本發(fā)明屬于食品或保健藥品領(lǐng)域，特別涉及一種含有竹花青素的保健品，其在制備抗氧化劑中的藥物中的應(yīng)用，在制備保健食品中的應(yīng)用，并涉及一種竹花青素的提取和測(cè)定方法，

背景技術(shù)：
：

蝦青素(Astaxanthin)(3，3’-二羥基4，4’-二酮基β-胡蘿卜素)是一種具有超強(qiáng)抗氧化活性的次生類胡蘿卜素，是自然界中最強(qiáng)的抗氧化劑，其抗氧化活性是維生素E的500倍，也遠(yuǎn)高于其他常用的抗氧化劑。蝦青素又稱“蝦黃素”，是一種從從河蟹蝦外殼、牡蠣、鮭魚及藻類、真菌中發(fā)現(xiàn)的一種特殊的紅色類胡蘿卜素，具有保護(hù)血管和眼睛，抗輻射、抗衰老、預(yù)防老年癡呆和癌癥等功效，在藥品、食品、化妝品、水產(chǎn)飼料添加劑等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。天然蝦青素常為某些海洋微生物和少量酵母菌作為次生代謝產(chǎn)物在體內(nèi)合成，但由于提取技術(shù)難度高及受藻種或菌種自身問題等限制，普遍存在蝦青素產(chǎn)量低、成本高等缺點(diǎn)，使天然蝦青素產(chǎn)量有限。國內(nèi)外學(xué)者對(duì)蝦青素已進(jìn)行了許多研究，主要集中在其功能及應(yīng)用前景(曹秀明等，2011；Goswami G等，2010)、生物積累(耿予歡等，2009；李曉夢(mèng)等，2006)和提取工藝(黃賢剛等，2009；劉宏超等，2011)等方面。目前，國際上已具備的蝦青素生產(chǎn)工藝主要有化學(xué)合成和生物技術(shù)提取，化學(xué)合成的蝦青素在結(jié)構(gòu)、功能、應(yīng)用和安全性等方面較天然蝦青素均遜色不少，因此進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)一般傾向于天然蝦青素的提取(肖素榮等，2011)。雨生紅球藻培養(yǎng)法，法夫酵母發(fā)酵法，蝦殼浸提法都具備實(shí)現(xiàn)天然蝦青素產(chǎn)業(yè)化的潛力，但由于技術(shù)難度高及受藻種或菌種自身問題等限制，普遍存在蝦青素產(chǎn)量低、成本高等缺點(diǎn)(閻毅等，2011)，使天然蝦青素產(chǎn)量有限，價(jià)格高，其保健品的價(jià)格更是堪比黃金，大部分人難以承受。相比較而言，竹子是理想的蝦青素加工廠，作為經(jīng)濟(jì)植物可實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，且耕作簡(jiǎn)單、成本低，因而含蝦青素的竹子是理想的蝦青素加工廠?，F(xiàn)有技術(shù)中未見有從含有竹花青素的保健品以及竹子中提取高含量的蝦青素的提取工藝和測(cè)定方法的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問題，本發(fā)明提供了一種含有竹花青素的保健品，在制備抗氧化劑中的藥物中的應(yīng)用，在制備保健食品中的應(yīng)用，并涉及一種竹花青素的提取和測(cè)定方法，

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明采取了以下技術(shù)方案：

含有竹花青素的保健品，其以竹花青素提取物為有效成分，配以常規(guī)藥品或食品輔劑。

根據(jù)所述的含有竹花青素的保健品，其中所述的竹葉為紅稈香竹、七彩紅竹、紫竹的干燥竹葉，竹花青素由下述方法提取而得：：取竹葉，選取1％HCL水溶液為提取溶劑，液料比20‐30:1，溫度25℃，超聲振蕩提取法提取1-4次，30-40min，過濾。

根據(jù)所述的含有竹花青素的保健品，其由下述重量份的竹花青素提取物干粉15份，糊精10份，適量50％乙醇所組成，并由下述方法所制備：將上述組分按照常規(guī)制備顆粒劑的工藝制備：先對(duì)原輔料進(jìn)行檢驗(yàn)稱重、制軟材、制粒、干燥、整粒、成品分裝、滅菌，顆粒劑規(guī)格：20g/袋。

本發(fā)明還提供了一種竹花青素的提取和測(cè)定方法，取竹葉，選取1％HCL水溶液為提取溶劑，液料比20‐30:1，溫度25℃，超聲振蕩提取法提取1-4次，30-40min，過濾得竹花青素提取物，濾液濃縮并定容，測(cè)定色價(jià)和總花青素的含量。

如所述的一種竹花青素的提取和測(cè)定方法，進(jìn)一步使用冷凍凍干機(jī)對(duì)所述竹花青素料進(jìn)行冷凍干燥，凍干設(shè)置為：預(yù)凍至‐25℃以下，抽真空，開加熱，當(dāng)真空達(dá)0.03MPa時(shí)，設(shè)定為0℃，12小時(shí)后可漸進(jìn)的調(diào)到30℃；所述的蝦青素含量測(cè)定采用：將冷凍干燥好的樣品粉碎、裝袋、密封，進(jìn)行蝦青素含量測(cè)定，測(cè)定采用高效液相色譜法分離，其液相條件：色譜柱為WatersSpherisorb OSD2，5μm,4.6,250mm，液相型號(hào)為Waters Milford,MA,USA，進(jìn)樣量為20μl；流動(dòng)相A相為乙腈/甲醇/Tris‐HCL，pH 8.0，體積比為84:2:14，B相為甲醇/乙酸乙酯，體積比為68:32；以1.2mL/min的流速線性梯度洗脫色素，從100％A相到100％的B相，每個(gè)梯度用時(shí)15分鐘，隨后用B相洗脫10分鐘，通過比對(duì)各顏色組分和標(biāo)準(zhǔn)品的光譜吸收和相對(duì)保留時(shí)間來鑒定各組分，通過將峰面積的積分值與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比將其轉(zhuǎn)化為濃度值從而對(duì)各組分進(jìn)行定量，標(biāo)準(zhǔn)品購買自sigma公司和Wako公司。

本發(fā)明同時(shí)提供所述的竹花青素在制備抗氧化劑中的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了所述的竹花青素在制備抗氧化劑中的食品中的應(yīng)用，按竹花青素提取物干粉:糊精按重量份15份:10份，適量50％乙醇,稱重、制軟材、制粒、干燥、整粒、成品分裝、滅菌制成規(guī)格20g/袋的顆粒劑，將顆粒劑每日午時(shí)、睡前、佐餐或佐面包時(shí)服用，0.5-2袋/日，連續(xù)服用1個(gè)月或長期服用。

本發(fā)明此外還提供了含竹花青素的軟膠囊，取竹花青素粉，逐漸加入少許水中，攪拌溶解均勻，再倒入上述核桃油中，攪拌，加入1﹪吐溫-80混勻；過膠體磨混勻，過40目篩，灌膠軟膠囊，干燥3天，滅菌，包裝。

以及，含竹花青素的保健食品，在竹花青素基礎(chǔ)上添加多種維生素、微量元素、不同中藥的提取物，并配以不同輔料，制成易于攜帶和服用的不同固體或液體劑型。

還及，含竹花青素的保健食品，竹花青素提取物以1-9∶1的比例添加到固體果醬、液體牛奶、蜂蜜食品中。

本發(fā)明的產(chǎn)品特點(diǎn)確定竹花青素的提取工藝，從而全面保留了竹花青素中營養(yǎng)精華，并根據(jù)竹花青素功效和應(yīng)用人群特點(diǎn)，采取了科學(xué)工藝將其制成攜帶方便、易于長期服用、口感宜人的產(chǎn)品形式。經(jīng)科學(xué)分析和人體試食，本產(chǎn)品具有明顯的抗氧化功能，同時(shí)能保護(hù)肝臟、抗電腦輻射和抗衰老(清除自由基)等作用，使得古代關(guān)于竹花青素神奇療效的傳說在現(xiàn)實(shí)中找到了驗(yàn)證，因此本產(chǎn)品具有廣闊的市場(chǎng)前景。

附圖說明：

圖1七彩虹竹樣品，1號(hào)為葒草苷，2號(hào)為牡荊苷，3號(hào)為異牡荊苷，4號(hào)為木犀草素；

圖2混合標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖，1號(hào)為葒草苷，2號(hào)為牡荊苷，3號(hào)為異牡荊苷，4號(hào)為木犀草素；

圖3 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖4 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖5 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖6 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)曲線；

圖7竹子材料樣本；

圖8竹子材料樣本的熒光組織化學(xué)影像。

具體實(shí)施方式：

下面結(jié)合附圖，用本發(fā)明的實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此來限定本發(fā)明。

實(shí)施例1：

竹花青素的提?。悍謩e取紅稈香竹Chimonocalamus pallens cv.rutilans cv.nov.七彩紅竹Indosasa amara f.striata f.nov.紫竹Phyllostachys nigra(Lodd.ex Lindl.)Munro(有色竹種)的竹稈和竹葉10kg，選取1％HCL水溶液為提取溶劑，液料比20‐30:1，溫度25℃，超聲振蕩提取法提取1-4次，30-40min，過濾,分別得竹花青素680g、700g、980g。

實(shí)施例2：

竹花青素干粉960g，糊精640g，適量50％乙醇。將上述原輔料按照常規(guī)制備顆粒劑的工藝制備，即先對(duì)原輔料進(jìn)行檢驗(yàn)稱重—制軟材—制粒—干燥—整?！善贩盅b—滅菌。顆粒劑規(guī)格：20g/袋。

實(shí)施例3：

竹花青素以1-9∶1的比例添加到果醬、牛奶、蜂蜜等固體和液體食品中去，可以增加食品中的竹葉清香味，同時(shí)也能發(fā)揮其保健功能。

實(shí)施例4：

取實(shí)施例1所得竹花青素4.2公斤，加入5％蜂蠟(210克)，加熱溶解，置冷；另取469克竹花青素干粉，研細(xì)，逐漸加入150毫升水中，攪拌并混勻，再倒入大豆油中，攪拌，加入1％吐溫-80(50克)，混勻。將上述配好的藥液過膠體磨(混勻)，過40目篩，最后灌裝軟膠囊(規(guī)格：內(nèi)容物0.5－1克)，干燥3天，滅菌，包裝即得。

實(shí)施例5：

含有的竹花青素乳酸菌飲料配方(W％)：

按常規(guī)制作食品的方法制得本發(fā)明的上述飲料,具有竹葉清香。

實(shí)施例6：

以實(shí)施例2制備的顆粒劑每日可午時(shí)、睡前、佐餐或佐面包等服用，0.5-2袋/日，連續(xù)服用1個(gè)月或長期服用。

人群試食用結(jié)果：

為驗(yàn)證本產(chǎn)品功效，竹花青素保健品在40-80歲人群中進(jìn)行了少量試食實(shí)驗(yàn)?；ㄇ嗨貫楸娙私灾木哂卸喾N營養(yǎng)價(jià)值的藥食兼用品，但過去的花青素產(chǎn)品因提取方式、制劑形式和包裝量等缺乏科學(xué)性和實(shí)用性，從而導(dǎo)致其功效難以得到全面和真正發(fā)揮。本發(fā)明的產(chǎn)品特點(diǎn)確定竹花青素的提取工藝，從而全面保留了竹花青素中營養(yǎng)精華，并根據(jù)竹花青素功效和應(yīng)用人群特點(diǎn)，采取了科學(xué)工藝將其制成攜帶方便、易于長期服用、口感宜人的產(chǎn)品形式。經(jīng)科學(xué)分析和人體試食，本產(chǎn)品具有明顯的抗氧化功能，同時(shí)能保護(hù)肝臟、抗電腦輻射和抗衰老(清除自由基)等作用，使得古代關(guān)于竹花青素神奇療效的傳說在現(xiàn)實(shí)中找到了驗(yàn)證，因此本產(chǎn)品具有廣闊的市場(chǎng)前景。

下面用本發(fā)明的試驗(yàn)例來進(jìn)一步說明本發(fā)明方法步驟最優(yōu)化的過程，證明本發(fā)明所存在的優(yōu)益性、科學(xué)性和先進(jìn)性。

試驗(yàn)例1：

取紅稈香竹Chimonocalamus pallens cv.rutilans cv.nov.七彩紅竹Indosasa amara f.striata f.nov.紫竹Phyllostachys nigra(Lodd.ex Lindl.)Munro(有色竹種)的竹稈和竹葉。

分別稱取上述各種竹的竹葉1.0000±0.0005g，選取水、1％HCL水溶液、1％HCL‐乙醇溶液、1％HCL‐甲醇溶液為提取溶劑，液料比20‐30:1，溫度25℃，超聲振蕩提取法提取1-4次，30-40min，過濾得竹花青素，濾液濃縮并定容到10mL容量瓶中，從中吸取1mL，定容到100mL容量瓶中，測(cè)定色價(jià)和總花青素的含量。

凍干：使用冷凍凍干機(jī)對(duì)上述已脫水處理的竹花青素進(jìn)行冷凍干燥，凍干設(shè)置為：預(yù)凍至‐25℃以下，抽真空，開加熱(當(dāng)真空達(dá)0.03MPa時(shí)，設(shè)定為0℃，12小時(shí)后可漸進(jìn)的調(diào)到30℃)；

蝦青素含量測(cè)定：將冷凍干燥好的樣品粉碎、裝袋、密封，進(jìn)行蝦青素含量測(cè)定，測(cè)定采用高效液相色譜法分離，其液相條件：色譜柱為WatersSpherisorb OSD2(5μm,4.6,250mm)，液相型號(hào)為Waters(Milford,MA,USA)，進(jìn)樣量為20μl；流動(dòng)相A相為乙腈/甲醇/Tris‐HCL(pH 8.0)，體積比為84:2:14，B相為甲醇/乙酸乙酯，體積比為68:32；以1.2mL/min的流速線性梯度洗脫色素，從100％A相到100％的B相，每個(gè)梯度用時(shí)15分鐘，隨后用B相洗脫10分鐘，通過比對(duì)各顏色組分和標(biāo)準(zhǔn)品的光譜吸收和相對(duì)保留時(shí)間來鑒定各組分，通過將峰面積的積分值與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比將其轉(zhuǎn)化為濃度值從而對(duì)各組分進(jìn)行定量，標(biāo)準(zhǔn)品購買自sigma公司和Wako公司。

竹花青素的代謝過程及含量測(cè)定：

本發(fā)明在對(duì)云南幾種有色竹種的研究中首次發(fā)現(xiàn)這些竹種的竹稈和葉片的顏色呈現(xiàn)出紅色到紫色的變化，根據(jù)化學(xué)顯色劑法判斷，該物質(zhì)為花青素。同一株竹子在相同生長時(shí)期的竹稈、枝條、葉片中顏色深淺不一(圖7)，采用組織化學(xué)定位的方法，利用顯色劑和共聚焦顯微影像記錄后分析，在不同的生長發(fā)育時(shí)期，花青素等類黃酮物質(zhì)所在部位也有很大差異(圖8)。

通過對(duì)云南野生竹種的研究發(fā)現(xiàn)，紅稈香竹Chimonocalamus pallens cv.rutilans cv.nov.七彩紅竹Indosasa amara f.striata f.nov.紫竹Phyllostachys nigra(Lodd.ex Lindl.)Munro都是有色竹種，竹稈和竹葉在一定生長時(shí)期花青素含量很高，因此，本發(fā)明選用這其中具有代表性的紫竹為研究對(duì)象，首先對(duì)竹花青素提取和基本理化性質(zhì)進(jìn)行研究；通過對(duì)竹類植物中花青素穩(wěn)定劑的提取分離，結(jié)構(gòu)鑒定，含量檢測(cè)，建立高穩(wěn)定的竹花青素提取工藝路線，為開發(fā)高端竹花青素功能食品和保健品做好準(zhǔn)備。由于花青素的高活性，極易失活，市場(chǎng)上還沒有花青素純品，所以提取高穩(wěn)定性的花青素對(duì)花色素類色素開發(fā)具有重要的意義。

竹花青素的提?。?/p>

儀器和材料

賽特路斯萬分之一電子天平BS210S型；數(shù)顯恒溫水浴鍋HH–2型(國華電器有限公司)；721型分光光度計(jì)(四川分析儀器廠)

試劑：

甲醇(分析純，重慶化學(xué)試劑總廠)；亞硝酸鈉(化學(xué)純，北京化工廠)；硝酸鋁(分析純，天津市化學(xué)試劑三廠)；氫氧化鈉(分析純，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司)無水乙醇、甲醇、純凈水、濃鹽酸、氯化鉀、檸檬酸、磷酸二氫鈉,醋酸鈉、醋酸、均為分析純。

材料：

取竹葉，清除其中的雜質(zhì)，進(jìn)行粉碎、篩分。粉碎：每次取一定量的竹葉，粉碎一次，3s/次。

實(shí)驗(yàn)方法：

紫竹花色素提取的單因素實(shí)驗(yàn)：

根據(jù)報(bào)道，影響花色素含量較大的因素有提取方法、溶劑、提取時(shí)間、液料比、和提取次數(shù)五種，探索提取方法及上述五種因素對(duì)黃酮類化合物含量的影響。

溶劑考察試驗(yàn)：

分別稱取1.0000±0.0005g竹葉，選取水、1％HCL水溶液、1％HCL‐乙醇溶液、1％HCL‐甲醇溶液為提取溶劑，液料比20:1，溫度25℃，超聲振蕩提取法提取1次，30min，過濾，濾液濃縮并定容到10mL容量瓶中，從中吸取1mL，定容到100mL容量瓶中，測(cè)定色價(jià)和總花青素的含量。

提取方法的考察：

分別稱取1.0000±0.0005g竹葉，首先以1％HCL甲醇溶液為提取溶劑，超聲提取1次，30min,液料比為20：1，分別采用超聲、回流、冷浸、索氏提取等方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每種方法平行做3次。其中回流提取是在80℃恒溫下。

提取時(shí)間考察：

分別稱取1.0000±0.0005g竹葉，以液料比20：1，分別加入1％HCL甲醇溶液，超聲法分別提取10min、20min、30min、40min提取一次，過濾，濾液濃縮，用甲醇定容于10ml的容量瓶，待測(cè)。

浸提次數(shù)考察：

分別稱取1.0000±0.0005g竹葉，以液料比20：1，加入1％HCL甲溶液，超聲10min，分別提取1、2、3、4次，過濾，濾液濃縮，用甲醇定容于10ml的容量瓶，待測(cè)。

液料比考察：

稱取1.0000±0.0005g竹葉粉，分別以液料比10：1、20：1、25：1、30：1加入1％HCL乙醇溶液，超聲提取1次，提取30min，過濾，濾液濃縮，用乙醇定容于10ml的容量瓶，待測(cè)。

正交實(shí)驗(yàn)：

通過單因素試驗(yàn)，以其結(jié)果為基礎(chǔ)，選擇液料比、提取時(shí)間和提取次數(shù)為考察因素，選用L₉(3⁴)進(jìn)行正交試驗(yàn)，得最佳工藝。各考察因素及其水平見表1。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1，根據(jù)表2中的各條件提取，取待測(cè)液1ml，測(cè)定其吸光度A值，分別計(jì)算其花青素的含量。

表1正交試驗(yàn)因素及其水平

表2正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表

驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：

根據(jù)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果和方差分析結(jié)果，優(yōu)選出最佳提取工藝路線，并在此條件下重復(fù)三次，進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。花青素的含量測(cè)定方法采用色價(jià)法?？偦ㄉ?total anthocyanins,ACY)的測(cè)定：利用花色素及黃酮的結(jié)構(gòu)特性,當(dāng)pH為1.0時(shí),510nm處二者均有最大吸收峰；而當(dāng)pH為4.5時(shí)，花色素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色查爾酮形式，在510nm處無吸收，用示差法計(jì)算溶液中總花色素含量。

用移液管吸取2mL樣品液,分別用pH1.0[0.2mol/LKCl：0.2mol/LHC1＝25：67,V/V]和pH4.5[0.2mol/LNaAc·3H2O∶0.2mol/LHAc＝1∶1,V/V]的緩沖液稀釋至20mL,混勻,以2mL溶劑加18mL相應(yīng)緩沖液作空白,分別在5l0nm和700nm處測(cè)定吸光值?？偦ㄉ氐暮?以矢車菊色素‐3‐葡萄糖苷計(jì))按下式計(jì)算：

其中:C‐樣品濃度,mg/mL；V‐提取液的總體積,mL；m‐取樣量,g；

結(jié)果與分析：

單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

表3溶劑考察結(jié)果

由表3可以看出，1％HCl-甲醇提取液色價(jià)和總花色素含量最高,1％HCl-乙醇次之,以水為溶劑的提取液色價(jià)和總花色素含量最低,而1％HCl-水提取效率比水高,且呈極顯著差異,主要是因?yàn)镠+對(duì)細(xì)胞膜的滲透作用以及對(duì)花色素類物質(zhì)的保護(hù)作用。1％HCl甲醇和1％HCl乙醇作為溶劑,其提取效果間差異不顯著,但都極顯著好于水提,此結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致。

表4提取方法考察結(jié)果

不同提取方法比較結(jié)果可知，超聲法和回流法提取的花色素的色價(jià)較高，但回流法經(jīng)過加熱會(huì)導(dǎo)致花色素轉(zhuǎn)化，冷浸法提取效率低，耗費(fèi)時(shí)間長，索氏提取法對(duì)設(shè)備要求較高，提取量較小，不適用于工業(yè)生產(chǎn)，綜合比較的結(jié)果，選擇超聲提取法為竹花色素的提取方法。

表5提取時(shí)間考察結(jié)果

隨著提取時(shí)間的加長，提取液的色價(jià)和總花色素的含量都有所增加，但30min后，隨著時(shí)間的增長花色素總含量沒有明顯的改變，因此選擇30-40min為提取時(shí)間。

表6提取次數(shù)考察結(jié)果

提取次數(shù)增加可增加花色素的溶出率，但超過3次后，花色素的含量沒有明顯變化，考慮到成本和效率，選擇提取3-5次。

表7液料比考察結(jié)果

由表7可見,料液比越高，提取液色價(jià)和總花色素含量越高；但當(dāng)料液比超過25:1后,提取液色價(jià)和總花色素含量雖然有所增大,但同20:1料液比沒有顯著差異,實(shí)際生產(chǎn)中可選用20-30:1料液比。

竹花青素的含量測(cè)定：

七彩虹竹稈在不同生長發(fā)育時(shí)期中黃酮類化合物的含量測(cè)定：

色譜條件：在200～900nm波長范圍內(nèi)選擇不同波長進(jìn)行分析測(cè)試，發(fā)現(xiàn)在280nm處最高，因此選擇280nm為最佳檢測(cè)波長。流動(dòng)相用乙腈∶水，待測(cè)物的分離效果最好。柱溫對(duì)樣品測(cè)定有很大影響，溫度低時(shí)，出峰時(shí)間長，而且峰嚴(yán)重拖尾；溫度太高，則出峰太快，待測(cè)峰有部分重疊，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，恒定柱溫為35℃，待測(cè)峰的重現(xiàn)性和保留時(shí)間都比較理想。對(duì)照品、樣品色譜圖(見圖1和圖2)。結(jié)果表明，在現(xiàn)行色譜條件下4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品與其他組分得到了很好的分離，4個(gè)指標(biāo)成分色譜峰理論塔板數(shù)均不小于2000，各指標(biāo)成分的色譜峰與其他峰分離度均大于1.5。

線性關(guān)系考察：

分別精密吸取“2.3.3.3”項(xiàng)下制備的對(duì)照品儲(chǔ)備液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL，分別置100mL量瓶中，加甲醇定容,搖勻，配制成系列濃度的對(duì)照品溶液。按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以色譜峰面積Y為縱坐標(biāo)，樣品濃度X(mg·mL^‐1)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(如下表5，6，7，8；圖3，4，5，6)。

經(jīng)線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)品1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)、4號(hào)回歸方程為：

對(duì)照品1號(hào)葒草苷；2號(hào)牡荊苷；3號(hào)異牡荊苷；4號(hào)木犀草素在0.01～0.05mg·mL‐1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)

吸取“2.3.3.3”項(xiàng)下制備的對(duì)照品儲(chǔ)備液，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果黃酮標(biāo)準(zhǔn)品峰面積的RSD(Relative Standard Deviation)分別為3.0％，0.8％，2.5％，2.8％。

重復(fù)性試驗(yàn)：

取同一批七彩虹竹樣品溶液5份，分別按樣品含量測(cè)定方法操作，測(cè)定峰面積，計(jì)算得混合標(biāo)準(zhǔn)品含量的RSD分別為1.5％，1.7％，2.5％，2.3％，1.9％。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：

取七彩虹竹供試品溶液，分別在0，4，8，12，16h，進(jìn)樣測(cè)定峰面積，結(jié)果混合標(biāo)準(zhǔn)品含量RSD分別為0.9％，1.2.％，2.2％，1.0％，2.5％，表明供試品溶液在16h內(nèi)基本穩(wěn)定。

回收率試驗(yàn)：

精密稱取已知含量的七彩虹竹樣品9份，每份約1.5g，分別加入對(duì)照品溶液，按供試品溶液制備方法操作，并按上述色譜條件測(cè)定峰面積，計(jì)算5種成分的回收率，測(cè)定結(jié)果，平均加樣回收率均在95％‐105％置性區(qū)間，符合要求。

七彩虹竹稈在不同生長發(fā)育時(shí)期中黃酮類化合物的含量測(cè)定：

取不同生長發(fā)育時(shí)期的七彩虹竹樣本，制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液，每次進(jìn)樣10μL，按照色譜條件測(cè)定峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算含量。

表5 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品峰面積與濃度關(guān)系表

表6 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品峰面積與濃度關(guān)系表

表7 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品峰面積與濃度關(guān)系表

表8 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品峰面積與濃度關(guān)系表