Caspase-3 、Caspase-9蛋白表達(dá)量與單純模型組相比，有所降低，但變化不明顯； 0.5% SBP與1.0% SBP 作用模型組48小時(shí)后，Caspase-3 、Caspase-9蛋白表達(dá)量與單純模型組相比，均明顯降低，提示0.5%與1.0% 的SBP對Aβ25-35引起的細(xì)胞凋亡均具有保護(hù)作用；0.5% SBP與1.0% SBP 模型組之間，凋亡細(xì)胞及凋亡蛋白表達(dá)量沒有明顯差別，提示 0.5% 濃度的SBP已經(jīng)可以達(dá)到抗凋亡的最佳效果（結(jié)果如圖4所示）。

對Aβ25-35所致神經(jīng)損傷模型中細(xì)胞骨架的影響

微管相關(guān)蛋白MAP2是一種神經(jīng)元特異性的細(xì)胞骨架蛋白，通常表達(dá)在成熟神經(jīng)元的樹突，能夠很好的顯示神經(jīng)元樹突的生長狀態(tài)。β-III-Tublin是一種參與神經(jīng)元細(xì)胞類型特異性分化的III型β-微管蛋白，可以很好的展現(xiàn)神經(jīng)元軸突和軸突末端的細(xì)節(jié)。為了顯示SBP對Aβ所致神經(jīng)細(xì)胞損傷的影響作用，利用免疫熒光技術(shù)檢測各組細(xì)胞形態(tài)及骨架蛋白特異性標(biāo)志物的表達(dá)變化。結(jié)果表明，正常體外培養(yǎng)10天的原代神經(jīng)元，MAP2陽性的樹突分支較多，突起較長。10μM Aβ25-35造模處理，培養(yǎng)至第10天時(shí)，一部分神經(jīng)元凋亡或死亡，幸存的神經(jīng)元與同日DMSO處理的神經(jīng)元相比，樹突分枝少，突起也比較短。SBP對Aβ所致神經(jīng)元損傷具有改善作用，0.5%與1.0%濃度的SBP可以明顯提高神經(jīng)元樹突突起的長度。高倍鏡下觀察β-III-Tublin(Tuj1)免疫熒光染色結(jié)果可見，DMSO處理的原代神經(jīng)元在培養(yǎng)至10天時(shí)，神經(jīng)元各突起分支多且較長，胞體及突起熒光信號較強(qiáng)；而Aβ25-35處理后培養(yǎng)至第10天時(shí)，神經(jīng)元突起分支少，且在胞體及突起周圍散布很多點(diǎn)狀碎片；經(jīng)0.5%濃度的SBP處理培養(yǎng)至第10天時(shí)，神經(jīng)元突起明顯變長，點(diǎn)狀碎片減少。

結(jié)論：

β-淀粉樣蛋白肽（β-amyloid peptide，Aβ）是由淀粉樣前體蛋白( amyloid precursor protein，APP) 經(jīng)β-和γ-分泌酶水解產(chǎn)生。神經(jīng)系統(tǒng)所有細(xì)胞均表達(dá)APP和產(chǎn)生Aβ，但在正常時(shí)Aβ的產(chǎn)生和降解保持平衡，且體內(nèi)有一些因素保持Aβ的可溶性。家族性阿爾茨海默病患者APP基因突變可以導(dǎo)致Aβ的過量產(chǎn)生與沉積，從而顯示Aβ的神經(jīng)毒性作用，且這種作用在阿爾茨海默病的病程進(jìn)展中發(fā)揮著主要作用。Aβ25-35為Aβ位于第25-35個(gè)氨基酸位點(diǎn)的基因片段，是引起神經(jīng)毒性的主要活性部位。本研究采用Aβ_25-35作用于小鼠原代神經(jīng)元，24小時(shí)后即可引起神經(jīng)細(xì)胞的過多凋亡；隨后，本研究采用大豆肽（Soybean Peptide, SBP）來對抗Aβ所致神經(jīng)元損傷，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SBP對神經(jīng)細(xì)胞的存活增殖具有明顯的生理效應(yīng)。SBP可以降低神經(jīng)細(xì)胞的凋亡率，Caspase-3、Caspase-9等凋亡蛋白的表達(dá)水平與DAPI核染色表現(xiàn)出的凋亡現(xiàn)象基本一致。

本研究結(jié)果表明，Aβ_25-35作用于小鼠原代神經(jīng)元，除引起神經(jīng)細(xì)胞凋亡外，細(xì)胞骨架也出現(xiàn)了解體及破碎現(xiàn)象。神經(jīng)元的細(xì)胞骨架是由蛋白多聚體組成的一個(gè)三維空間網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，主要有三種成分：微管、微絲和神經(jīng)絲。在神經(jīng)細(xì)胞中，細(xì)胞骨架系統(tǒng)的基本功能是維持神經(jīng)元的特殊形態(tài)，參與形成神經(jīng)元的特定功能區(qū)如胞體、樹突、軸突及突觸，并為神經(jīng)元的物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)提供保障。MAP-2是一個(gè)神經(jīng)元特異性的細(xì)胞骨架蛋白，能夠作為神經(jīng)細(xì)胞表型的標(biāo)記物，MAP-2蛋白被認(rèn)為參與微管組裝，通過與中間絲和其他微管的交聯(lián)作用穩(wěn)定微管生長。β-III-Tublin是一種參與神經(jīng)元細(xì)胞類型特異性分化的微管蛋白，是細(xì)胞骨架的組成成分，在細(xì)胞結(jié)構(gòu)的維護(hù)，有絲分裂，減數(shù)分裂，細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)輸?shù)鹊确矫姘l(fā)揮作用。目前的研究表明，突觸功能障礙是引起阿爾茨海默病患者臨床癥狀加重的主要原因，而細(xì)胞骨架蛋白不正常的解離、聚合及異常的修飾是引起突觸結(jié)構(gòu)和功能改變的重要原因。目前有關(guān)SBP對抗Aβ毒性的研究還未有研究報(bào)道，本研究結(jié)果顯示，SBP作用后，Aβ所致神經(jīng)元損傷后神經(jīng)元樹突突起的長度明顯提高，神經(jīng)元微管蛋白的降解也得到了改善，β-III-Tublin、MAP2等微管蛋白及微管相關(guān)蛋白表達(dá)水平也有所增高。

SBP作為一種大豆蛋白水解后產(chǎn)生的小分子肽鏈，不但具有良好的免疫調(diào)節(jié)和生物防御作用，還能促進(jìn)細(xì)胞的增殖。研究表明，可以通過促進(jìn)2型糖尿病（T2DM）大鼠模型中胰島β細(xì)胞的增殖，來調(diào)節(jié)血清胰島素的分泌水平；SBP還可以刺激免疫細(xì)胞分泌免疫活性因子，增強(qiáng)機(jī)體免疫效應(yīng)；飲用用大豆制品，能促進(jìn)機(jī)體去甲腎上腺素、多巴胺等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，機(jī)體免疫活動(dòng)效應(yīng)增強(qiáng)。此外，給予心肌梗死大鼠模型9周大豆蛋白飲食飼養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)大鼠心肌功能障礙可以得到明顯改善，心肌氧化應(yīng)激損傷顯著降低。Kumrungsee等的研究表明，SBP可以維持細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺的穩(wěn)態(tài)，降低線粒體內(nèi)鈣離子含量，而Aβ可在細(xì)胞膜雙層脂質(zhì)中形成允許Ca²⁺進(jìn)出的通道，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣平衡失調(diào)，細(xì)胞內(nèi)鈣離子增加將導(dǎo)致氧化應(yīng)激的進(jìn)一步增強(qiáng)。因此，SBP維持Ca2+穩(wěn)態(tài)的作用與鈣離子阻滯劑類似，可以此減輕細(xì)胞內(nèi)Aβ的毒性。

綜上所述，Aβ毒性可引起小鼠原代神經(jīng)細(xì)胞凋亡及神經(jīng)細(xì)胞骨架的改變，而本發(fā)明的大豆肽對Aβ誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡及細(xì)胞骨架損傷具有明顯的修復(fù)和保護(hù)作用。由于大豆是我國重要的糧食作物之一，大豆蛋白含量豐富， 因此SBP來源非常廣泛。而作為小分子蛋白質(zhì)，SBP又非常容易被人體吸收。SBP對Aβ誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞損傷所起的保護(hù)作用提示SBP可能對一些神經(jīng)退行性疾病的預(yù)防和恢復(fù)有一定療效，在天然藥物及保健食品的開發(fā)方面有重要的研究和應(yīng)用價(jià)值。

最后應(yīng)說明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可以對前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。