本發(fā)明涉及藥劑學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種具有低氧響應(yīng)效應(yīng)的脂質(zhì)體藥物載體，以及該藥物載體的制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

腫瘤治療中小分子化療藥物沒(méi)有組織選擇性，難以在腫瘤病灶部位達(dá)到高的藥物濃度，大劑量使用下治療效果差，毒副作用強(qiáng)。將小分子化療藥物裝載到納米藥物載體如脂質(zhì)體中能夠顯著降低毒副作用，但是傳統(tǒng)的脂質(zhì)體藥物載體并不能顯著的提高抗癌藥的治療效果，所以，使用新穎的控釋材料改進(jìn)脂質(zhì)體藥物載體使其能夠在腫瘤部位特異性釋放藥物，提高療效，是目前迫切需要研究的內(nèi)容。

低氧是實(shí)體瘤微環(huán)境的基本特征之一，正常組織的氧濃度一般在30mm Hg左右，而腫瘤組織的氧濃度較低，有的甚至接近于0。低氧是很多腫瘤治療失敗的主要原因，但是低氧同樣提供了一種治療途徑，因此，設(shè)計(jì)制備具有根據(jù)腫瘤低氧特征而改變自身理化性裝的納米藥物載體用于低氧實(shí)體瘤的治療，將有利于提高腫瘤的治療效果。

在低氧控釋方面，通過(guò)文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)芳香硝基類化合物及其衍生物因其低氧響應(yīng)性而常被用于腫瘤低氧的檢測(cè)，例如，CN201610026007中利用疏水的2-硝基咪唑在低氧環(huán)境下在細(xì)胞內(nèi)會(huì)轉(zhuǎn)變成水溶性的2-氨基咪唑。因此，可以利用這一特性來(lái)設(shè)計(jì)納米藥物載體時(shí)引入芳香硝基類基團(tuán)，基團(tuán)在低氧腫瘤細(xì)胞內(nèi)發(fā)生反應(yīng)，導(dǎo)致納米藥物載體自身的穩(wěn)定性降低，從而釋放出裝載的抗癌藥物，顯著提高腫瘤部位的藥物濃度，從而提高藥物的利用度。此外,現(xiàn)階段低氧響應(yīng)藥物載體主要局限于硝基芳烴功能化的聚合物形成的載體，未見(jiàn)有低氧響應(yīng)脂質(zhì)體藥物載體的報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種低氧響應(yīng)脂質(zhì)體藥物載體。

本發(fā)明還要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供該低氧響應(yīng)脂質(zhì)體藥物載體的制備方法及應(yīng)用。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明公開(kāi)一種低氧響應(yīng)脂質(zhì)體藥物載體，該脂質(zhì)體包括磷脂、膽固醇和低氧響應(yīng)分子，所述膽固醇與磷脂的質(zhì)量比為1:10-1:2，低氧響應(yīng)分子與磷脂的質(zhì)量比為1:10-1:4。

其中，所述磷脂為二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)和甲氧基-聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及?DSPE-MPEG2K)的混合物，其中二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)占磷脂總質(zhì)量的80-95％，二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)占磷脂總質(zhì)量的2-10％，甲氧基-聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及?DSPE-MPEG2K)占磷脂總質(zhì)量的3-10％；所述膽固醇為高純膽固醇(HP-CHOL)；所述低氧響應(yīng)分子為疏水性芳香硝基化合物衍生物(HR)；所述的低氧響應(yīng)分子位于所述磷脂的雙分子層之間。

其中，所述疏水性芳香硝基化合物衍生物(HR)具有的結(jié)構(gòu)通式為下述兩種通式之一：

通式(1)通式(2)

其中n為8-20之間的任意自然數(shù)，基團(tuán)R為H或者Ar-NO₂，Ar為咪唑環(huán)、2-甲基咪唑、苯環(huán)以及含有1-2個(gè)硝基苯環(huán)中的一種或多種。

所述疏水性芳香硝基化合物衍生物(HR)具有如下結(jié)構(gòu)式之一：

其中，所述脂質(zhì)體藥物載體的水化粒徑為50～500納米。

一種低氧響應(yīng)脂質(zhì)體藥物載體的制備方法，將配方量的磷脂、膽固醇和低氧響應(yīng)分子溶于有機(jī)溶劑中，真空旋蒸成膜，水化后即得到空載脂質(zhì)體。

其中，所述的有機(jī)溶劑為分析純甲醇和氯仿按體積比1:3-1:5的混合物。

該低氧響應(yīng)脂質(zhì)體藥物載體在負(fù)載抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

其中，所述抗腫瘤藥物為親水性抗腫瘤藥物和/或疏水性抗腫瘤藥物，其中，所述的親水性抗腫瘤藥物包括但不僅限于鹽酸阿霉素、鹽酸伊立替康和順鉑中的任意一種或幾種的混合物；所述的疏水性抗腫瘤藥物包括但不僅限于阿霉素、多西他賽、紫杉醇和喜樹(shù)堿中的任意一種或幾種的混合物。

其中，所述抗腫瘤藥物的負(fù)載量為1～25wt％。

該載藥脂質(zhì)體負(fù)載抗腫瘤藥物的制備方法為：

(1)若所述抗腫瘤藥物為疏水性抗腫瘤藥物，則：

將配方量的磷脂、膽固醇和低氧響應(yīng)分子和抗腫瘤藥物溶于有機(jī)溶劑中，室溫下真空旋蒸成膜，pH 7.4的磷酸緩沖液水化后即得到載藥脂質(zhì)體；

(2)若所述抗腫瘤藥物為親水性藥物，則：

采用pH梯度法載藥，則將配方量的磷脂、膽固醇和低氧響應(yīng)分子溶于有機(jī)溶劑中，真空旋蒸成膜后用100～300mM檸檬酸或醋酸鈣水溶液水化，用pH 7.4的磷酸緩沖液透析除去脂質(zhì)體外的檸檬酸或醋酸鈣，加入抗腫瘤藥物，30～70℃攪拌10～60分鐘即得到載藥脂質(zhì)體；或者，在水化時(shí)按比例加入抗腫瘤藥物，水化后用pH 7.4的磷酸緩沖液透析即得到載藥脂質(zhì)體；

采用上述兩種方法之一處理之后，未包封的游離藥物可以通過(guò)G-50葡聚糖凝膠柱分離除去。

其中，抗腫瘤藥物添加質(zhì)量與磷脂、膽固醇和低氧響應(yīng)分子的三者總質(zhì)量之比為1/3-1/10。

該低氧響應(yīng)脂質(zhì)體藥物載體在制備治療抗腫瘤或者其他低氧相關(guān)的疾病藥物中的應(yīng)用。

有益效果：

1、本發(fā)明的脂質(zhì)體的磷脂組成為相變溫度較高的DPPC和DMPC，在人體的生理溫度下呈膠晶態(tài)，不會(huì)發(fā)生藥物非特異性釋放或泄漏，極大地降低對(duì)人體正常組織和器官的毒副作用，因此本發(fā)明的脂質(zhì)體可以負(fù)載各種小分子抗腫瘤藥物，親水性藥物(鹽酸阿霉素、鹽酸伊立替康、順鉑等)位于脂質(zhì)體內(nèi)部核心，疏水性藥物(阿霉素、紫杉醇、喜樹(shù)堿等)位于磷脂雙分子層之間，可同時(shí)共載任意一種或幾種，對(duì)弱堿性或弱酸性藥物可以采用pH梯度法載藥達(dá)到高的包封率。

2、本發(fā)明的脂質(zhì)體在保持傳統(tǒng)脂質(zhì)體藥物載體的穩(wěn)定性的前提下，在雙分子層之間加入疏水性的芳香硝基類化合物作為低氧響應(yīng)分子，在低氧的腫瘤細(xì)胞內(nèi)，低氧響應(yīng)分子的硝基被還原為氨基，由疏水性變?yōu)橛H水性，使脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)不再穩(wěn)定，釋放藥物，達(dá)到在低氧腫瘤部位特異性釋放藥物的目的，顯著提高腫瘤部位的藥物濃度，提高抗腫瘤效果。

3、本發(fā)明的脂質(zhì)體含有PEG化磷脂可以避免被內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)捕獲，有效延長(zhǎng)脂質(zhì)體的血液循環(huán)時(shí)間，使脂質(zhì)體藥物有充足的時(shí)間通過(guò)EPR效應(yīng)在腫瘤部位滯留富集；膽固醇能夠收緊磷脂雙分子膜，使脂質(zhì)體更加穩(wěn)定。

4、本發(fā)明的脂質(zhì)體制備方法簡(jiǎn)單，易于放大生產(chǎn)，可以采用pH梯度法裝載弱酸性或弱堿性藥物，在較高的載藥率(20％)時(shí)依然保持高的包封率(大于90％)；對(duì)于脂溶性藥物，可以在旋蒸成膜時(shí)直接加入藥物；水化后使用G-50葡聚糖凝膠柱分離載藥脂質(zhì)體和游離藥物，既可得到載藥低氧響應(yīng)脂質(zhì)體。

附圖說(shuō)明

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明做更進(jìn)一步的具體說(shuō)明，本發(fā)明的上述和/或其他方面的優(yōu)點(diǎn)將會(huì)變得更加清楚。

圖1為實(shí)施例1制備的低氧響應(yīng)分子的核磁共振氫譜圖(1H NMR)；

圖2為實(shí)施例2-1制備的具有低氧響應(yīng)脂質(zhì)體(HR-LPs)和傳統(tǒng)脂質(zhì)體(LPs)的低氧處理前后的透射電鏡圖(TEM)；

圖3為實(shí)施例2-1制備的具有低氧響應(yīng)效應(yīng)的脂質(zhì)體藥物載體的體外低氧響應(yīng)性-紫外吸收特征峰的變化；

圖4為實(shí)施例4-1制備的具有低氧響應(yīng)效應(yīng)的阿霉素脂質(zhì)體藥物載體(DOX-HR-LPs)和傳統(tǒng)阿霉素脂質(zhì)體(DOX-LPs)在低氧和常氧條件下的阿霉素釋放曲線；

圖5為實(shí)施例4-1制備的具有低氧響應(yīng)效應(yīng)的阿霉素脂質(zhì)體藥物載體(DOX-HR-LPs)和傳統(tǒng)阿霉素脂質(zhì)體(DOX-LPs)在低氧和常氧條件下的細(xì)胞內(nèi)阿霉素的釋放行為觀察結(jié)果；

圖6為實(shí)施例4-1制備的具有低氧響應(yīng)效應(yīng)的阿霉素脂質(zhì)體藥物載體、傳統(tǒng)阿霉素脂質(zhì)體、及阿霉素以及對(duì)照組(PBS給藥組)在小鼠實(shí)體瘤模型上的治療效果圖；

圖7為本發(fā)明制備的低氧響應(yīng)脂質(zhì)體藥物載體的結(jié)構(gòu)示意圖。其中，圖中的磷脂代表二棕櫚酰磷脂酰膽堿和二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿，聚乙二醇磷脂代表甲氧基-聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及?。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明所述的一種具有低氧響應(yīng)效應(yīng)的脂質(zhì)體藥物載體、制備方法及其應(yīng)用做進(jìn)一步說(shuō)明。

實(shí)施例1

本實(shí)施所選用的低氧響應(yīng)分子為2-硝基咪唑衍生物，其制備方法如下：

取2-硝基咪唑60mg和1,12-二溴十二烷70mg加入5mL二甲基甲酰胺(DMF)中溶解充分，再加入K₂CO₃80mg，50℃攪拌反應(yīng)24h；向反應(yīng)溶液中加入5mL去離子水，再加入5mL乙酸乙酯萃取，重復(fù)萃取3次，合并萃取溶液，再向萃取液中加入2mL去離子水震蕩后靜置分層，除去下層水溶液，重復(fù)3次后真空旋蒸除去乙酸乙酯，得到2-硝基咪唑衍生物，即線形低氧響應(yīng)分子HR(hypoxia responsive elements)，其核磁共振氫譜圖(1H NMR)如圖1所示。

實(shí)施例2-1

具有低氧響應(yīng)效應(yīng)的脂質(zhì)體藥物載體的制備：

將二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、高純膽固醇(HP-CHOL)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、甲氧基-聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE-MPEG2K)、疏水性芳香硝基化合物衍生物(HR)按70:20:3:3:16的質(zhì)量比(總20mg)溶于甲醇和氯仿混合溶液中(體積比1:4)，減壓旋蒸成膜，用10mL去離子水50℃超聲水化，得到空白低氧響應(yīng)脂質(zhì)體HR-LPs；對(duì)照空白組脂質(zhì)體LPs的制備方法同HR-LPs，脂質(zhì)體組分中DPPC、HP-CHOL、DMPC、DSPE-MPEG2K同樣按質(zhì)量比70:20:3:3(總20mg)，不添加低氧響應(yīng)分子，減壓旋蒸成膜，10mL去離子水50℃超聲水化，得到空白脂質(zhì)體LPs。

實(shí)施例2-2

具有低氧響應(yīng)效應(yīng)的脂質(zhì)體藥物載體的制備：

將二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、高純膽固醇(HP-CHOL)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、甲氧基-聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及?DSPE-MPEG2K)、疏水性芳香硝基化合物衍生物(HR)按70:18:3:3:12的質(zhì)量比(總20mg)溶于甲醇和氯仿混合溶液中(體積比1:3)，其余步驟同實(shí)施例2-1，制備空白低氧響應(yīng)脂質(zhì)體HR-LPs。

實(shí)施例2-3

具有低氧響應(yīng)效應(yīng)的脂質(zhì)體藥物載體的制備：

將二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、高純膽固醇(HP-CHOL)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、甲氧基-聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及?DSPE-MPEG2K)、疏水性芳香硝基化合物衍生物(HR)按70:8:3:3:18的質(zhì)量比(總20mg)溶于甲醇和氯仿混合溶液中(體積比1:3)，其余步驟同實(shí)施例2-1，制備空白低氧響應(yīng)脂質(zhì)體HR-LPs。

實(shí)施例2-4

具有低氧響應(yīng)效應(yīng)的脂質(zhì)體藥物載體的制備：

將二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、高純膽固醇(HP-CHOL)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、甲氧基-聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及?DSPE-MPEG2K)、疏水性芳香硝基化合物衍生物(HR)按70:38:3:3:8的質(zhì)量比(總20mg)溶于甲醇和氯仿混合溶液中(體積比1:5)，其余步驟同實(shí)施例2-1，制備空白低氧響應(yīng)脂質(zhì)體HR-LPs。

實(shí)施例2-5

具有低氧響應(yīng)效應(yīng)的脂質(zhì)體藥物載體的制備：

將二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、高純膽固醇(HP-CHOL)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、甲氧基-聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及?DSPE-MPEG2K)、疏水性芳香硝基化合物衍生物(HR)按70:20:2:4:16的質(zhì)量比(總20mg)溶于甲醇和氯仿混合溶液中(體積比1:4)，其余步驟同實(shí)施例2-1，制備空白低氧響應(yīng)脂質(zhì)體HR-LPs。

實(shí)施例2-6

具有低氧響應(yīng)效應(yīng)的脂質(zhì)體藥物載體的制備：

將二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、高純膽固醇(HP-CHOL)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、甲氧基-聚乙二醇-二硬脂?；字Ｒ掖及?DSPE-MPEG2K)、疏水性芳香硝基化合物衍生物(HR)按62:21:7:7:15的質(zhì)量比(總20mg)溶于甲醇和氯仿混合溶液中(體積比1:4)，其余步驟同實(shí)施例2-1，制備空白低氧響應(yīng)脂質(zhì)體HR-LPs。

實(shí)施例3

具有低氧響應(yīng)效應(yīng)的脂質(zhì)體藥物載體(HR-LPs)的低氧響應(yīng)性考察：

將實(shí)施例2-1制備的HR-LPs和LPs在37℃水浴處理3h，低氧組加入肝微粒體和還原性輔酶Ⅱ(NADPH)分別作為除氧劑和還原劑，常氧組只加入NADPH。圖2為具有低氧響應(yīng)效應(yīng)的脂質(zhì)體藥物載體(HR-LPs)及對(duì)照組傳統(tǒng)的脂質(zhì)體藥物載體(LPs)低氧處理前后的透射電鏡(TEM)圖，結(jié)果顯示，實(shí)施例2-1制備的HR-LPs(圖2C)和LPs(圖2A)呈球形，顆粒粒徑為50納米左右，粒徑分布均勻，多分散性好。低氧處理后，LPs的形態(tài)無(wú)明顯變化(圖2B)，HR-LPs的球形結(jié)構(gòu)已經(jīng)被完全破壞(圖2D)。

HR-LPs低氧還原之后在325nm處硝基咪唑的紫外特征吸收峰消失，在290nm處出現(xiàn)新的氨基咪唑特征峰(圖3A)，而LPs低氧還原之后紫外特征吸收峰沒(méi)有發(fā)生明顯變化(圖3B)，結(jié)果顯示HR-LPs有的低氧響應(yīng)性，而LPs無(wú)低氧響應(yīng)性。

實(shí)施例4-1

本實(shí)施例所使用的脂質(zhì)體藥物載體裝載了抗癌藥物阿霉素，采用pH梯度載藥法，其制備方法為：實(shí)施例2-1制備的空白脂質(zhì)體LPs和HR-LPs采用250mM檸檬酸水溶液水化，用pH 7.4的磷酸緩沖液透析除去脂質(zhì)體外的檸檬酸或醋酸鈣，之后用磷酸氫二鈉調(diào)節(jié)脂質(zhì)體溶液的pH為7左右，按照藥脂質(zhì)量比1:4加入阿霉素，50℃避光攪拌1h后，得到裝載阿霉素的脂質(zhì)體DOX-LPs和低氧響應(yīng)脂質(zhì)體DOX-HR-LPs，4℃保存待用。離心取上清，HPLC測(cè)得DOX-LPs和DOX-HR-LPs包封率為96.8±0.29和93.4±1.30(％)。

實(shí)施例4-2

本實(shí)施例所使用的脂質(zhì)體藥物載體裝載了抗癌藥物多西他賽，采用pH梯度載藥法，其制備方法為：實(shí)施例2-1制備的空白脂質(zhì)體LPs和HR-LPs采用100mM檸檬酸水溶液水化，按照藥脂質(zhì)量比1:3加入阿霉素，30℃避光攪拌10min，其余步驟同實(shí)施例4-1得到得到裝載多西他賽的載藥脂質(zhì)體。

實(shí)施例4-3

本實(shí)施例所使用的脂質(zhì)體藥物載體裝載了抗癌藥物紫杉醇，采用pH梯度載藥法，其制備方法為：實(shí)施例2-1制備的空白脂質(zhì)體LPs和HR-LPs采用300mM檸檬酸水溶液水化，按照藥脂質(zhì)量比1:10加入阿霉素，70℃避光攪拌30min，其余步驟同實(shí)施例4-1得到得到裝載紫杉醇的載藥脂質(zhì)體。

實(shí)施例4-4

本實(shí)施例所使用的脂質(zhì)體藥物載體裝載了抗癌藥物鹽酸阿霉素，將配方量的磷脂、膽固醇和低氧響應(yīng)分子和抗腫瘤藥物溶于有機(jī)溶劑中，室溫下真空旋蒸30分鐘成膜，pH 7.4的磷酸緩沖液水化后即得到裝載鹽酸阿霉素的載藥脂質(zhì)體。

實(shí)施例5

DOX-LPs和DOX-HR-LPs分別在常氧和低氧條件下的體外釋放曲線測(cè)定：

將實(shí)施例4-1制備的DOX-LPs和DOX-HR-LPs用PBS稀釋后密封在石英比色皿中，37℃進(jìn)行阿霉素的體外釋放實(shí)驗(yàn)，其中低氧組加入大鼠肝微粒體(100μg/ml)和NADPH(100μM)，常氧組只加NADPH。比色皿中阿霉素的濃度用熒光分光光度法測(cè)定。結(jié)果如圖4所示，DOX-HR-LPs在低氧條件下37℃，pH 7.4左右12h釋放了60％左右的阿霉素，而常氧常氧條件下只有30％左右的阿霉素釋放，DOX-LPs在常氧和低氧條件下的釋放量均很少，不足30％。說(shuō)明DOX-HR-LPs在低氧條件下可以加速藥物的釋放，傳統(tǒng)阿霉素脂質(zhì)體DOX-LPs在低氧和常氧條件下均難以釋放藥物。

實(shí)施例6

DOX-HR-LPs在低氧和常氧細(xì)胞內(nèi)的藥物釋放行為觀察，通過(guò)觀察DOX的細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度來(lái)判斷DOX的細(xì)胞內(nèi)釋放速度。

鼠源前列腺癌細(xì)胞(RM-1)購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所。具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下：將RM-1細(xì)胞以合適密度接種于玻璃底細(xì)胞培養(yǎng)皿中，生長(zhǎng)24h貼壁，用含有實(shí)施例4-1制備的DOX-HR-LPs(DOX 10μg/ml)的培養(yǎng)液處理細(xì)胞2h后吸去含藥培養(yǎng)液，PBS洗三遍后加培養(yǎng)液，在細(xì)胞表面加蓋玻片形成低氧環(huán)境，3h后在萊卡SP8激光共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)的DOX熒光強(qiáng)度。結(jié)果如圖5所示，選取通過(guò)蓋玻片中心的區(qū)域，拼圖觀察(圖5A)和局部觀察(圖5C)，以及專業(yè)圖像分析軟件Image-Pro Plus對(duì)熒光強(qiáng)度的分析(圖5B)，從蓋玻片外到中心，細(xì)胞內(nèi)的阿霉素?zé)晒鈴?qiáng)度在逐漸增強(qiáng)，說(shuō)明從蓋玻片外到中心，隨著氧濃度的降低，DOX-HR-LPs在細(xì)胞內(nèi)釋放DOX的速度逐漸提高。在低氧嚴(yán)重的中心部位，細(xì)胞內(nèi)的熒光強(qiáng)度最大，釋放的速度最快。

實(shí)施例7

DOX-HR-LPs和DOX-LPs以及DOX在C57BL/6實(shí)體瘤模型小鼠上的治療效果結(jié)果。

具體實(shí)施過(guò)程如下：在皮下注射接種RM-1細(xì)胞后，待腫瘤體積生長(zhǎng)至大約50mm³，將實(shí)體瘤模型小鼠隨機(jī)分為四組(n＝6)，分別尾靜脈注射PBS、DOX、以及實(shí)施例4-1制備的DOX-LPs和DOX-HR-LPs(DOX劑量5mg/kg)，第一次給藥記為第0天，第5天第二次給藥，每3天測(cè)量腫瘤體積、小鼠體重至第18天。

結(jié)果如圖6所示，圖6A為4個(gè)處理組小鼠的體重變化情況，PBS組小鼠的體重一直升高，是由于腫瘤的飛速生長(zhǎng)，DOX組在給藥期間體重明顯下降，是由于DOX嚴(yán)重的系統(tǒng)毒性導(dǎo)致的，相對(duì)于其他三組，DOX-HR-LPs組的體重最穩(wěn)定，說(shuō)明DOX-HR-LPs低的毒副作用。圖6B為四個(gè)處理組小鼠的生存曲線，PBS、DOX、DOX-LPs以及DOX-HR-LPs的評(píng)價(jià)生存時(shí)間分別為16天、20天、25天和34天，DOX-HR-LPs可以顯著延長(zhǎng)小鼠的生存時(shí)間，說(shuō)明治療效果最好，DOX-LPs對(duì)治療效果的提升有限，主要作用在于降低毒副作用。

本發(fā)明提供了一種低氧響應(yīng)脂質(zhì)體藥物載體的思路及方法，具體實(shí)現(xiàn)該技術(shù)方案的方法和途徑很多，以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。本實(shí)施例中未明確的各組成部分均可用現(xiàn)有技術(shù)加以實(shí)現(xiàn)。