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海藻酸鈉水凝膠支架構建的組織工程皮膚及其制備方法與流程

文檔序號:11792133閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.海藻酸鈉水凝膠支架構建的組織工程皮膚,其特征在于,自上而下由表皮層和真皮層組成,

所述的表皮層是位于真皮層上方的一層種子細胞,

所述的真皮層包括種子細胞和海藻酸鈉水凝膠支架,所述的種子細胞位于海藻酸鈉水凝膠支架的表面和支架中,以形成皮膚附屬器。

2.根據(jù)權利要求1所述的海藻酸鈉水凝膠支架構建的組織工程皮膚,其特征在于,所述種子細胞是表皮干細胞或通過人工培養(yǎng)得到的表皮基底層細胞懸液。

3.根據(jù)權利要求1所述的海藻酸鈉水凝膠支架構建的組織工程皮膚,其特征在于,所述表皮基底層細胞懸液通過以下方法制備得到:取人工皮片,將皮片放置于消化酶溶液中消化15~25分鐘,再將自體皮片取出,并放入至乳酸鈉林格氏液中,中和酶反應,撕下皮片的表皮,在皮片基底層上刮削基底層細胞,用乳酸鈉林格氏液沖洗收集掛下的基底層細胞,制得表皮基底層細胞懸液。

4.根據(jù)權利要求1~3中任一項所述的海藻酸鈉水凝膠支架構建的組織工程皮膚,其特征在于,所述的海藻酸鈉水凝膠支架通過以下方式制備得到:

(1)將4~6g的BLG-NCA單體溶解于80~100mL的苯-二氧六環(huán)混合溶劑中,以ω-端氨基聚乙二醇為引發(fā)劑,室溫反應60~72小時,將反應液倒入無水乙醇中沉淀,過濾,真空干燥得淡黃色半透明狀固體,得PEG-PBLG嵌段共聚物,

所述的苯-二氧六環(huán)混合溶劑中苯與二氧六環(huán)的體積比為4:1,所述的BLG-NCA單體與ω-端氨基聚乙二醇的摩爾比為70~80:1,所述的反應液與無水乙醇的體積比為1:20~30;

(2)將步驟(1)所得的PEG-PBLG嵌段共聚物溶于水中,使其濃度大于1g/20ml,攪拌下加入EGF原液至溶液中的EGF達到最大容量為止,靜置4~12小時,使EGF包埋于PEG-PBLG形成的球形納米粒中;

(3)往步驟(2)所得溶液中加入EGF原液至溶液中的EGF達到最大容量為止,按0.02~0.04g海藻酸鈉/mL溶液的比例往步驟(2)所得溶液中加入海藻酸鈉,攪拌使其完全溶解,然后按0.04~0.1g乙二胺/mL溶液的比例往步驟(2)所得溶液中加入乙二胺,40℃下攪拌至完全溶解,2℃-6℃靜止過夜,得到海藻酸鈉水凝膠支架。

5.海藻酸鈉水凝膠支架構建的組織工程皮膚的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)將4~6g的BLG-NCA單體溶解于80~100mL的苯-二氧六環(huán)混合溶劑中,以ω-端氨基聚乙二醇為引發(fā)劑,室溫反應60~72小時,將反應液倒入無水乙醇中沉淀,過濾,真空干燥得淡黃色半透明狀固體,得PEG-PBLG嵌段共聚物,

所述的苯-二氧六環(huán)混合溶劑中苯與二氧六環(huán)的體積比為4:1,所述的BLG-NCA單體與ω-端氨基聚乙二醇的摩爾比為70~80:1,所述的反應液與無水乙醇的體積比為1:20~30;

(2)將步驟(1)所得的PEG-PBLG嵌段共聚物溶于水中,使其濃度大于1g/20ml,攪拌下加入EGF原液至溶液中的EGF達到最大容量為止,靜置4~12小時,使EGF包埋于PEG-PBLG形成的球形納米粒中;

(3)往步驟(2)所得溶液中加入EGF原液至溶液中的EGF達到最大容量為止,按0.02~0.04g海藻酸鈉/mL溶液的比例往步驟(2)所得溶液中加入海藻酸鈉,攪拌使其完全溶解,然后按0.04~0.1g乙二胺/mL溶液的比例往步驟(2)所得溶液中加入乙二胺,40℃下攪拌至完全溶解,2℃-6℃靜止過夜,得到海藻酸鈉水凝膠支架;

(4)按105個細胞/cm3海藻酸鈉水凝膠支架的比例往步驟(3)中得到的海藻酸鈉水凝膠支架中加入表皮干細胞或淋灑表皮基底層細胞懸液。

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