技術(shù)特征：

1.一種用斑馬魚評價心肌損傷誘導劑毒性的方法，包括如下步驟：

(1)斑馬魚發(fā)育階段的確定

取野生型AB品系斑馬魚親本交配、孵化，選擇不同發(fā)育階段的斑馬魚分別移入對應的微孔板中；根據(jù)不同的發(fā)育階段將對應的微孔板均設(shè)為2個實驗組：1個為藥物處理組，該組中對斑馬魚進行單濃度給藥處理，1個為正常對照組，該組中對斑馬魚不進行任何處理；然后，各組均加入相同體積的養(yǎng)魚用水，在相同溫度下恒溫培養(yǎng)；當藥物處理斑馬魚至實驗終點后，將2個實驗組的斑馬魚置于心跳血流分析系統(tǒng)，分析斑馬魚心輸出量和血流速度，判斷并確定斑馬魚的最佳發(fā)育階段；

所述不同發(fā)育階段的斑馬魚為受精后2天(2dpf)、受精后3天(3dpf)或受精后4天(4dpf)的斑馬魚；

所述最佳發(fā)育階段的斑馬魚為受精后3天(3dpf)的斑馬魚；

(2)誘導劑處理

將步驟(1)確定的3dpf的斑馬魚移入微孔板中，設(shè)置正常對照組和不同給藥濃度的誘導劑處理組：正常對照組中對斑馬魚不進行任何處理，誘導劑處理組中對斑馬魚按不同給藥濃度的誘導劑處理；然后，各組均加入相同體積的養(yǎng)魚用水，在相同溫度下恒溫培養(yǎng)；

(3)通過心輸出量減少率和血流速度減少率來評價誘導劑毒性

當步驟(2)的誘導劑處理斑馬魚至實驗終點后，將實驗組的斑馬魚置于心跳血流分析系統(tǒng)，統(tǒng)計、分析斑馬魚心輸出量和血流速度，計算誘導劑處理組的心輸出量減少率和血流速度減少率，與正常對照組比較、評價誘導劑對心肌損傷的毒性程度；

計算公式如下：

(4)通過心臟損傷誘導率來評價誘導劑毒性

當步驟(2)的誘導劑處理斑馬魚至實驗終點后，移除微孔板中的液體，各組中均加入濃度為3μg/mL的吖啶橙染色液，在相同溫度下恒溫培養(yǎng)后，清洗斑馬魚，用立體熒光顯微鏡對斑馬魚心臟位置拍照并保存；統(tǒng)計、分析斑馬魚心臟部位的損傷細胞熒光強度，計算誘導劑處理組的心臟損傷誘導率，與正常對照組比較、評價誘導劑對心肌損傷的毒性程度；

計算公式如下：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用斑馬魚評價心肌損傷誘導劑毒性的方法，其特征在于，所述的恒溫培養(yǎng)條件為：微孔板置于恒溫培養(yǎng)箱中，在28℃下培養(yǎng)30min；所述的清洗斑馬魚條件為：使用養(yǎng)魚用水，清洗滴加吖啶橙染色液的斑馬魚，清洗次數(shù)為3次，每次5min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用斑馬魚評價心肌損傷誘導劑毒性的方法，其特征在于，所述的步驟(1)中藥物處理組，對斑馬魚給藥的藥物為誘導劑或治療劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的用斑馬魚評價心肌損傷誘導劑毒性的方法，其特征在于，所述的誘導劑為能夠誘導心肌損傷的藥物或化學試劑，包括但不限于異丙腎上腺素、垂體后葉素、鏈脲佐菌素、阿霉素、維拉帕米、馬兜鈴酸、特非那定、阿司匹林、鹽酸氯米帕明、環(huán)磷酰胺、尼莫地平、奎尼丁、喹巴因、烏頭堿、氯化鈷、疊氮鈉、亞硫酸鈉、過氧化氫、氯化鎘、三氧化二砷。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用斑馬魚評價心肌損傷誘導劑毒性的方法，其特征在于，當所述的誘導劑為異丙腎上腺素時，步驟(2)中各誘導劑處理組的誘導劑給藥濃度為20～50mg/ml，最佳誘導劑給藥濃度為50mg/ml；當所述的誘導劑為垂體后葉素時，步驟(2)中各誘導劑處理組的誘導劑給藥濃度為40～60C，最佳給藥濃度為60C。

6.一種用斑馬魚評價心肌損傷治療劑功效的方法，包括如下步驟：

(1)斑馬魚發(fā)育階段的確定

取野生型AB品系斑馬魚親本交配、孵化，選擇不同發(fā)育階段的斑馬魚分別移入對應的微孔板中；根據(jù)不同的發(fā)育階段將對應的微孔板均設(shè)為2個實驗組：1個為藥物處理組，該組中對斑馬魚進行單濃度給藥處理，1個為正常對照組，該組中對斑馬魚不進行任何處理；然后，各組均加入相同體積的養(yǎng)魚用水，在相同溫度下恒溫培養(yǎng)；當藥物處理斑馬魚至實驗終點后，將2個實驗組的斑馬魚置于心跳血流分析系統(tǒng)，分析斑馬魚心輸出量和血流速度，判斷并確定斑馬魚的最佳發(fā)育階段；

所述不同發(fā)育階段的斑馬魚為受精后2天(2dpf)、受精后3天(3dpf)或受精后4天(4dpf)的斑馬魚；

所述最佳發(fā)育階段的斑馬魚為受精后3天(3dpf)的斑馬魚；

(2)誘導劑給藥濃度的確定

將步驟(1)確定的3dpf的斑馬魚移入微孔板中，設(shè)置正常對照組和不同給藥濃度的誘導劑處理組：正常對照組中對斑馬魚不進行任何處理，誘導劑處理組中對斑馬魚按不同給藥濃度的誘導劑處理；然后，各組均加入相同體積的養(yǎng)魚用水，在相同溫度下恒溫培養(yǎng)；

當誘導劑處理斑馬魚至實驗終點后，將實驗組的斑馬魚置于心跳血流分析系統(tǒng)，分析斑馬魚心輸出量和血流速度，判斷并確定誘導劑的最佳給藥濃度；

(3)治療劑處理

將步驟(1)確定的3dpf的斑馬魚移入微孔板中，設(shè)置正常對照組、模型對照組和不同給藥濃度的治療劑處理組：正常對照組中對斑馬魚不進行任何處理，模型對照組中對斑馬魚按步驟(2)確定的最佳誘導劑給藥濃度處理，治療劑處理組中對斑馬魚按不同給藥濃度的治療劑處理；然后，各組均加入相同體積的養(yǎng)魚用水，在相同溫度下恒溫培養(yǎng)；

(4)通過心輸出量增加率和血流速度增加率來評價治療劑功效

當步驟(3)的治療劑處理斑馬魚至實驗終點后，將實驗組的斑馬魚置于心跳血流分析系統(tǒng)，統(tǒng)計、分析斑馬魚心輸出量和血流速度，計算治療劑處理組的心輸出量增加率和血流速度增加率，與模型對照組比較、評價治療劑對心肌損傷的治療效果；

計算公式如下：

(5)通過心臟損傷保護率來評價治療劑功效

當步驟(3)的治療劑處理斑馬魚至實驗終點后，移除微孔板中的液體，各組中均加入濃度為3μg/mL的吖啶橙染色液，在相同溫度下恒溫培養(yǎng)后，清洗斑馬魚，用立體熒光顯微鏡對斑馬魚心臟位置拍照并保存；統(tǒng)計、分析斑馬魚心臟部位的損傷細胞熒光強度，計算治療劑處理組的心臟損傷保護率，與模型對照組比較、評價治療劑對心肌損傷的治療效果；

計算公式如下：

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用斑馬魚評價心肌損傷治療劑功效的方法，其特征在于，所述的恒溫培養(yǎng)條件為：微孔板置于恒溫培養(yǎng)箱中，在28℃下培養(yǎng)30min；所述的清洗斑馬魚條件為：使用養(yǎng)魚用水，清洗滴加吖啶橙染色液的斑馬魚，清洗次數(shù)為3次，每次5min。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用斑馬魚評價心肌損傷誘導劑與治療劑功效的方法，其特征在于，所述步驟(1)中藥物處理組，對斑馬魚給藥的藥物為誘導劑或治療劑。

9.根據(jù)權(quán)利要求6或8所述的用斑馬魚評價心肌損傷治療劑功效的方法，其特征在于，所述的治療劑為能夠治療心肌損傷的藥物，包括但不限于地高辛、丹酚酸、雷諾嗪、維生素C、維生素E、輔酶Q、甘露醇、1,6-二磷酸果糖、谷胱甘肽、硝苯吡啶、異博定、硫氮卓酮、阿米洛利、美托洛爾、依那普利、厄貝沙坦、LCZ696、氫氯噻嗪、芪藶強心膠囊、參麥注射液。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用斑馬魚評價心肌損傷誘導劑與治療劑功效的方法，其特征在于，當所述的誘導劑為異丙腎上腺素時，步驟(2)中各誘導劑處理組的誘導劑給藥濃度為20～50mg/ml，最佳誘導劑給藥濃度為50mg/ml；當所述的誘導劑為垂體后葉素時，步驟(2)中各誘導劑處理組的誘導劑給藥濃度為40～60C，最佳給藥濃度為60C。