本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，具體涉及一種止血防粘連膜及其制備方法。
背景技術(shù)：
：手術(shù)后粘連是國(guó)內(nèi)外外科手術(shù)領(lǐng)域至今尚未解決的重要醫(yī)學(xué)難題之一。粘連不僅可以引起嚴(yán)重的并發(fā)癥，而且不良粘連也是再次手術(shù)時(shí)并發(fā)癥明顯增高的主要原因之一。理想的防粘連材料應(yīng)具有低致敏性、適宜的組織粘附性；能完全覆蓋創(chuàng)傷表面并且具有足夠的體內(nèi)存留時(shí)間；能降解吸收而不需二次手術(shù)將其取出；促進(jìn)創(chuàng)面愈合；同時(shí)具有一定的機(jī)械強(qiáng)度而便于實(shí)施操作等特點(diǎn)?，F(xiàn)有的已上市防粘連材料，尤其是膜材料，雖然防粘連效果確切，但都有明確的禁忌癥，即感染性傷口及活動(dòng)性出血性傷口禁用。炎癥及出血均會(huì)導(dǎo)致一般的防粘連材料失效，尤其是術(shù)中無法完全處理的滲血，或者快速止血后殘留大量血凝物質(zhì)的傷口都會(huì)對(duì)傷口愈合帶來極大的負(fù)面影響，而傷口愈合本身就是個(gè)復(fù)雜過程。因此對(duì)傷口創(chuàng)面的保護(hù)要綜合考慮多方面的的因素，如果能將止血和術(shù)后傷口保護(hù)有效結(jié)合起來，才能對(duì)更好的減少滲血及粘連造成的危害。針對(duì)上述技術(shù)問題，目前市場(chǎng)上出現(xiàn)了一種將止血材料和可降解高分子材料復(fù)合制備得到的防粘連纖維膜，其同時(shí)可以止血防粘連。在中國(guó)專利申請(qǐng)CN102908649A公開的防粘連纖維膜中，其利用靜電紡絲技術(shù)將兩種或三種有機(jī)高分子溶液混合后進(jìn)行多噴頭靜電紡絲，并通過調(diào)控有機(jī)高分子材料進(jìn)行交聯(lián)處理，制備了一種與血接觸后表面形成凝膠的防粘連材料，在起到物理止血作用的同時(shí)，實(shí)現(xiàn)防粘連效果。但是該防粘連纖維膜不適用于較大出血量的止血，從而限制其應(yīng)用范圍。中國(guó)專利申請(qǐng)CN101623517B公開了一種醫(yī)用防粘連膜，其包括納米支架和附著于其上且包覆有一種或幾種止血或/和防粘連藥物水溶膠組成，該防粘連膜具有良好的生物相容性，同時(shí)具有較好的止血和防粘連作用。但是藥物類的止血材料容易引起人體的不良反應(yīng)，不適用于老年人或有病史的人群，其同樣無法大規(guī)模推廣應(yīng)用。目前常用的目前市場(chǎng)上常用的止血材料主要有氧化纖維類止血材料、海藻酸鹽蛋白膠類止血材料、殼聚糖類止血材料和可降解淀粉類止血材料等。各類止血材料的優(yōu)缺點(diǎn)如下：氧化纖維類止血材料利用酸性的氧化纖維素上的羧基與血紅蛋白中的三價(jià)鐵離子結(jié)合形成紅色膠塊，從而達(dá)到止血的目的。其明顯的缺點(diǎn)是自身結(jié)構(gòu)較為松散，被機(jī)體吸收較快，故可能引起再出血，另有研究指出氧化纖維素的酸性可能會(huì)引起神經(jīng)纖維的變性，上述種種缺點(diǎn)限制了氧化纖維類止血材料的應(yīng)用范圍。海藻酸鹽蛋白膠類止血材料具有良好的生物相容性和很強(qiáng)的親水性，可以大量吸收創(chuàng)面血液和組織滲出液，但由于海藻酸鈣的質(zhì)地柔軟，缺乏韌性和彈性，對(duì)創(chuàng)面的壓迫力不夠，而且遇水后迅速形成非黏性凝膠體，材料自身不具備黏附性，往往需要借助輔助材料固定，因而也限制了其應(yīng)用范圍。殼聚糖類止血材料因殼聚糖本身具有的抗菌、止血、良好的組織相容性等多種優(yōu)越的性能而受到追捧。但是有研究表明，在肝素化的人血中加入殼聚糖醋酸溶液后仍能出現(xiàn)凝血塊，并且由于殼聚糖只能溶于稀酸水溶液中，所以在實(shí)際應(yīng)用中還存在殘留酸可能誘發(fā)的炎癥問題，而在目前的研究中，一般通過對(duì)殼聚糖進(jìn)行改性來增加可溶性來解決上述問題。如在中國(guó)專利申請(qǐng)CN102648985A中，發(fā)明人利用脫乙酰度為80～99.9％，分子量在10000-1000000之間的殼聚糖制備了具有優(yōu)秀的組織相容性、吸液性以及能有效抗菌、止血、促進(jìn)傷口愈合的殼聚糖微球。但同時(shí)，由于其具有水溶性，吸收速度較快，故也造成黏附能力不強(qiáng)。由于廉價(jià)的價(jià)格、廣泛的來源、良好的體內(nèi)降解性和生物相容性，微孔淀粉在生物材料領(lǐng)域漸漸受到關(guān)注。淀粉微球表面具有微空結(jié)構(gòu)，并具有一定的吸水性，能夠快速吸干血液中的水分，同時(shí)發(fā)揮分子篩的作用，使血液中紅細(xì)胞、凝血酶、血小板和纖維蛋白等有形成分在顆粒表面聚集，形成凝膠狀混合物，從而達(dá)到迅速止血的效果。但是淀粉類止血材料仍然未能解決現(xiàn)有止血材料止血不夠迅速的技術(shù)問題。因此，目前亟需提供一種能夠有效防粘連且同時(shí)能夠快速止血的防粘連膜。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種止血防粘連膜，以解決以上缺陷。本發(fā)明提供了一種止血防粘連膜，包括由分子量為0.5～50萬的可降解高分子材料相互交織而成的防粘連纖維層和附著于該防粘連纖維層上且由連接至少一個(gè)帶電配體的陰離子淀粉制成的止血材料，所述帶電配體包括至少一個(gè)羧基官能團(tuán)和至少一個(gè)氨基官能團(tuán)。優(yōu)選地，所述帶電配體為分子量為2～4×103，取代度為80～90％的羧甲基殼聚糖。優(yōu)選地，所述可降解高分子材料選自所述可降解高分子材料選自聚乳酸類高分子材料、聚乙交酯類高分子材料、聚丙交酯類高分子材料、聚己內(nèi)酯類高分子材料、聚三亞甲基碳酸酯類高分子材料和聚對(duì)二氧環(huán)己酮類高分子材料中的一種或幾種。優(yōu)選地，所述可降解高分子材料為聚乳酸。優(yōu)選地，所述止血材料由以下步驟制得：S1、酸解：取淀粉與1～38％的鹽酸溶液按1:(1～100)的比例混合，攪拌得淀粉多糖溶液，將上述淀粉多糖溶液置于10～90℃的恒溫水浴中反應(yīng)0.1～10h，反應(yīng)過程中持續(xù)攪拌，攪拌速度為200～3000rpm；S2、交聯(lián)：往上述酸解處理后的淀粉多糖溶液加入植物油、氫氧化鈉溶液、乳化劑和交聯(lián)劑，攪拌混合，其中，植物油、氫氧化鈉溶液、乳化劑和交聯(lián)劑的重量比為(1～2):(1～2):(0.1～0.9):(0.1～1)；S3、陰離子化反應(yīng)：將乙醇溶液、一氯醋酸、氫氧化鈉溶液以及經(jīng)上述S2步驟處理后的淀粉多糖溶液分別加入反應(yīng)器中，充分?jǐn)嚢?，升溫?0～90℃，反應(yīng)1～24h后加入冰醋酸，調(diào)節(jié)pH為6.5～7.0，過濾，用乙醇溶液洗滌，干燥，得陰離子淀粉；S4、陽離子化反應(yīng)：將0.1～3g包括至少一個(gè)羧基官能團(tuán)和至少一個(gè)氨基官能團(tuán)的帶電配體、0.1～3g羰基二咪唑加入到30～80ml的二甲基甲酰胺溶液中，常溫反應(yīng)1～3h，加入1～10g上述步驟S3所得的陰離子淀粉，攪拌均勻，升溫至50～70℃，反應(yīng)8～24h，靜置分層后用乙醇洗滌并干燥，即得。優(yōu)選地，所述淀粉選自馬鈴薯淀粉、玉米淀粉、豌豆淀粉、木薯淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、綠豆淀粉、荸薺淀粉、葛根淀粉、蓮藕淀粉、紅薯淀粉、糯米淀粉、甘薯淀粉和菱角淀粉中的一種或幾種。優(yōu)選地，所述淀粉由馬鈴薯淀粉和玉米淀粉按(0.01～0.1):(0.01～0.2)的重量比組成。優(yōu)選地，所述淀粉由馬鈴薯淀粉和玉米淀粉按0.06:0.04的重量比組成。優(yōu)選地，所述步驟S2中所述植物油為大豆油；所述乳化劑選自司盤-60、司盤-80、司盤-85、壬基酚聚氧乙烯醚、吐溫-80、吐溫-20、吐溫-40和吐溫-60中的一種或者幾種；所述交聯(lián)劑為環(huán)氧氯丙烷。優(yōu)選地，所述乳化劑由司盤-80和吐溫-60按1:(0.1～1)的重量比組成。優(yōu)選地，所述步驟S4中帶電配體的用量為2g，羰基二咪唑的用量為1g，陰離子淀粉的用量為4g。優(yōu)選地，所述帶電配體為羧甲基殼聚糖，所述羧甲基殼聚糖的分子量為2～4×103，取代度為80～90％。相應(yīng)地，本發(fā)明還提供了一種制備上述的止血防粘連膜的方法，包括以下步驟：A)止血材料的制備：由步驟S1～S4組成：S1、酸解：取淀粉與1～38％的鹽酸溶液按1:(1～100)的比例混合，攪拌得淀粉多糖溶液，將上述淀粉多糖溶液置于10～90℃的恒溫水浴中反應(yīng)0.1～10h，反應(yīng)過程中持續(xù)攪拌，攪拌速度為200～3000rpm；S2、交聯(lián)：往上述酸解處理后的淀粉多糖溶液加入植物油、氫氧化鈉溶液、乳化劑和交聯(lián)劑，攪拌混合，其中，植物油、氫氧化鈉溶液、乳化劑和交聯(lián)劑的重量比為(1～2):(1～2):(0.1～0.9):(0.1～1)；S3、陰離子化反應(yīng)：將乙醇溶液、一氯醋酸、氫氧化鈉溶液以及經(jīng)上述S2步驟處理后的淀粉多糖溶液分別加入反應(yīng)器中，充分?jǐn)嚢?，升溫?0～90℃，反應(yīng)1～24h后加入冰醋酸，調(diào)節(jié)pH為6.5～7.0，過濾，用乙醇溶液洗滌，干燥，得陰離子淀粉；S4、陽離子化反應(yīng)：將0.1～3g包括至少一個(gè)羧基官能團(tuán)和至少一個(gè)氨基官能團(tuán)的帶電配體、0.1～3g羰基二咪唑加入到30～80ml的二甲基甲酰胺溶液中，常溫反應(yīng)1～3h，加入1～10g上述步驟S3所得的陰離子淀粉，攪拌均勻，升溫至50～70℃，反應(yīng)8～24h，靜置分層后用乙醇洗滌并干燥，即得；B)防粘連纖維素層的制備：將可降解高分子材料分散于有機(jī)溶劑中，得到高分子混合溶液，將高分子混合溶液通過靜電紡絲，得到防粘連纖維層；C)將上述止血材料加入純化水，配制成1～5％的混合淀粉懸浮液，將該混合淀粉懸浮液經(jīng)霧化后均勻噴涂在該防粘連纖維層表面，40～60℃干燥滅菌，即得。本申請(qǐng)防粘連膜將連接包括至少一個(gè)羧基官能團(tuán)和至少一個(gè)氨基官能團(tuán)的帶電配體的陰離子淀粉止血材料附著于由可降解高分子材料相互交織形成的防粘連纖維層外層。其能夠快速吸干血液中的水分，形成凝膠狀混合物能夠黏附于傷口表面，并且發(fā)揮分子篩的作用，使血液中紅細(xì)胞、凝血酶、血小板和纖維蛋白等有形成分在顆粒表面聚集，從而達(dá)到快速止血的作用，同時(shí)能夠有效減少術(shù)后粘連的發(fā)生。帶電配體優(yōu)選為羧甲基殼聚糖，羧甲基殼聚糖是殼聚糖的一種水溶性衍生物，羧甲基化的取代使兩種異電基團(tuán)(羧基和氨基)共存于同一葡聚糖鏈上。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，通過將同時(shí)含有羧基和氨基的羧甲基殼聚糖連接到可降解淀粉上，可以改變可降解淀粉的特性。優(yōu)選是將羧甲基殼聚糖連接到陰離子可降解淀粉上。試驗(yàn)證明，將羧甲基殼聚糖連接到大部分陰離子可降解淀粉上可以明顯地提高止血淀粉的止血速度，同時(shí)能夠克服由于羧甲基殼聚糖的水溶性而導(dǎo)致止血材料對(duì)創(chuàng)面的粘附力不足的缺陷。試驗(yàn)結(jié)果證明，不經(jīng)陰離子化反應(yīng)，直接將可降解淀粉與羧甲基殼聚糖連接得到的止血材料，其止血時(shí)間延長(zhǎng)了59s。值得提出的是，發(fā)明人同時(shí)發(fā)現(xiàn)，羧甲基殼聚糖的分子量和取代度對(duì)止血淀粉的性能有較大的影響。發(fā)明人經(jīng)過大量的試驗(yàn)終于得出，羧甲基殼聚糖的分子量?jī)?yōu)選為2～4×103，更優(yōu)選2.6×103，取代度優(yōu)選為80～90％，更優(yōu)選為88％更有利于止血淀粉性能的提升。另外，發(fā)明人將馬鈴薯淀粉和玉米淀粉作為原料，經(jīng)酸解、交聯(lián)、陰離子化、陽離子化反應(yīng)后制得的止血淀粉的在流血21.25～23.5s后即可止血，具有優(yōu)異的止血性能。但令發(fā)明人意想不到的是，以葛根淀粉和蓮藕淀粉作為原料經(jīng)本發(fā)明方法制備得到的止血淀粉的止血性能不太理想，這可能是與淀粉中直鏈淀粉和支鏈淀粉的比例有關(guān)，而含有較多的支鏈淀粉更有利于止血材料的性能的提升。本申請(qǐng)中所述乳化劑選自司盤-60、司盤-80、司盤-85、壬基酚聚氧乙烯醚、吐溫-80、吐溫-20、吐溫-40和吐溫-60中的一種或者幾種。優(yōu)選地，本申請(qǐng)中所述乳化劑由司盤-80和吐溫-60按1:(0.1～1)的重量比組成。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明止血防粘連膜具有以下優(yōu)勢(shì)：1)本申請(qǐng)防粘連膜能夠有效防粘連，同時(shí)具有優(yōu)異的止血效果，在流血21.25～23.5s后即可迅速止血。2)本申請(qǐng)通過在陰離子淀粉上連接同時(shí)含有一個(gè)以上羧基和氨基官能團(tuán)的羧甲基殼聚糖，使得制備得到的止血材料的止血性能大大提升，取得了顯著的進(jìn)步。具體實(shí)施方式：以下通過具體實(shí)施方式的描述對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但這并非是對(duì)本發(fā)明的限制，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進(jìn)，但是只要不脫離本發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本發(fā)明部分原料的廠家信息組分廠家/CAS號(hào)馬鈴薯淀粉9005-25-8玉米淀粉9005-25-8豌豆淀粉煙臺(tái)雙塔食品股份有限公司木薯淀粉中山市弘欣生物科技有限公司小麥淀粉鄭州明瑞化工產(chǎn)品有限公司大米淀粉江西金農(nóng)生物科技有限公司綠豆淀粉濟(jì)南興森淀粉科技有限公司荸薺淀粉襄陽三珍食品有限公司葛根淀粉昆明朗盛生物科技有限公司蓮藕淀粉廣西南寧世博基業(yè)貿(mào)易有限公司紅薯淀粉重慶金田農(nóng)業(yè)集團(tuán)有限公司糯米淀粉無錫金陵塔淀粉有限公司甘薯淀粉重慶金田農(nóng)業(yè)集團(tuán)有限公司菱角淀粉西安天瑞生物技術(shù)有限公司實(shí)施例1、不同淀粉原料的組合對(duì)止血材料止血性能的影響試驗(yàn)1.材料與方法1.1試驗(yàn)動(dòng)物：健康成年SD大鼠90只，雌雄不限，體重210～240g；健康成年新西蘭兔8只，雌雄不限，體重1.9～2.1kg，均由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2試驗(yàn)方法1.2.1止血時(shí)間及出血量測(cè)定將90只大鼠根據(jù)下表1的15種淀粉的組合制得的止血材料隨機(jī)分為15組，每組6只。全部動(dòng)物術(shù)前均禁食(不禁水)12h，3％戊巴比妥鈉40mg/kg體重腹腔注射麻醉，于肋弓下沿腹中線作一長(zhǎng)約2cm縱行切口，沿腹中線剪開腹肌，擠壓腹部至肝中葉從切口處被擠出，吸干肝臟周圍腹腔液后將稱重后的無菌紗布?jí)|于肝中葉下，于肝中葉下緣以上2cm處快速切除肝中葉。根據(jù)分組立即均勻涂抹上述15種淀粉的組合制得的止血材料300mg，并開始計(jì)時(shí)，直至出血停止，記錄止血時(shí)間及出血量。止血時(shí)間為切除肝中葉開始至出血停止；出血量為切除前后無菌紗布重量差。1.2.2體外促凝血測(cè)定取根據(jù)表1的15種淀粉的組合制得的止血材料，分別置于5ml0.01mol/LPBS溶液(取8gNaCl/0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4，溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1L制成0.01mol/LPBS溶液)中，終濃度為0.2mg/ml，分別標(biāo)記好。各組取0.2ml溶液置于直徑1cm、長(zhǎng)10cm的試管璃管中，于37℃水浴箱中水浴2分鐘。于每只新西蘭兔耳中央動(dòng)脈抽取30ml動(dòng)脈血，分別加入2ml兔血于上述試管中，混合均勻后水浴，每隔30s傾斜試管，至血液凝結(jié)不流動(dòng)，記錄凝血時(shí)間，每組測(cè)量8個(gè)樣本，結(jié)果取平均值。1.3結(jié)果見表1。表1試驗(yàn)結(jié)果由上表可知，淀粉原料的種類對(duì)止血材料的止血性能有較大的影響。其中，以馬鈴薯淀粉和玉米淀粉、菱角淀粉和玉米淀粉、大米淀粉和綠豆淀粉作為原料經(jīng)本發(fā)明申請(qǐng)所述制備方法制得的止血材料的止血性能較好。并且以馬鈴薯淀粉和玉米淀粉作為原料制得的止血材料的止血性能最佳，其止血時(shí)間為20s，出血量為0.38，體外促凝血時(shí)間為26s。值得提出的是，以葛根淀粉和蓮藕淀粉為原料經(jīng)本發(fā)明申請(qǐng)所述制備方法制得的止血材料的止血性能不太理想，這一點(diǎn)是發(fā)明人意想不到的。實(shí)施例2、一種止血防粘連膜本發(fā)明實(shí)施例2所述止血防粘連膜由以下步驟制得：A)止血材料的制備：由步驟S1～S4組成：S1、酸解：取淀粉與15％的鹽酸溶液按1:5的比例混合，攪拌得淀粉多糖溶液，將上述淀粉多糖溶液置于50℃的恒溫水浴中反應(yīng)15h，反應(yīng)過程中持續(xù)攪拌，攪拌速度為600rpm，得到酸解后的淀粉多糖溶液；S2、交聯(lián)：往上述酸解處理后的淀粉多糖溶液中加入大豆油、氫氧化鈉溶液、乳化劑和環(huán)氧氯丙烷，攪拌混合；其中，大豆油、氫氧化鈉溶液、乳化劑和環(huán)氧氯丙烷的重量比為2:1:0.06：0.1，反應(yīng)36h；S3、陰離子化反應(yīng)：將乙醇溶液、一氯醋酸、氫氧化鈉溶液以及經(jīng)上述S2步驟處理后的淀粉多糖溶液分別加入反應(yīng)器中，充分?jǐn)嚢?，升溫?0℃，反應(yīng)3h后加入冰醋酸，調(diào)節(jié)pH為6.8，過濾，用乙醇溶液洗滌，干燥，得陰離子淀粉；S4、陽離子化反應(yīng)：將2g分子量為3×103，取代度為88％的羧甲基殼聚糖、1g羰基二咪唑加入到50ml的二甲基甲酰胺溶液中，常溫反應(yīng)2小時(shí)，加入4g上述步驟S3所得的陰離子淀粉，攪拌均勻，升溫至60℃，反應(yīng)12h，靜置分層后用乙醇洗滌并干燥，即得；其中，所述淀粉由馬鈴薯淀粉和玉米淀粉按0.06:0.04的重量比組成，所述乳化劑由司盤-80和吐溫-60按1:0.3的重量比組成；B)防粘連纖維素層的制備：將分子量為3萬的聚乳酸分散于由DMF、丙酮、THF和六氟異丙醇組成的有機(jī)溶劑中，得到濃度為15％的聚乳酸混合溶液，將聚乳酸混合溶液分別注入5個(gè)10ml注射器中，加上5號(hào)不銹鋼枕頭，在電壓為10KV，溶液流速為1ml/h，接收距離為5cm的條件下進(jìn)行靜電紡絲，得到防粘連纖維層；C)將上述止血材料加入純化水，配制成3％的混合淀粉懸浮液，將該混合淀粉懸浮液經(jīng)霧化后均勻噴涂在該防粘連纖維層表面，50℃干燥滅菌，即得。實(shí)施例3、一種止血防粘連膜本發(fā)明實(shí)施例3所述止血防粘連膜由以下步驟制得：A)止血材料的制備：由步驟S1～S4組成：S1、酸解：取淀粉與20％的鹽酸溶液按1:1的比例混合，攪拌得淀粉多糖溶液，將上述淀粉多糖溶液置于30℃的恒溫水浴中反應(yīng)24h，反應(yīng)過程中持續(xù)攪拌，攪拌速度為200rpm，得到淀粉多糖溶液；S2、交聯(lián)：往上述酸解處理后的淀粉多糖溶液中加入大豆油、氫氧化鈉溶液、乳化劑和環(huán)氧氯丙烷，攪拌混合；其中，大豆油、氫氧化鈉溶液、乳化劑和環(huán)氧氯丙烷的重量比為1:1:0.1:0.1，反應(yīng)36h；S3、陰離子化反應(yīng)：將乙醇溶液、一氯醋酸、氫氧化鈉溶液以及經(jīng)上述S2步驟處理后的淀粉多糖溶液分別加入反應(yīng)器中，充分?jǐn)嚢?，升溫?0℃，反應(yīng)1h后加入冰醋酸，調(diào)節(jié)pH為6.5，過濾，用乙醇溶液洗滌，干燥，得陰離子淀粉；S4、陽離子化反應(yīng)：將0.1g分子量為2×103，取代度為80％的羧甲基殼聚糖、0.1g羰基二咪唑加入到30ml的二甲基甲酰胺溶液中，常溫反應(yīng)1小時(shí)，加入1g上述步驟S3所得的陰離子淀粉，攪拌均勻，升溫至50℃，反應(yīng)8h，靜置分層后用乙醇洗滌并干燥，即得；其中，所述淀粉由馬鈴薯淀粉和玉米淀粉按0.01:0.01的重量比組成，所述乳化劑由司盤-80和吐溫-60按1:0.1的重量比組成；B)防粘連纖維素層的制備：將分子量為0.5萬的聚乳酸分散于由DMF、丙酮、THF和六氟異丙醇組成的有機(jī)溶劑中，得到濃度為20％的聚乳酸混合溶液，將聚乳酸混合溶液分別注入5個(gè)10ml注射器中，加上5號(hào)不銹鋼枕頭，在電壓為30KV，溶液流速為5ml/h，接收距離為25cm的條件下進(jìn)行靜電紡絲，得到防粘連纖維層；C)將上述止血材料加入純化水，配制成1％的混合淀粉懸浮液，將該混合淀粉懸浮液經(jīng)霧化后均勻噴涂在該防粘連纖維層表面，40℃干燥滅菌，即得。實(shí)施例4、一種止血防粘連膜本發(fā)明實(shí)施例4所述止血防粘連膜由以下步驟制得：A)止血材料的制備：由步驟S1～S4組成：S1、酸解：取淀粉與15％的鹽酸溶液按10的比例混合，攪拌得淀粉多糖溶液，將上述淀粉多糖溶液置于60℃的恒溫水浴中反應(yīng)5h，反應(yīng)過程中持續(xù)攪拌，攪拌速度為3000rpm；S2、交聯(lián)：往上述酸解處理后的淀粉多糖溶液中加入大豆油、氫氧化鈉溶液、乳化劑和環(huán)氧氯丙烷，攪拌混合，其中，大豆油、氫氧化鈉溶液、乳化劑和環(huán)氧氯丙烷的重量比為2:2:0.9:1，反應(yīng)36h；；S3、陰離子化反應(yīng)：將乙醇溶液、一氯醋酸、氫氧化鈉溶液以及經(jīng)上述S2步驟處理后的淀粉多糖溶液分別加入反應(yīng)器中，充分?jǐn)嚢?，升溫?0℃，反應(yīng)4h后加入冰醋酸，調(diào)節(jié)pH為7.0，過濾，用乙醇溶液洗滌，干燥，得陰離子淀粉；S4、陽離子化反應(yīng)：將3g分子量為4×103，取代度為90％的羧甲基殼聚糖、3g羰基二咪唑加入到80ml的二甲基甲酰胺溶液中，常溫反應(yīng)3小時(shí)，加入10g上述步驟S3所得的陰離子淀粉，攪拌均勻，升溫至70℃，反應(yīng)16h，靜置分層后用乙醇洗滌并干燥，即得；其中，所述淀粉由馬鈴薯淀粉和玉米淀粉按0.1:0.2的重量比組成，所述乳化劑由司盤-80和吐溫-60按1:1的重量比組成。B)防粘連纖維素層的制備：將分子量為5萬的聚乳酸分散于由DMF、丙酮、THF和六氟異丙醇組成的有機(jī)溶劑中，得到濃度為10％的聚乳酸混合溶液，將聚乳酸混合溶液分別注入8個(gè)10ml注射器中，加上5號(hào)不銹鋼枕頭，在電壓為20KV，溶液流速為3ml/h，接收距離為15cm的條件下進(jìn)行靜電紡絲，得到防粘連纖維層；C)將上述止血材料加入純化水，配制成5％的混合淀粉懸浮液，將該混合淀粉懸浮液經(jīng)霧化后均勻噴涂在該防粘連纖維層表面，60℃干燥滅菌，即得。對(duì)比例1、一種止血防粘連膜對(duì)比例1與實(shí)施例2的區(qū)別在于：去掉S3步驟，其余操作及參數(shù)如實(shí)施例2。對(duì)比例2、一種止血防粘連膜對(duì)比例2與實(shí)施例2的區(qū)別在于：將步驟S3和步驟S4調(diào)換順序，其余操作及參數(shù)如實(shí)施例2。對(duì)比例3、一種止血防粘連膜對(duì)比例3與實(shí)施例2的區(qū)別在于：用精氨酸替換步驟S4中的羧甲基殼聚糖，其余操作及參數(shù)如實(shí)施例2。對(duì)比例4、一種止血防粘連膜對(duì)比例4與實(shí)施例2的區(qū)別在于：步驟S4中羧甲基殼聚糖的分子量為1×103，其余操作及參數(shù)如實(shí)施例2。對(duì)比例5、一種止血防粘連膜對(duì)比例5與實(shí)施例2的區(qū)別在于：用殼聚糖替換步驟S4中的羧甲基殼聚糖，其余操作及參數(shù)如實(shí)施例2。試驗(yàn)例一、效果試驗(yàn)(一)防粘連試驗(yàn)1.材料與方法1.1試驗(yàn)動(dòng)物：健康成年新西蘭兔15只，雌雄不限，體重1.9～2.1kg，均由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2.試驗(yàn)方法1.2.1動(dòng)物分組：將上述新西蘭兔隨機(jī)分為5組，按術(shù)后處死時(shí)間隨機(jī)分為2、4、8、12、24周組，每組3只，采用自身對(duì)照。1.2.2手術(shù)方法：進(jìn)行3％戊巴比妥鈉兔耳緣靜脈注射麻醉后，以俯臥位頭部支架固定，消毒鋪單。取頭部正中縱行切開頭皮，行雙側(cè)頂部開窗，直徑約1.0cm，剪除兔的硬腦膜1.0cm，用5號(hào)注射器針頭輕輕劃破珠網(wǎng)膜至使肉眼能看見腦脊液外漏，各周組置入直徑約1.0cm的本申請(qǐng)實(shí)施例2～4所述止血防粘連膜，對(duì)側(cè)空白對(duì)照，縫合頭皮。1.2.3術(shù)后處理術(shù)后單籠飼養(yǎng)，自由飲水進(jìn)食，每日觀察傷口愈合情況。1.2.4觀察內(nèi)容及方法1.2.4.1大體觀察術(shù)后2、4、8、12、24周后各處死3只兔子，肉眼觀察硬腦膜下組織與瘢痕粘連情況，參考Rydell和Balazs標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行粘連等級(jí)評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如表2所示，評(píng)分結(jié)果如表3所示。1.2.4.2光鏡觀察將處死的兔子的術(shù)區(qū)及周圍顱骨連同顱骨下腦組織一并取出，3％硝酸脫鈣1～2天，10％福爾馬林固定2天。標(biāo)本再經(jīng)脫水、石蠟包埋，參考He和Revel標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行組織粘連評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如表4所示，評(píng)分結(jié)果如表5所示。表2大體觀察評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)0分硬腦膜下組織與瘢痕無明顯粘連1分硬腦膜下組織與瘢痕有薄而散在的膜性粘連，但牽扯瘢痕組織粘連易與硬腦膜下組織分離2分硬腦膜下組織與瘢痕粘連較廣泛和致密，但仍可鈍性分離，分離后硬腦膜下組織完整3分硬腦膜下組織與瘢痕粘連致密，需銳性分離，分離后硬腦膜下組織難以保持完整表3術(shù)后不同時(shí)間瘢痕與硬膜下組織粘連大體觀察評(píng)分結(jié)果表4光鏡觀察評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)0分硬腦膜下組織與瘢痕無粘連、間隙存在1分硬腦膜下組織與瘢痕僅見少量纖維束2分硬腦膜下組織與瘢痕粘連范圍少于顱骨缺損橫徑2/33分硬腦膜下組織與瘢痕粘連廣泛，范圍大于顱骨缺損橫徑2/3，和/或瘢痕組織侵入腦組織表5術(shù)后不同時(shí)間瘢痕與硬膜下組織粘連光鏡觀察評(píng)分結(jié)果由表3、表5可知，本申請(qǐng)實(shí)施例2～4所述止血防粘連膜對(duì)術(shù)后防粘連有明顯效果。(二)止血試驗(yàn)2.材料與方法2.1試驗(yàn)動(dòng)物：健康成年新西蘭兔4只，雌雄不限，體重1.9～2.1kg，均由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，標(biāo)記為1～4號(hào)。2.2試驗(yàn)方法2.2.1止血時(shí)間及出血量測(cè)定按30mg/kg體重于兔耳靜脈緩慢注入3％戊巴比妥鈉，將動(dòng)物背部剪毛并用碘爾康溶液消毒鋪巾單后，沿脊柱兩側(cè)對(duì)稱各剪8個(gè)圓形切口，直徑約1.0cm，深度至皮膚全層，然后仔細(xì)避開皮下組織層中較大的血管，剪(分離)至筋膜層。在新西蘭兔的一側(cè)8個(gè)圓形切口處分別敷以本申請(qǐng)實(shí)施例2～4以及對(duì)比例1～5所述止血防粘連膜，另一側(cè)對(duì)稱性地敷以滅菌紗布止血，記錄止血時(shí)間，觀察與創(chuàng)面的粘合情況，每個(gè)樣本重復(fù)4次。停止止血后揭下防粘連膜，放入預(yù)先配制好的氰化高鐵血紅蛋白試劑5ml中仔細(xì)清洗，以紫外分光光度計(jì)560nm波長(zhǎng)光度比色，以其中Hb的含量代表出血量。2.3結(jié)果見表6、表7。表6本申請(qǐng)實(shí)施例2～4以及對(duì)比例1～5止血防粘連膜及紗布對(duì)照組的止血時(shí)間(s)實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例4對(duì)比例1對(duì)比例2對(duì)比例3對(duì)比例4對(duì)比例5對(duì)照組1號(hào)22222381756866591582號(hào)20232486727070551423號(hào)23252593827572601634號(hào)2021228073726862136平均值21.2522.7523.58575.570.756959149.75表7本申請(qǐng)實(shí)施例2～4以及對(duì)比例1～5止血防粘連膜及紗布對(duì)照組的Hb光度吸收值A(chǔ)由表6、表7可知，本申請(qǐng)所述止血防粘連在出血后21.25～23.5s內(nèi)即可止血，具有優(yōu)異的止血效果。值得提出的是，對(duì)比例1～5與實(shí)施例2相比，止血效果均有明顯下降。從對(duì)比例1可看出，將羧甲基殼聚糖連接到陰離子可降解淀粉上比直接連接到可降解淀粉上更有利于提高止血材料的止血效果，這一點(diǎn)從對(duì)比例2的試驗(yàn)結(jié)果也可以看出。另外，與精氨酸相比，羧甲基殼聚糖的加入更有利于提高止血材料的止血效果，同時(shí)羧甲基殼聚糖的分子量對(duì)止血材料的止血效果也有一定的影響。當(dāng)前第1頁1 2 3