本發(fā)明涉及一種溫敏性填充凝膠制劑，具體涉及一種鼻科用溫敏性填充凝膠制劑及其制備方法，還涉及該溫敏性填充凝膠制劑用于鼻腔鼻竇手術(shù)后發(fā)揮填充、支撐、防止鼻腔粘膜表面粘連作用的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
慢性鼻炎是人類常見(jiàn)、高發(fā)的一種病癥，據(jù)國(guó)家耳鼻喉專家統(tǒng)計(jì)，全國(guó)慢性鼻炎病發(fā)病率高達(dá)37％，臨床上稱之為不可治愈頑癥，以前在醫(yī)學(xué)預(yù)防治療上不予以重視，加之沒(méi)有相應(yīng)的治療方法和藥物，使之在臨床上治療時(shí)仍沿用過(guò)去的一般抗炎治療，不能取得良好的療效。鼻炎絕非一般炎癥，而是一種“非特異性組織性鼻炎”，用常規(guī)的消炎治療不會(huì)取得良好的效果，加之慢性鼻炎的病癥又和人的精神、情緒有很大關(guān)系，所以一味的消炎、抗菌，只會(huì)延誤病情，對(duì)身體造成損害。
近年來(lái)，隨著鼻竇內(nèi)窺鏡手術(shù)引入中國(guó)，功能性鼻內(nèi)窺鏡手術(shù)已經(jīng)成為治療慢性鼻竇炎最重要的方法，該方法具有創(chuàng)傷小、術(shù)中及術(shù)后痛苦小、手術(shù)徹底、操作精細(xì)等優(yōu)點(diǎn)，但在手術(shù)后愈合的過(guò)程中仍不免伴有出血、粘連、疤痕形成等并發(fā)癥，這些粘連、傷疤可能阻塞鼻竇，引發(fā)疾病。為了保護(hù)創(chuàng)面，防止粘連，通常采用的辦法是通過(guò)填充材料對(duì)鼻腔進(jìn)行填充，使用較廣泛的鼻填充材料有明膠海綿、進(jìn)口膨脹海綿等，該類鼻填充材料壓迫止血效果好，但缺點(diǎn)是創(chuàng)面邊角落海綿放置困難且術(shù)后需要取出，易造成對(duì)創(chuàng)面的二次傷害。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明提供了一種鼻科用溫敏性填充凝膠制劑，該凝膠用于鼻腔中，具有填充、防粘連、止血、抑菌、保護(hù)創(chuàng)面的作用，且該凝膠具有溫敏性，在未進(jìn)入人體時(shí)具有較低的粘度，這樣能保證凝膠在推出時(shí)阻力較小，容易經(jīng)過(guò)輸送導(dǎo)管等到達(dá)鼻腔所需部位，在進(jìn)入人體后，由于溫度升高，凝膠粘度及粘附力增大，這樣能避免凝膠在使用過(guò)程中從鼻腔中流出，提高了產(chǎn)品的有效性。
本發(fā)明還提供了該鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的制備方法，其制備方法簡(jiǎn)單，便于操作實(shí)施。
本發(fā)明還提供了該鼻科用溫敏性填充凝膠制劑在鼻腔和鼻竇手術(shù)中的應(yīng)用，該溫敏性鼻科用填充凝膠制劑用于鼻腔鼻竇手術(shù)中，具有填充、防粘連、止血、抑菌、保護(hù)創(chuàng)面的作用，且術(shù)后不需取出，避免了對(duì)鼻腔粘膜的二次傷害。
本發(fā)明具體技術(shù)方案如下：
本發(fā)明鼻科用溫敏性填充凝膠制劑，包括以下重量百分比的組分：殼聚糖3～20％、纖維素0.3～3％、泊洛沙姆15～25％、堿性緩沖溶液52～81.7％。
優(yōu)選的，上述鼻科用溫敏性填充凝膠制劑包括以下重量百分比的組分：殼聚糖8-12％，纖維素1-1.8％，泊洛沙姆17-20.5％，堿性緩沖溶液65.7-74％；更優(yōu)選的，包括以下重量百分比的組分：殼聚糖10％，纖維素1.5％，泊洛沙姆20％，堿性緩沖溶液68.5％。
上述凝膠制劑中，所述殼聚糖指的是水溶性殼聚糖及其衍生物，即水溶性殼聚糖及殼聚糖的水溶性衍生物，包括水溶性殼聚糖、殼聚糖季銨鹽、殼聚糖鹽酸鹽、殼聚糖醋酸鹽、殼聚糖乳酸鹽、殼聚糖磷酸鹽、殼聚糖檸檬酸鹽和殼聚糖谷氨酸鹽等中的一種或多種。
本發(fā)明凝膠制劑中，水溶性殼聚糖及其衍生物的分子量選擇5×103～2×106Da，優(yōu)選為3×104～4×105Da。
上述凝膠制劑中，所述纖維素指的是：纖維素及其衍生物，包括纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素和羥丙基甲基纖維素等中的一種或多種。
上述凝膠制劑中，泊洛沙姆選擇泊洛沙姆407、泊洛沙姆188，或者是泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的混合物。泊洛沙姆407和泊洛沙姆188是高分子反向熱敏聚合物，具有溫度敏感的特性，單獨(dú)使用泊洛沙姆407或188時(shí)，其在凝膠制劑中的含量?jī)?yōu)選為15-19％，使用這兩者的混合物時(shí)，其在凝膠制劑中的含量?jī)?yōu)選為20-25％。
本發(fā)明凝膠制劑中，所述的堿性緩沖溶液為磷酸鹽緩沖液，所述磷酸鹽緩沖液包括以下有效組分：
組分A：磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉或磷酸；
組分B：磷酸氫二鉀或磷酸氫二鈉；
組分C：氯化鈉、氯化鉀和氫氧化鈉的混合物。
進(jìn)一步的，磷酸鹽緩沖液中的各組分在鼻科用溫敏性填充凝膠制劑中的重量百分含量如下：組分A的含量為0.01-2.0％，組分B的含量為0.01-2.0％，組分C中，氯化鈉的含量為1-5％，氯化鉀的含量為0.01-2.0％，氫氧化鈉的含量為0.01-0.1％。
進(jìn)一步的，所述磷酸鹽緩沖液中還包括混合溶劑，所述混合溶劑由水和下述物質(zhì)中的一種或多種混合而得：甘油、甘油磷酸酯二鈉、丙二醇、聚乙二醇，混合溶劑優(yōu)選為水、甘油和甘油磷酸酯二鈉的混合物。所述聚乙二醇優(yōu)選為聚乙二醇300-400。
本發(fā)明凝膠制劑中，所述的堿性緩沖體系的pH值為8-12。
本發(fā)明鼻科用溫敏性填充凝膠制劑最終的pH值為4-10；其在25℃、剪切速率221s-1條件下的粘度為0.5-5.0Pa·s，在37℃、剪切速率2s-1條件下的粘度為100-400Pa·s；37℃條件下的生物粘附力為50-100N/cm2；抑菌率為50-100％。
本發(fā)明還提供了上述鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的制備方法，該方法包括以下步驟：
(1)將堿性緩沖體系和殼聚糖混合均勻，然后在攪拌下向其中加入纖維素和泊洛沙姆，充分?jǐn)嚢杈鶆颍?/p>
(2)將混合物在室溫下靜置至充分溶脹，然后滅菌，得鼻科用溫敏性填充凝膠制劑。
上述步驟(2)中，混合物在室溫下靜置72-100h。
本發(fā)明鼻科用溫敏性填充凝膠制劑具有填充、防粘連、止血、抑菌、保護(hù)創(chuàng)面的作用，在鼻腔鼻竇手術(shù)后可以將該產(chǎn)品借助輸送導(dǎo)管注入人體鼻腔中，因其優(yōu)異的溫敏特性，注入時(shí)易于推入，進(jìn)入鼻腔后不易流出，能起到很好的填充作用，還可以有效防止鼻腔粘膜表面的粘連，控制少量出血及預(yù)防感染，保護(hù)創(chuàng)面同時(shí)輔助創(chuàng)面自然愈合，且7-14天后該產(chǎn)品可自然降解或被沖洗掉，使用方便，避免了被創(chuàng)面的二次傷害。因此，本發(fā)明對(duì)于該鼻科用溫敏性填充凝膠制劑作為鼻填充材料的應(yīng)用，或者在制備鼻填充材料中的應(yīng)用也進(jìn)行保護(hù)。
上述應(yīng)用中，所述鼻科用溫敏性填充凝膠制劑用作鼻填充材料時(shí)，優(yōu)選采用一次性注射器進(jìn)行包裝，同時(shí)配套一次性輸送導(dǎo)管。在使用時(shí)，將該凝膠制劑用輸送導(dǎo)管送入鼻腔，進(jìn)入鼻腔后，隨著溫度的變化，該凝膠制劑粘度和生物粘附力變大，起到了填充、防粘連、保護(hù)創(chuàng)面、抑菌的作用，使用方便。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：
1、本發(fā)明凝膠制劑通過(guò)殼聚糖和纖維素溶液發(fā)生靜電作用生成。纖維素是自然界最豐富的天然高分子，可用于制備生物可降解性、生物相容性以及可衍生化產(chǎn)品；殼聚糖是自然界中唯一帶正電荷的堿性多糖，與纖維素分子結(jié)構(gòu)相似，在C-2位置上取代纖維素的羥基具有氨基基團(tuán)，具有促進(jìn)傷口愈合和防腐抗菌等功能。本發(fā)明以殼聚糖為支撐骨架，構(gòu)成無(wú)交聯(lián)劑網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，可以賦予纖維素多孔材料抗菌、吸濕以及良好的生物相容性等性能。
2、本發(fā)明凝膠制劑中含有泊洛沙姆等溫敏材料，具有溫度敏感性，使之在未進(jìn)入人體時(shí)具有較低的粘度，這樣能保證凝膠在推出時(shí)阻力較小，容易經(jīng)過(guò)輸送導(dǎo)管等到達(dá)鼻腔所需部位，在進(jìn)入人體后，由于溫度升高，凝膠粘度及粘附力增大，這樣能避免凝膠在使用過(guò)程中從鼻腔中流出，能有效提高與創(chuàng)面作用時(shí)間，提高了產(chǎn)品的有效性。
3、本發(fā)明凝膠制劑具有水溶性及生物可降解性，術(shù)后不用取出，可在7-14天內(nèi)自然分解或可以經(jīng)生理鹽水沖洗掉，不會(huì)對(duì)創(chuàng)面造成二次傷害。
4、本發(fā)明制備方法簡(jiǎn)單，所得凝膠制劑通過(guò)輸送導(dǎo)管由注射器注入到鼻腔、鼻竇術(shù)后部位，可以有效防止鼻腔粘膜表面的粘連，控制少量出血及預(yù)防感染、輔助自然愈合，具有很好的填充、防粘連、止血、抑菌、保護(hù)創(chuàng)面的作用，且7-14天后可自然降解或被沖洗掉，防止對(duì)創(chuàng)造的二次傷害，使用方便。
附圖說(shuō)明
圖1生物粘附力測(cè)定方法實(shí)驗(yàn)裝置，其中A：平衡支架，B：燒杯，C：玻璃安瓿瓶，D：凝膠制劑，E：鼻腔粘膜組織，F(xiàn)：可調(diào)支架。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明提供了一種鼻科用溫敏性填充凝膠制劑，該制劑組分包括：殼聚糖、纖維素、泊洛沙姆和堿性緩沖溶液。
本發(fā)明鼻科用溫敏性填充凝膠制劑中，殼聚糖在填充凝膠制劑中的重量百分比含量為3-20％，例如3％、4％、6％、8％、10％、12％、15％、18％、20％，優(yōu)選為8-12％。本發(fā)明殼聚糖指的是水溶性殼聚糖及其衍生物，可以是水溶性殼聚糖、殼聚糖季銨鹽、殼聚糖鹽酸鹽、殼聚糖醋酸鹽、殼聚糖乳酸鹽、殼聚糖磷酸鹽、殼聚糖檸檬酸鹽、殼聚糖谷氨酸鹽中的任意一種，也可以是它們的混合物，例如殼聚糖鹽酸鹽和殼聚糖醋酸鹽的混合物，殼聚糖季銨鹽和殼聚糖谷氨酸鹽的混合物，殼聚糖磷酸鹽和殼聚糖檸檬酸鹽的混合物，水溶性殼聚糖和殼聚糖鹽酸鹽的混合物等。本發(fā)明對(duì)于殼聚糖的來(lái)源沒(méi)有限制，可以從市場(chǎng)上購(gòu)買得到。本發(fā)明殼聚糖的分子量可以選擇5×103～2×106Da，例如5×103Da、8×103Da、1×104Da、3×104Da、3×104Da、5×104Da、7×104Da、1×105Da、2×105Da、4×105Da、6×105Da、8×105Da、1×106Da、1.5×106Da、2×106Da，優(yōu)選為3×104～4×105Da。
本發(fā)明鼻科用溫敏性填充凝膠制劑中，纖維素在填充凝膠制劑中的重量百分比含量為0.3-3％，例如0.3％、0.8％、1.0％、1.5％、1.8％、2％、2.5％、2.8％、3％，優(yōu)選為1-1.8％。本發(fā)明纖維素指的是纖維素及其衍生物，可以是纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素的任意一種，也可以是它們的混合物，例如甲基纖維素和羧甲基纖維素鈉的混合物，羥丙基甲基纖維素和羧甲基纖維素鈉的混合物，纖維素和羥丙基纖維素的混合物等。本發(fā)明對(duì)于纖維素及其衍生物的來(lái)源和分子量沒(méi)有限制，可以從市場(chǎng)上購(gòu)買得到。
本發(fā)明鼻科用溫敏性填充凝膠制劑中，泊洛沙姆在填充凝膠制劑中的重量百分比含量為15～25％，例如15％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％，優(yōu)選為17-20.5％。本發(fā)明泊洛沙姆可以是泊洛沙姆407或者是泊洛沙姆188，還可以是它們的混合物。當(dāng)泊洛沙姆為泊洛沙姆407或者是泊洛沙姆188時(shí)，其在填充凝膠制劑中的重量百分比含量為15-19％，當(dāng)為它們的混合物時(shí)，其在填充凝膠制劑中的重量百分比含量為20-25％。
本發(fā)明鼻科用溫敏性填充凝膠制劑中，堿性緩沖溶液在填充凝膠制劑中的重量百分比含量為52～81.7％，例如52％、55％、58％、60.8％、65％、70％、76.5％、79％、81.7％，優(yōu)選為65.7-74％。本發(fā)明堿性緩沖溶液是堿性磷酸鹽緩沖液，由鹽和溶劑組成，緩沖液的pH為8-12。具體的，磷酸鹽緩沖液的鹽分為三類：第一類為磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉或磷酸的任一種；第二類為磷酸氫二鉀或磷酸氫二鈉；第三類為氯化鈉、氯化鉀和氫氧化鈉的混合物。第一類鹽(磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉或磷酸的任一種)在凝膠制劑中的重量百分比含量為0.01-2.0％，例如0.01％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.08％、0.10％、0.12％、0.15％、0.16％、0.18％、0.20％、0.30％、0.50％、0.80％、1.0％、1.2％、1.5％、1.8％、2.0％，優(yōu)選為0.04-0.2％。第二類鹽(磷酸氫二鉀或磷酸氫二鈉)在凝膠制劑中的重量百分比含量為0.01-2.0％，例如0.01％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.08％、0.10％、0.12％、0.15％、0.16％、0.18％、0.20％、0.30％、0.40％、0.45％、0.50％、0.54％、0.60％、0.80％、1.0％、1.2％、1.5％、1.8％、2.0％，優(yōu)選為0.1-0.6％。第三類鹽在凝膠制劑中的重量百分比含量為：氯化鈉1-5％、氯化鉀的含量為0.01-2.0％、氫氧化鈉0.01-0.1％，具體的，氯化鈉在凝膠制劑中的重量百分含量可以為1％、2％、3％、4％、5％，優(yōu)選1-4％；氯化鉀在凝膠制劑中的重量百分含量可以為0.01％、0.03％、0.06％、0.08％、0.10％、0.12％、0.15％、0.20％、0.50％、0.80％、1.0％、1.5％、2.0％，優(yōu)選0.01-0.2％；氫氧化鈉在凝膠制劑中的重量百分含量可以為0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％。在實(shí)際操作中，可以從上述含量范圍中選擇合適的各鹽的含量，以使磷酸鹽緩沖液pH在8-12之間。
本發(fā)明中，磷酸鹽緩沖液的溶劑為混合溶劑，具體為水和下述物質(zhì)中的一種或多種混合而得：甘油、甘油磷酸酯二鈉、丙二醇、聚乙二醇，所述聚乙二醇優(yōu)選為聚乙二醇300-400。例如，混合溶劑可以是水和甘油的混合物，可以是水和丙二醇的混合物，可以是水和聚乙二醇的混合物，可以是水、甘油、甘油磷酸酯二鈉的混合物等，優(yōu)選為水、甘油和甘油磷酸酯二鈉的混合物。當(dāng)甘油、甘油磷酸酯二鈉、丙二醇、聚乙二醇中的一種與水混合時(shí)，甘油、甘油磷酸酯二鈉、丙二醇或聚乙二醇在凝膠制劑中的重量百分比含量可為0.8-2％，例如0.8％、1.0％、1.2％、1.5％、1.8％、2.0％。當(dāng)甘油、甘油磷酸酯二鈉、丙二醇、聚乙二醇中的多種與水混合時(shí)，它們中的任意一種在凝膠制劑中的重量百分比含量可為0.8-2％，例如當(dāng)甘油、甘油磷酸酯二鈉和水組成形成混合溶劑時(shí)，甘油在凝膠制劑中的重量百分比含量可以從0.8-2％范圍內(nèi)選取，甘油磷酸酯二鈉在凝膠制劑中的重量百分比含量也可以從0.8-2％范圍內(nèi)選擇。
本發(fā)明的鼻科用溫敏性填充凝膠制劑，其最終pH值為4-10，優(yōu)選為6-9；粘度在25℃、剪切速率221s-1條件下為0.5-5.0Pa·s，優(yōu)選為2.0-3.0Pa·s，在37℃、剪切速率2s-1條件下為100-400Pa·s，優(yōu)選為300-380Pa·s；37℃條件下的生物粘附力為50-100N/cm2，優(yōu)選為60-90N/cm2；抑菌率為50-100％。本發(fā)明凝膠制劑具有溫敏特性，粘度會(huì)隨溫度產(chǎn)生變化，能用于鼻腔鼻竇手術(shù)后，起到填充、止血、抑菌、護(hù)創(chuàng)等功效。
本發(fā)明鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的制備方法簡(jiǎn)單，包括以下步驟：
(1)將堿性緩沖體系和殼聚糖混合均勻，然后在攪拌下向其中加入纖維素和泊洛沙姆，充分?jǐn)嚢杈鶆颍?/p>
(2)將混合物在室溫下靜置至充分溶脹，然后滅菌，得鼻科用溫敏性填充凝膠制劑。
上述方法中，先按照配方配成堿性緩沖體系，然后再將殼聚糖和堿性緩沖體系混合均勻，然后再在攪拌下加入纖維素和泊洛沙姆，攪拌混合致它們充分分散溶解。
上述步驟(2)中，混合物在室溫下靜置72-100h，以充分溶脹。
上述步驟(2)中，混合物溶脹后可以采用工業(yè)上使用的任意方法進(jìn)行滅菌，優(yōu)選使用輻照滅菌，輻照方式可為高能電子束射線或60Coγ-射線。輻照劑量可以為10K～70K，例如10K、30K、50K、70K，輻照時(shí)間可以為10～40min，例如10min、20min、30min、40min。
上述步驟(2)中，滅菌后的產(chǎn)品在常溫下儲(chǔ)藏。該凝膠制劑還可以采用單劑量一次性的注射器進(jìn)行包裝，同時(shí)配套一次性輸送導(dǎo)管，以便于使用。
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。下述實(shí)施例是在本發(fā)明技術(shù)方案的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，進(jìn)一步給出了本發(fā)明詳細(xì)的實(shí)施方式和具體的操作過(guò)程，實(shí)施例將有助于理解本發(fā)明，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實(shí)施例。實(shí)施例中所用方法如無(wú)特別說(shuō)明均為常規(guī)方法，各組分的用量如無(wú)特別說(shuō)明均為重量百分比。
實(shí)施例1
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑配方為：分子量為400KDa的殼聚糖鹽酸鹽3％，羥丙基纖維素0.3％，泊洛沙姆40715％，堿性緩沖體系81.7％。其中，堿性緩沖體系為磷酸鹽緩沖液，pH為8，緩沖液成分及在凝膠制劑中的含量為：磷酸二氫鉀0.04％、磷酸氫二鈉0.45％、氯化鈉2％、氯化鉀0.06％、氫氧化鈉0.01％、聚乙二醇4000.8％、水78.34％。
溫敏性鼻科用填充凝膠制劑的制備方法為：
(1)按配方分別稱取各所需原料；
(2)將堿性緩沖體系各組分按配比混合，配成堿性緩沖體系；
(3)將殼聚糖鹽酸鹽加入堿性緩沖體系中，攪拌均勻；
(4)將羥丙基纖維素和泊洛沙姆407在攪拌的條件下加入上述步驟(3)的混合物中中，并充分?jǐn)嚢杈鶆颍?/p>
(5)將上述步驟(4)的混合物在室溫下靜置72h，充分溶脹后進(jìn)行輻照滅菌，輻照方式可以為高能電子束射線或60Coγ-射線，輻照劑量為20K，輻照時(shí)間為30min；
(6)滅菌后，即得溫敏性鼻科用填充凝膠制劑，其pH為6.3。將該制劑用單劑量一次性的注射器進(jìn)行包裝，同時(shí)配套一次性輸送導(dǎo)管，待用。
實(shí)施例2
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑配方為：分子量為400KDa的殼聚糖醋酸鹽6％，羥丙基纖維素0.6％、羧甲基纖維素0.2％，泊洛沙姆40719％，堿性緩沖體系74.2％。其中，堿性緩沖體系為磷酸鹽緩沖液，pH為9，緩沖液成分及在凝膠制劑中的含量為：磷酸二氫鉀0.06％、磷酸氫二鈉0.54％、氯化鈉3.0％、氯化鉀0.10％、氫氧化鈉0.05％、丙二醇1.5％、水68.95％。
制備方法參照實(shí)施例1，所得鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的pH為7.5。
實(shí)施例3
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑配方為：分子量400KDa的殼聚糖鹽酸鹽5％，殼聚糖醋酸鹽3％，羧甲基纖維素1.0％，泊洛沙姆40717％，堿性緩沖體系74％。其中，堿性緩沖體系為磷酸鹽緩沖液，pH為10，緩沖液成分及在凝膠制劑中的含量為：磷酸二氫鉀0.10％、磷酸氫二鈉0.12％、氯化鈉4.0％、氯化鉀0.15％、氫氧化鈉0.1％、甘油1％、甘油磷酸酯二鈉1.5％、水67.03％。
制備方法參照實(shí)施例1，所得鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的pH為7.9。
實(shí)施例4
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑配方為：分子量400KDa的殼聚糖鹽酸鹽10％，羥丙基甲基纖維素1.5％，泊洛沙姆40718％，泊洛沙姆1882％，堿性緩沖體系68.5％。其中，堿性緩沖體系為磷酸鹽緩沖液，pH為11，緩沖液成分及在凝膠制劑中的含量為：磷酸二氫鉀0.04％、磷酸氫二鈉0.45％、氯化鈉2％、氯化鉀0.06％、氫氧化鈉0.01％、甘油1％、水64.94％。
制備方法參照實(shí)施例1，所得鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的pH為8.6。
實(shí)施例5
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑配方為：分子量400KDa的殼聚糖乳酸鹽12％、羥丙基甲基纖維素1.8％，泊洛沙姆40718.5％、泊洛沙姆1882.0％，堿性緩沖體系65.7％。其中，堿性緩沖體系為磷酸鹽緩沖液，pH為10，緩沖液成分及在凝膠制劑中的含量為：磷酸二氫鉀0.18％、磷酸氫二鈉0.30％、氯化鈉1.0％、氯化鉀0.01％、氫氧化鈉0.03％、甘油1.2％、甘油磷酸酯二鈉1.8％、水61.18％。
制備方法參照實(shí)施例1，所得鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的pH為7.5。
實(shí)施例6
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑配方為：分子量400KDa的殼聚糖鹽酸鹽13％、殼聚糖乳酸鹽2％，甲基纖維素2％，泊洛沙姆40719.5％、泊洛沙姆1882.5％，堿性緩沖體系61％。其中，堿性緩沖體系為磷酸鹽緩沖液，pH為10，緩沖液成分及在凝膠制劑中的含量為：磷酸二氫鉀0.10％、磷酸氫二鈉0.12％、氯化鈉4.0％、氯化鉀0.15％、氫氧化鈉0.1％、甘油1％、甘油磷酸酯二鈉1.5％、水54.03％。
制備方法參照實(shí)施例1，所得鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的pH為7.6。
實(shí)施例7
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑配方為：分子量400KDa的殼聚糖醋酸鹽20％，羥丙基纖維素2％、羥乙基纖維素1％，泊洛沙姆40722％、泊洛沙姆1883％，堿性緩沖體系52％。其中，堿性緩沖體系為磷酸鹽緩沖液，pH為12，緩沖液成分及在凝膠制劑中的含量為：磷酸二氫鉀0.06％、磷酸氫二鈉0.54％、氯化鈉3.0％、氯化鉀0.10％、氫氧化鈉0.05％、甘油1％、水47.25％。
制備方法參照實(shí)施例1，所得鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的pH為9.0。
實(shí)施例8
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的配方和制備方法同實(shí)施例4，不同的是：殼聚糖鹽酸鹽的分子量為30KDa。
實(shí)施例9
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的配方和制備方法同實(shí)施例4，不同的是：殼聚糖鹽酸鹽的分子量為5KDa。
實(shí)施例10
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的配方和制備方法同實(shí)施例4，不同的是：殼聚糖鹽酸鹽的分子量為2000KDa。
比較例1
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑配方為：分子量為400KDa的殼聚糖鹽酸鹽1％，羥丙基纖維素0.3％，泊洛沙姆40715％，堿性緩沖體系83.7％。其中，堿性緩沖體系為磷酸鹽緩沖液，pH為8，緩沖液成分及在凝膠制劑中的含量為：磷酸二氫鉀0.04％、磷酸氫二鈉0.45％、氯化鈉2％、氯化鉀0.06％、氫氧化鈉0.01％、聚乙二醇4000.8％、水80.34％。
制備方法參照實(shí)施例1，所得鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的pH為6.2。
比較例2
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑配方為：分子量為400KDa的殼聚糖鹽酸鹽3％，羥丙基纖維素0.1％，泊洛沙姆40715％，堿性緩沖體系81.9％。其中，堿性緩沖體系為磷酸鹽緩沖液，pH為8，緩沖液成分及在凝膠制劑中的含量為：磷酸二氫鉀0.04％、磷酸氫二鈉0.45％、氯化鈉2％、氯化鉀0.06％、氫氧化鈉0.01％、聚乙二醇4000.8％、水78.54％。
制備方法參照實(shí)施例1，所得鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的pH為6.5。
比較例3
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑配方為：分子量為400KDa的殼聚糖鹽酸鹽5％，殼聚糖醋酸鹽3％，羧甲基纖維素1％，泊洛沙姆40714％，堿性緩沖體系77％。其中，堿性緩沖體系為磷酸鹽緩沖液，pH為10，緩沖液成分及在凝膠制劑中的含量為：磷酸二氫鉀0.10％、磷酸氫二鈉0.12％、氯化鈉4.0％、氯化鉀0.15％、氫氧化鈉0.1％、甘油1％、甘油磷酸酯二鈉1.5％、水70.03％。
制備方法參照實(shí)施例1，所得鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的pH為8.0。
比較例4
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑配方為：分子量為400KDa的殼聚糖醋酸鹽20％，羥丙基纖維素2％、羥乙基纖維素1％，泊洛沙姆40723％，泊洛沙姆1883％，堿性緩沖體系51％。其中，堿性緩沖體系為磷酸鹽緩沖液，pH為12，緩沖液成分及在凝膠制劑中的含量為：磷酸二氫鉀0.06％、磷酸氫二鈉0.54％、氯化鈉3.0％、氯化鉀0.10％、氫氧化鈉0.05％、甘油1％、水46.25％。
制備方法參照實(shí)施例1，所得鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的pH為8.9。
比較例5
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑配方為：分子量400KDa的殼聚糖醋酸鹽20％，羥丙基纖維素3％、羥乙基纖維素2％，泊洛沙姆40722％、泊洛沙姆1883％，堿性緩沖體系50％。其中，堿性緩沖體系為磷酸鹽緩沖液，pH為12，緩沖液成分及在凝膠制劑中的含量為：磷酸二氫鉀0.06％、磷酸氫二鈉0.54％、氯化鈉3.0％、氯化鉀0.10％、氫氧化鈉0.05％、甘油1％、水45.25％。
制備方法參照實(shí)施例1，所得鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的pH為9.0。
比較例6
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑配方為：分子量400KDa的殼聚糖乳酸鹽12％、羥丙基甲基纖維素1.8％，泊洛沙姆40718.5％、泊洛沙姆1882.0％，堿性緩沖體系65.7％。其中，堿性緩沖體系為磷酸鹽緩沖液，pH為10，緩沖液成分及在凝膠制劑中的含量為：磷酸二氫鉀0.18％、磷酸氫二鈉0.30％、氯化鈉0％、氯化鉀0％、氫氧化鈉0.03％、甘油1.2％、甘油磷酸酯二鈉1.8％、水62.19％。
制備方法參照實(shí)施例1，所得鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的pH為7.5。
比較例7
鼻科用溫敏性填充凝膠制劑配方為：分子量為400KDa的殼聚糖鹽酸鹽25％，甲基纖維素2％，泊洛沙姆40719.5％、泊洛沙姆1882.5％，堿性緩沖體系51％。其中，堿性緩沖體系為磷酸鹽緩沖液，pH為10，緩沖液成分及在凝膠制劑中的含量為：磷酸二氫鉀0.10％、磷酸氫二鈉0.12％、氯化鈉4.0％、氯化鉀0.15％、氫氧化鈉0.1％、甘油1％、甘油磷酸酯二鈉1.5％、水44.03％。
制備方法參照實(shí)施例1，所得鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的pH為7.2。
對(duì)上述實(shí)施例和對(duì)比例的鼻科用溫敏性填充凝膠制劑的粘度、生物粘附力及抑菌性進(jìn)行測(cè)定，方法如下：
一、測(cè)試方法
1、粘度測(cè)定方法：采用博力飛牌(BROOKFIELD)R/S型流變儀的椎板系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定，選用P50轉(zhuǎn)子，調(diào)節(jié)錐體與平板間的距離為1mm，取鼻科用溫敏性填充凝膠制劑樣品2mL注入錐體和平板之間，分別在(25±0.2)℃、剪切速率為221s-1條件下和在(37±0.2)℃、剪切速率為2s-1條件下測(cè)量。
2、生物粘附力測(cè)定方法：實(shí)驗(yàn)裝置如圖1，取大耳新西蘭白兔新鮮鼻腔粘膜組織兩段，分別將它們緊固于玻璃安瓿兩端E位置(粘膜面向外)，將玻璃安瓿瓶在37℃下保持10min后，將本發(fā)明的溫敏性鼻科用填充凝膠制劑0.15g涂在兩段鼻腔粘膜組織上再在37℃下保持10min，然后立即將一個(gè)安瓿瓶固定連接在平衡架上，另一個(gè)固定在可調(diào)支架上，調(diào)節(jié)支架F的高度，使左右保持平衡。在B處放入已稱重的燒杯并勻速緩慢往燒杯內(nèi)滴加自來(lái)水，直至使通過(guò)凝膠粘附的兩段組織恰好分開(kāi)，稱量燒杯及水的總質(zhì)量，每份樣品重復(fù)三次，取其平均值。單位面積的剝離力即為生物粘附力，單位N/cm2。
3、抑菌性測(cè)定方法：根據(jù)《GB 15979－2002一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)附錄C4溶出性抗(抑)菌產(chǎn)品抑菌性能試驗(yàn)方法》進(jìn)行測(cè)定。
①準(zhǔn)備試驗(yàn)材料：PBS、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、沙氏瓊脂培養(yǎng)基等、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、試管、一次性平皿、培養(yǎng)箱等；
②試驗(yàn)菌與菌液制備：
試驗(yàn)菌：大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌；
菌液制備：將事先準(zhǔn)備好的菌懸液，用PBS稀釋至要求濃度(要求濃度為：用100μl滴于對(duì)照樣品上，回收菌數(shù)為1×104～9×104/片)。
③操作步驟：
取被試樣品(5g)和對(duì)照樣品(與試樣同質(zhì)材料，同等質(zhì)量，但不含抗菌材料，且經(jīng)滅菌處理)各4管(置于滅菌試管內(nèi))。
取上述菌懸液，分別在每個(gè)被試樣品和對(duì)照樣品上滴加100μl，均勻混合，開(kāi)始計(jì)時(shí)，作用20min，投入含5ml PBS的試管內(nèi)，充分混勻，作適當(dāng)稀釋，然后取其中2～3個(gè)稀釋度，分別吸取0.5ml，置于兩個(gè)平皿，用涼至40～45℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(細(xì)菌)或沙氏瓊脂培養(yǎng)基(酵母菌)15ml作傾注，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板，在35±2℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h(細(xì)菌)72h(酵母菌)，作活菌菌落計(jì)數(shù)。
④計(jì)算方法
試驗(yàn)重復(fù)3次，按下式計(jì)算抑菌率：
X4＝(A-B)/A×100％
式中：X4――抑菌率，％；
A――對(duì)照樣品平均菌落數(shù)；
B――被試樣品平均菌落數(shù)。
⑤評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)
抑菌率≥50％～90％，產(chǎn)品有抑菌作用，抑菌率≥90％，產(chǎn)品有較強(qiáng)抑菌作用。
二、測(cè)試結(jié)果
1、各實(shí)施例和比較例溫敏性鼻科用填充凝膠制劑的粘度和生物粘附力測(cè)定結(jié)果，如下表1所示。
表1各實(shí)施例以及比較例樣品的粘度、生物粘附力情況
2、各實(shí)施例和比較例溫敏性鼻科用填充凝膠制劑的抑菌效果，如下表2所示。
表2各實(shí)施例以及比較例的樣品的抑菌率測(cè)試結(jié)果
本發(fā)明通過(guò)殼聚糖與纖維素之間的靜電作用，構(gòu)成無(wú)交聯(lián)劑網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，生成凝膠狀制劑。從表1看，在一定范圍內(nèi)增大纖維素重量百分比，例如在0.3-3％含量范圍內(nèi)可使形成的凝膠在25℃、37℃條件下的粘度及37℃條件下的生物粘附性變大，但是從比較例5可以看出，當(dāng)纖維素重量百分比超出一定范圍，形成的凝膠在25℃條件下粘度過(guò)大，且37℃條件下的生物粘附性反而減小，這會(huì)增加凝膠注射的難度和影響填充的效果，這是由于加入過(guò)多的纖維素使生成的凝膠制劑性狀發(fā)生改變，導(dǎo)致凝膠變硬、變脆的結(jié)果。但如果纖維素的重量百分比過(guò)小(小于0.3％)，如比較例2所示，會(huì)使凝膠在25℃、37℃條件下的粘度及37℃條件下的生物粘附性變小，直接影響凝膠的填充效果。泊洛沙姆為高分子反向熱敏聚合物，從表1看，實(shí)施例1-10中的泊洛沙姆含量在15～25％范圍內(nèi)，所得凝膠制劑具有較好的溫敏性；比較例3中的泊洛沙姆407含量為14％，所得凝膠制劑在37℃下的粘度與25℃下的粘度相差不大，這是因?yàn)椴绰迳衬泛康陀?5％時(shí)凝膠制劑便不再具有溫敏性，即粘度不會(huì)隨著溫度升高而增大。但從比較例4看，如果加入的泊洛沙姆濃度太高也不利，當(dāng)濃度超過(guò)25％時(shí)，會(huì)使25℃下凝膠的粘度升高，最終導(dǎo)致凝膠在推出時(shí)阻力變大，不易推出。綜合粘度和生物粘附力數(shù)據(jù)可以看出，實(shí)施例4的凝膠產(chǎn)品配方最佳，在該配方條件下，所得鼻科用溫敏性填充凝膠制劑在25℃、剪切速率為221s-1條件下粘度僅為2.7Pa·s，在37℃、剪切速率為2s-1條件下凝膠粘度為372Pa·s，且生物黏附力為89N/cm2，既能順利通過(guò)輸送導(dǎo)管達(dá)到鼻腔所需部位，又能保證凝膠進(jìn)入鼻腔后不易流出，提高作用時(shí)間，更好的保護(hù)鼻腔創(chuàng)面。
對(duì)上述實(shí)施例和對(duì)比例的樣品的安全性進(jìn)行測(cè)試，方法如下：
本發(fā)明的鼻科用溫敏性填充凝膠制劑，又名“鼻填充材料”，由山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心按GB/T16886.5～2003和GB/T16886.10～2005標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施細(xì)胞毒性試驗(yàn)、遲發(fā)型超敏反應(yīng)和皮內(nèi)刺激試驗(yàn)三項(xiàng)安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)。
安全性試驗(yàn)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)如表3所示，實(shí)際檢測(cè)結(jié)果如表4所示，檢測(cè)結(jié)果表明本發(fā)明鼻科用溫敏性填充凝膠制劑無(wú)細(xì)胞毒性、無(wú)過(guò)敏性和無(wú)刺激性，具有較高的安全性。但從比較例1和比較例7中可以看出，由于殼聚糖鹽酸鹽為強(qiáng)陽(yáng)離子抑菌劑，如果加入殼聚糖鹽酸鹽百分含量過(guò)低，會(huì)直接導(dǎo)致凝膠的抑菌效果變差，如果加入殼聚糖鹽酸鹽百分含量過(guò)高，超出一定范圍，會(huì)導(dǎo)致該凝膠制劑生物相容性能變差，造成一定的細(xì)胞毒性及皮內(nèi)刺激性。同時(shí)，磷酸鹽緩沖液中含有的氯化鈉及氯化鉀可以調(diào)節(jié)殼聚糖鹽酸鹽在凝膠中的溶解度，凝膠中氯化鈉及氯化鉀濃度減小，會(huì)使殼聚糖鹽酸鹽在凝膠中的溶解度升高，當(dāng)凝膠中氯化鈉及氯化鉀濃度過(guò)小，如比較例6所示氯化鈉和氯化鉀百分含量為0時(shí)，由于殼聚糖鹽酸鹽在凝膠中溶解度過(guò)高，也會(huì)導(dǎo)致一定的細(xì)胞毒性及皮內(nèi)刺激性。
表3安全性試驗(yàn)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)
表4安全性試驗(yàn)結(jié)果
最后應(yīng)當(dāng)說(shuō)明的是，以上實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說(shuō)明，但本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，在不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍的情況下，這些修改和等同替換也均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明范圍中。