本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種載藥脂質(zhì)體溶液制劑及其制備方法，特別涉及一種載有奧沙利鉑的熱敏長循環(huán)脂質(zhì)體、制備方法及其蔗糖溶液制劑。

背景技術(shù)：

奧沙利鉑對結(jié)直腸癌、卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌及乳腺癌等多種動物或者人體細(xì)胞株，尤其是對順鉑和卡鉑耐藥腫瘤株多有顯著的抑制作用，可用于晚期卵巢癌的一線治療和復(fù)治。奧沙利鉑對胃腸道、肝、腎以及骨髓毒性較順鉑、卡鉑明顯減輕，然而仍存在容易分解和神經(jīng)毒性等缺點。

熱敏脂質(zhì)體(thermosensitive liposomes)是脂質(zhì)體的一種，它又稱溫度敏感脂質(zhì)體，無毒，生物相容性較好，DPPC是一種對溫度敏感的脂質(zhì)，當(dāng)脂質(zhì)體被加熱到其相變溫度以上時，脂質(zhì)體膜由“膠晶態(tài)”轉(zhuǎn)變到液晶結(jié)構(gòu)，通透性增加，使藥物大量釋放。從而在特定的腫瘤靶點釋放出所攜帶藥物，而實現(xiàn)靶向給藥。

熱敏脂質(zhì)體在血液中容易被RES系統(tǒng)清除，因此在脂質(zhì)體中嵌入DSPE-PEG2000使得PEG在脂質(zhì)體表面形成位阻，并且PEG的極性基團增加了脂質(zhì)體表面的親水性，減弱了RES系統(tǒng)對脂質(zhì)體的識別，延長脂質(zhì)體在血液中的循環(huán)時間，達到被動靶向的抗癌效果。由于奧沙利鉑屬于水溶性藥物，和磷脂膜的親和力小，使得脂質(zhì)體發(fā)生相變時能迅速釋放，適合于作為熱敏脂質(zhì)體的包封藥物。

本發(fā)明旨在將DPPC與DSPE-PEG相結(jié)合，制備長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體蔗糖制劑，對腫瘤的靶向治療具有重要意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的之一在于提供一種奧沙利鉑藥物的熱敏感性的長循環(huán)脂質(zhì)載體。本發(fā)明使用具有熱敏性質(zhì)的DPPC作為主體，同時以生物相容性高的DSPE-PEG2000修飾在脂質(zhì)體的外面，奧沙利鉑包載在脂質(zhì)體的親水腔內(nèi)。

本發(fā)明的目的之二在于提供一種奧沙利鉑熱敏長循環(huán)脂質(zhì)體的蔗糖制劑的制備方法。

本發(fā)明的目的之三在于提供一種奧沙利鉑熱敏長循環(huán)脂質(zhì)體的蔗糖制劑在制備抗腫瘤藥物中的用途。

本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種奧沙利鉑長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體蔗糖制劑，其特征在于，所述制劑由奧沙利鉑、DPPC、DSPE-PEG2000制備成的脂質(zhì)體，并且分散于蔗糖溶液中，其中奧沙利鉑與DPPC的重量比為1∶3～30，DPPC、DSPE-mPEG的重量比為1∶0.07～0.20，蔗糖溶液的濃度為4％-10％，脂質(zhì)體的粒徑為100-250nm，電位為-11～-30mV，較優(yōu)脂質(zhì)體的粒徑為120-160nm；所述脂質(zhì)體的電位為-20～-30mV。

一種奧沙利鉑長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體蔗糖制劑的制備方法，其特征在于按處方量稱取DPPC、DSPE-PEG2000，均勻混合后加入有機溶劑溶解，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上去除有機溶劑成膜，加入蔗糖水溶液水化后，采用探頭超聲或高速剪切機制備出脂質(zhì)體，在制備得到的脂質(zhì)體中加入奧沙利鉑粉末，加熱下溶解攪拌孵育，放冷后制備得到的奧沙利鉑脂質(zhì)體，透析除去游離奧沙利鉑，并經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾除菌，其中孵育溫度為50-60℃，所述攪拌速度為80-250rpm，保溫孵育時間為2-4小時；其中最優(yōu)加熱溫度為55℃，最優(yōu)攪拌速度為110rpm，最優(yōu)保溫孵育時間為3小時。最后通過透析法、葡聚糖凝膠柱層析法或超濾離心法將游離奧沙利鉑除去。

所述奧沙利鉑粉末加入后的濃度為4mg/mL～12mg/mL，且存在于4％～10％的蔗糖溶液中。

本發(fā)明的特點

本發(fā)明的優(yōu)點在于選用合適的空白脂質(zhì)體溫育載藥法將水溶性的奧沙利鉑穩(wěn)定的包載在脂質(zhì)體中，且該制劑能夠在溫度超過42℃時快速完全釋放藥物，并且在體內(nèi)呈現(xiàn)出對腫瘤較佳的靶向性。

本發(fā)明制備得到的奧沙利鉑長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體的粒徑為120-160nm，相較逆向蒸發(fā)法制備的脂質(zhì)體粒徑較小，Zeta電位為-11mV～-30mV，放置中不易發(fā)生聚集或沉淀，體系具有良好的穩(wěn)定性，并在體內(nèi)具有明顯的被動靶向性。能夠長時間的保持在血液中的有效抗癌濃度，防止奧沙利鉑在血液中的清除與降解，減少在正常組織中的釋放，從而有效的進入癌細(xì)胞，在腫瘤部位溫度升高時有效釋放藥物，使得腫瘤部位藥物濃度增加，從而發(fā)揮抗癌作用。

附圖說明

圖1為本發(fā)明中奧沙利鉑長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體的粒徑分布圖。

圖2為本發(fā)明中的奧沙利鉑長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體在37℃和42℃溫度下的體外釋放曲線。

圖3為不同濃度的奧沙利鉑長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體和市售奧沙利鉑注射液在RKO細(xì)胞中的抑制率。

圖4為奧沙利鉑長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體在荷瘤裸鼠體內(nèi)不同時間點的組織熒光分布圖。

具體實施方式

實施例1：

(配方一)

DPPC 150mg

DSPE-PEG2000 26.9mg

奧沙利鉑 50mg

按處方量稱取DPPC、DSPE-PEG2000，均勻混合后加入有機溶劑溶解，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上去除有機溶劑成膜，加入5％的蔗糖水溶液水化后，采用探頭超聲300W，超聲2分鐘，制備出空白脂質(zhì)體，在制備得到的脂質(zhì)體中加入處方量奧沙利鉑粉末，在55℃下溶解攪拌孵育2小時，放冷后制備得到的奧沙利鉑脂質(zhì)體，透析除去游離奧沙利鉑，并經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾除菌，分裝于西林瓶中。

實施例2：

(配方二)

DPPC 200mg

DSPE-PEG2000 13.92mg

奧沙利鉑 30mg

按處方量稱取DPPC、DSPE-PEG2000，均勻混合后加入有機溶劑溶解，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上去除有機溶劑成膜，加入9％的蔗糖水溶液水化后，采用探頭超聲300W，超聲5分鐘，制備出空白脂質(zhì)體，在制備得到的脂質(zhì)體中加入處方量奧沙利鉑粉末，在50℃下溶解攪拌孵育3小時，放冷后制備得到的奧沙利鉑脂質(zhì)體，透析除去游離奧沙利鉑，并經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾除菌，分裝于西林瓶中。

實施例3：

(配方三)

DPPC 240mg

DSPE-PEG2000 18mg

奧沙利鉑 8mg

按處方量稱取DPPC、DSPE-PEG2000，均勻混合后加入有機溶劑溶解，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上去除有機溶劑成膜，加入9％的蔗糖水溶液水化后，采用探頭超聲300W，超聲5分鐘，制備出空白脂質(zhì)體，在制備得到的脂質(zhì)體中加入處方量奧沙利鉑粉末，在60℃下溶解攪拌孵育4小時，放冷后制備得到的奧沙利鉑脂質(zhì)體，透析除去游離奧沙利鉑，并經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾除菌，分裝于西林瓶中。

實施例4：

奧沙利鉑脂質(zhì)體的粒徑分布和電位測定：通過馬爾文激光粒度儀測定奧沙利鉑脂質(zhì)體的粒徑與Zeta電位。平均粒徑150nm，Zeta電位-15mV，粒徑分布圖見圖1。

實施例5：

奧沙利鉑長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體的體外釋放評價：取奧沙利鉑的溫敏性脂質(zhì)體0.5mL于透析袋(截留分子量＝7000Da)內(nèi)，兩端用棉線扎緊，置于25mL比色管內(nèi)，各加入釋放介質(zhì)(pH6.8)15mL，分別置于37℃和42℃恒溫水浴振蕩器中，轉(zhuǎn)速為100r/min，分別于0.5h，1h，2h，4h，6h，8h，12h，24h，取釋放介質(zhì)1mL于離心管中，過0.22μm水膜，棄初濾液，取續(xù)濾液于進樣小瓶，于高效液相色譜儀進樣，計算藥物釋放量，結(jié)果見圖2。

實施例6：

奧沙利鉑長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體的細(xì)胞毒性評價：將RKO結(jié)腸癌細(xì)胞以5000個/孔接種于96孔板中，孵育24h后，將長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體在42℃水浴鍋中溫育1小時后，稀釋成不同濃度加入96孔板中，同時以奧沙利鉑市售注射液為對照組。取20μL四甲基偶氮唑藍(MTT，5mg/mL)加入各孔內(nèi)，繼續(xù)孵育4h，棄去孔內(nèi)液體，加入DMSO 200μL，振搖，使結(jié)晶充分溶解，在490nm波長下用酶標(biāo)儀測定各樣品的吸光值(ODsample)，同時測定空白組OD值(ODcontrol)，并計算抑制率，結(jié)果見圖3。

實施例7：

奧沙利鉑長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體的體內(nèi)靶向性評價：制備包載Dir的長循環(huán)熱敏脂質(zhì)體，將荷RKO結(jié)腸癌裸鼠(體重18～25g/只)隨機分配，每組3只，尾靜脈注射給藥，每只小鼠按照1.5mg/kg的Dir劑量給藥。給藥后用5％水合氯醛麻醉，分別于1h，2h，4h，6h，8h進行熒光成像拍攝。結(jié)果見圖4。