本發(fā)明涉及一種藥物脂質(zhì)體/p53基因復合物，更具體地說涉及一種含白藜蘆醇的多肽型陽離子藥物脂質(zhì)體的制備及其在與p53基因形成新型抗腫瘤復合物制劑中的應用，屬于腫瘤治療領域新型藥物制劑及其制備方法與應用。

背景技術：
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藥物和基因的聯(lián)合轉(zhuǎn)運治療是一種利用載體將抗癌藥物和基因高效傳遞到腫瘤細胞當中，適時釋放藥物和基因已達到協(xié)同治療目標的生物醫(yī)學治療方法。目前，聯(lián)合轉(zhuǎn)運治療體系主要包括藥物/藥物、藥物/siRNA、藥物/pDNA等針對各種疾病的治療方法體系。運載藥物與核酸的載體脂質(zhì)體，還包括聚合物膠束和PLGA納米粒子等多聚物載體。在同一載體系統(tǒng)中，聯(lián)合轉(zhuǎn)運藥物和DNA作用于腫瘤細胞比單獨轉(zhuǎn)運DNA或者藥物更有治療效果。因此，制備一種安全高效的復合物載體已經(jīng)成為了近年來研究的重點。

我國具有豐富的藥用植物資源，尤其民族地區(qū)天然植物種類繁多，目前，喜樹堿、紫杉醇、冬凌草類、三尖杉堿類等多種天然抗癌藥物大部分均產(chǎn)自該地區(qū)。天然抗腫瘤藥物研發(fā)及應用以其低毒性、低毒副作用的優(yōu)勢已經(jīng)廣泛應用于癌癥的治療中。白藜蘆醇作為新發(fā)現(xiàn)的一種產(chǎn)自我國民族地區(qū)的天然抗癌藥物，其藥理活性和抗癌機制的研究進展才剛剛起步。目前，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇對乳腺癌、結腸癌、前列腺癌、卵巢癌、皮膚癌、肝癌等多種惡性腫瘤細胞均有明顯的抑制作用。其中，白藜蘆醇對激素依賴性腫瘤細胞的生長具有顯著的抑制作用。從白藜蘆醇的結構上看，其是一種非黃酮類的多酚類物質(zhì)，由于氧化損傷是導致癌癥的重要原因之一，多酚的抗氧化功能可以對癌癥起到預防作用和一定程度上的抑制作用。白藜蘆醇的抗癌機制十分復雜，目前發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇可以通過激活p38MAPK活性，誘導細胞通路中p53蛋白第15位絲氨酸的磷酸化從而激活p53蛋白的活化，磷酸化的p53蛋白可以下調(diào)Bcl-2、Bax等凋亡蛋白的表達，Bax蛋白能開啟線粒體膜通道，細胞色素c和其他凋亡前體蛋白就能從線粒體中釋放出來，caspase活化，起始凋亡。然而，白藜蘆醇在光、熱和氧化劑存在條件下容易被氧化分解，在一定程度上限制了其在食品和醫(yī)藥行業(yè)的應用。

隨著分子生物學的發(fā)展，人們從腫瘤致病的分子水平上獲知，癌癥實際上就是一種基因病，要么是抑癌基因的失活，要么是原癌基因被異常激活。目前，主要的抑癌基因包括Rb基因、p53基因、WT1基因、DCC基因、APC基因、NF1基因、MTS1基因、WAF1基因、BRCA基因和BRCA2基因等。其中，p53基因在調(diào)節(jié)細胞周期和控制細胞凋亡上發(fā)揮重要作用，有研究表明，P53基因通過表達野生型的p53蛋白起到控制細胞凋亡的作用，已經(jīng)成為了腫瘤方面研究的熱點。

陽離子脂質(zhì)體作為非病毒載體材料能夠有效的保護被包裹的藥物，提高其穩(wěn)定性和生物利用度，并且還具有毒性低、生物相容性高和可生物降解等明顯優(yōu)勢。在藥物和基因聯(lián)合轉(zhuǎn)運方面，Sadd等通過陽離子脂質(zhì)體共載沉默Bcl-2、MDP1、MDR1基因的siRNA和阿霉素(DOX)對肺癌細胞進行治療，并證明了基因與藥物的協(xié)同治療作用；Kang等也同樣通過陽離子脂質(zhì)體共載NIK-siRNA和5-氟尿嘧啶(5-FU)治療肝癌，結果顯示，脂質(zhì)體共載的腫瘤細胞凋亡情況明顯多于單載。陽離子脂質(zhì)體作為藥物載體，同時可以介導基因輸送入細胞，具有獨特的優(yōu)勢和良好的發(fā)展前景。

技術實現(xiàn)要素：

為了解決現(xiàn)有技術中的不足，本發(fā)明提供一種用于腫瘤治療的藥物脂質(zhì)體/基因復合物，該復合物由含白藜蘆醇的藥物脂質(zhì)體和p53基因組成。本發(fā)明還提供該藥物脂質(zhì)體/基因復合物的制備方法。首先以多肽型陽離子類脂、助類脂和白藜蘆醇為主要原料，依次通過薄膜分散法、超聲水化法和凝膠色譜柱分離法，制備藥物脂質(zhì)體，然后將該藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，通過靜電復合的方法制備得到藥物脂質(zhì)體/基因復合物。

本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現(xiàn)的：一種藥物脂質(zhì)體/p53基因復合物，該復合物由藥物脂質(zhì)體和p53基因組成，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比為1:1～16:1。

優(yōu)選的，所述的藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比為2:1～8:1。

所述的藥物脂質(zhì)體的制備方法，具體操作步驟如下：

將多肽型陽離子類脂與白藜蘆醇溶解于有機溶劑中，加入助類脂充分溶解，多肽型陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為5:1:1～200:1:1，溶解后漩渦震蕩1-20秒混合均勻，用惰性氣體吹膜10-60min，于25-120℃真空干燥1-48h，再加入水于25-45℃超聲，配制成濃度為0.5-5mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體。

所述有機溶劑為甲醇、氯仿和乙酸乙酯中的一種或一種以上。

本發(fā)明另一個目的是請求保護藥物脂質(zhì)體/p53基因復合物的制備方法，具體操作步驟如下：

將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，旋渦震蕩1-20秒混合均勻，于20℃-40℃孵育5-60min，通過靜電復合的制備方法得到。

所述的助類脂為DOPE、膽固醇、卵磷脂中的一種或一種以上。

優(yōu)選的，所述的助類脂為DOPE。

優(yōu)選的，所述的多肽型陽離子類脂為CDO12，CDO14，CDO16。

本發(fā)明第三個目的是請求保護藥物脂質(zhì)體/p53基因復合物及上述藥物脂質(zhì)體在制備腫瘤治療藥物中的應用。

本發(fā)明提供的藥物脂質(zhì)體/p53基因復合物通過白藜蘆醇激活p38MAPK激酶活性誘導p53基因活化，使之表達野生型p53蛋白，協(xié)同發(fā)揮白藜蘆醇和p53基因的抗腫瘤作用，引發(fā)腫瘤細胞凋亡，達到腫瘤治療的目的。體外生物學研究表明，該復合物細胞毒性低、野生型p53蛋白表達高，為腫瘤治療提供了新思路，具有極大的臨床應用價值。

附圖說明

圖1為白藜蘆醇脂質(zhì)體的透射電鏡圖，其中(A)為CDO14-RSV20:1，(B)為CDO14-RSV+D 10:1，(C)為CDO14-RSV100:1；

圖2為白藜蘆醇脂質(zhì)體包封率檢測結果；

圖3為白藜蘆醇脂質(zhì)體/P53基因復合物的電泳延滯實驗圖，其中第1泳道均為Marker(λDNA/EcoR I+Hind III Markers)，第2泳道為裸p53基因，第3～9泳道分別為白藜蘆醇脂質(zhì)體與/p53基因復合質(zhì)量比1:1、2:1、3:1、4:1、6:1、8:1；

圖4A為白藜蘆醇脂質(zhì)體/p53基因復合物在Hela細胞中表達效果圖；

圖4B為白藜蘆醇脂質(zhì)體/p53基因復合物在MCF-7細胞中表達效果圖；

圖5A為白藜蘆醇脂質(zhì)體/p53基因復合物誘導Hela細胞凋亡圖；

圖5B為白藜蘆醇脂質(zhì)體/p53基因復合物誘導MCF-7細胞凋亡圖；

圖6A為白藜蘆醇脂質(zhì)體/P53基因復合物對Hela細胞存活率的影響；

圖6B為白藜蘆醇脂質(zhì)體/P53基因復合物對MCF-7細胞存活率的影響。

具體實施方式：

下面通過實施例對本發(fā)明做詳細描述，但不用于限制本發(fā)明的保護范圍，如無特殊說明，本發(fā)明所涉及化學試劑及藥品均市售可得，如無特殊說明，所涉及的方法均為常規(guī)方法。

實施例1

將陽離子類脂CDO14與白藜蘆醇溶解于甲醇和氯仿的有機溶劑中，加入助類脂DOPE充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為5:1:1，之后漩渦震蕩10秒混合均勻，惰性氣體吹膜10min，25℃真空干燥12h，再加入水于25℃超聲，配制為濃度為0.5mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是1:1，旋渦震蕩10秒混合均勻，20℃孵育10min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例2

將陽離子類脂CDO14與白藜蘆醇溶解于甲醇的有機溶劑中，加入助類脂膽固醇充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為10:1:1，之后漩渦震蕩15秒混合均勻，惰性氣體吹膜15min，30℃真空干燥18h，再加入水于30℃超聲，配制為濃度為1.0mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是2:1，旋渦震蕩15秒混合均勻，25℃孵育15min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例3

將陽離子類脂CDO12與白藜蘆醇溶解于乙酸乙酯的有機溶劑中，加入助類脂DOPE充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為20:1:1，之后漩渦震蕩20秒混合均勻，惰性氣體吹膜20min，40℃真空干燥24h，再加入水于35℃超聲，配制為濃度為1.5mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是3:1，旋渦震蕩20秒混合均勻，30℃孵育20min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例4

將陽離子類脂CDO16與白藜蘆醇溶解于乙酸乙酯的有機溶劑中，加入助類脂卵磷脂充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為100:1:1，之后漩渦震蕩5秒混合均勻，惰性氣體吹膜25min，45℃真空干燥30h，再加入水于40℃超聲，配制為濃度為2.0mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是4:1，旋渦震蕩5秒混合均勻，35℃孵育25min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例5

將陽離子類脂CDO16與白藜蘆醇溶解于甲醇的有機溶劑中，加入助類脂膽固醇充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為200:1:1，之后漩渦震蕩12秒混合均勻，惰性氣體吹膜30min，50℃真空干燥36h，再加入水于45℃超聲，配制為濃度為2.5mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是6:1，旋渦震蕩10秒混合均勻，40℃孵育30min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例6

將陽離子類脂CDO14與白藜蘆醇溶解于氯仿的有機溶劑中，加入助類脂卵磷脂充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為5:1:1，之后漩渦震蕩15秒混合均勻，惰性氣體吹膜35min，50℃真空干燥40h，再加入水于30℃超聲，配制為濃度為3.0mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是8:1，旋渦震蕩20秒混合均勻，25℃孵育20min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例7

將陽離子類脂CDO14與白藜蘆醇溶解于氯仿、甲醇和乙酸乙酯的有機溶劑中，加入助類脂卵磷脂充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為10:1:1，之后漩渦震蕩10秒混合均勻，惰性氣體吹膜40min，60℃真空干燥48h，再加入水于40℃超聲，配制為濃度為3.5mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是2:1，旋渦震蕩15秒混合均勻，40℃孵育15min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例8

將陽離子類脂CDO12與白藜蘆醇溶解于乙酸乙酯的有機溶劑中，加入助類脂DOPE充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為100:1:1，之后漩渦震蕩15秒混合均勻，惰性氣體吹膜20min，80℃真空干燥24h，再加入水于45℃超聲，配制為濃度為4.0mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是4:1，旋渦震蕩20秒混合均勻，25℃孵育30min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例9

將陽離子類脂CDO16與白藜蘆醇溶解于甲醇的有機溶劑中，加入助類脂膽固醇充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為20:1:1，之后漩渦震蕩20秒混合均勻，惰性氣體吹膜50min，90℃真空干燥12h，再加入水于25℃超聲，配制為濃度為4.5mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是6:1，旋渦震蕩10秒混合均勻，30℃孵育60min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例10

將陽離子類脂CDO14與白藜蘆醇溶解于甲醇和氯仿的有機溶劑中，加入助類脂DOPE充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為5:1:1，之后漩渦震蕩3秒混合均勻，惰性氣體吹膜60min，100℃真空干燥8h，再加入水于30℃超聲，配制為濃度為5.0mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是8:1，旋渦震蕩20秒混合均勻，40℃孵育20min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例11

將陽離子類脂CDO14與白藜蘆醇溶解于甲醇和乙酸乙酯的有機溶劑中，加入助類脂DOPE充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為100:1:1，之后漩渦震蕩10秒混合均勻，惰性氣體吹膜20min，120℃真空干燥4h，再加入水于25℃超聲，配制為濃度為2.0mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是6:1，旋渦震蕩15秒混合均勻，25℃孵育15min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例12

將陽離子類脂CDO16與白藜蘆醇溶解于氯仿的有機溶劑中，加入助類脂膽固醇充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為200:1:1，之后漩渦震蕩15秒混合均勻，惰性氣體吹膜10min，40℃真空干燥20h，再加入水于30℃超聲，配制為濃度為1.0mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是1:1，旋渦震蕩20秒混合均勻，40℃孵育15min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例13

將陽離子類脂CDO12與白藜蘆醇溶解于氯仿、乙酸乙酯和甲醇的有機溶劑中，加入助類脂卵磷脂充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為10:1:1，之后漩渦震蕩20秒混合均勻，惰性氣體吹膜15min，70℃真空干燥18h，再加入水于40℃超聲，配制為濃度為3.0mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是3:1，旋渦震蕩15秒混合均勻，35℃孵育30min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例14

將陽離子類脂CDO14與白藜蘆醇溶解于氯仿的有機溶劑中，加入助類脂膽固醇充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為20:1:1，之后漩渦震蕩1秒混合均勻，惰性氣體吹膜20min，30℃真空干燥48h，再加入水于25℃超聲，配制為濃度為0.5mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是6:1，旋渦震蕩20秒混合均勻，40℃孵育10min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例15

將陽離子類脂CDO16與白藜蘆醇溶解于甲醇的有機溶劑中，加入助類脂DOPE充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為100:1:1，之后漩渦震蕩10秒混合均勻，惰性氣體吹膜40min，100℃真空干燥3h，再加入水于40℃超聲，配制為濃度為1.5mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是1:1，旋渦震蕩20秒混合均勻，20℃孵育15min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例16

將陽離子類脂CDO12與白藜蘆醇溶解于乙酸乙酯的有機溶劑中，加入助類脂膽固醇充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為5:1:1，之后漩渦震蕩20秒混合均勻，惰性氣體吹膜10min，25℃真空干燥24h，再加入水于45℃超聲，配制為濃度為4.5mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是2:1，旋渦震蕩10秒混合均勻，25℃孵育20min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例17

將陽離子類脂CDO14與白藜蘆醇溶解于乙酸乙酯和甲醇的有機溶劑中，加入助類脂卵磷脂充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為10:1:1，之后漩渦震蕩15秒混合均勻，惰性氣體吹膜20min，30℃真空干燥48h，再加入水于25℃超聲，配制為濃度為2.0mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是3:1，旋渦震蕩20秒混合均勻，40℃孵育5min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例18

將陽離子類脂CDO12與白藜蘆醇溶解于氯仿和甲醇的有機溶劑中，加入助類脂DOPE充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為100:1:1，之后漩渦震蕩20秒混合均勻，惰性氣體吹膜30min，60℃真空干燥12h，再加入水于30℃超聲，配制為濃度為1.0mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是8:1，旋渦震蕩15秒混合均勻，40℃孵育20min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例19

將陽離子類脂CDO16與白藜蘆醇溶解于甲醇和乙酸乙酯的有機溶劑中，加入助類脂DOPE充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為5:1:1，之后漩渦震蕩20秒混合均勻，惰性氣體吹膜20min，30℃真空干燥18h，再加入水于30℃超聲，配制為濃度為5.0mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是2:1，旋渦震蕩20秒混合均勻，30℃孵育10min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例20

將陽離子類脂CDO12與白藜蘆醇溶解于氯仿的有機溶劑中，加入助類脂膽固醇充分溶解，陽離子類脂、白藜蘆醇與助類脂的質(zhì)量比為10:1:1，之后漩渦震蕩10秒混合均勻，惰性氣體吹膜40min，55℃真空干燥20h，再加入水于35℃超聲，配制為濃度為1.0mg/mL的水溶液，離心后經(jīng)葡聚糖凝膠柱分離，得到藥物脂質(zhì)體，然后將藥物脂質(zhì)體與p53基因混合，藥物脂質(zhì)體與p53基因的質(zhì)量比是3:1，旋渦震蕩20秒混合均勻，20℃孵育30min，通過靜電復合的制備方法得到。

實施例21

本發(fā)明選擇子宮頸癌細胞Hela細胞和乳腺癌細胞MCF-7細胞為研究對象，將編碼綠色熒光蛋白基因的質(zhì)粒與藥物脂質(zhì)體復合，利用倒置熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白的表達情況，可直接反映出復合物是否成功進入細胞并表達的效果。

從圖4中可知，Hela細胞和MCF-7細胞中的綠色熒光蛋白表達水平較高，說明本發(fā)明的復合物能夠成功的被細胞攝入并在細胞中高表達，具有進一步研究和開發(fā)的應用價值。

實施例22

Hoechst 33342是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低，本發(fā)明使用子宮頸癌細胞Hela細胞和乳腺癌細胞MCF-7細胞為主要細胞株，利用Hoechst33342對細胞分別進行染色，通過倒置熒光顯微鏡觀察Hoechst33342染色后熒光強度并觀察細胞形態(tài)和細胞核的狀態(tài)，進而反應出復合物對細胞凋亡的影響。

從圖5中可知，細胞在倒置熒光顯微鏡下呈亮藍色熒光，熒光強度較強，并且細胞有點發(fā)暗，只呈部分伸展，有部分漂浮細胞，貼壁細胞形態(tài)不均一，細胞密度較低，細胞體積變圓變小并變形，細胞邊緣模糊，仔細觀察細胞核的狀態(tài)，細胞核皺縮發(fā)暗，出現(xiàn)明顯凋亡后期的主要標志性特征，說明本發(fā)明的藥物脂質(zhì)體/基因復合物具有促進Hela細胞和MCF-7細胞凋亡的作用。

實施例23

活細胞的線粒體中含有琥珀酸脫氫酶，而死細胞中沒有，MTT能夠被活細胞中的琥珀酸脫氫酶還原生成水不溶性的藍紫色甲瓚，本發(fā)明利用這一性質(zhì)，用MTT對Hela細胞和MCF-7細胞分別染色，用酶標儀檢測，可間接反映活細胞相對于死細胞的數(shù)量，進而判斷出復合物對腫瘤細胞的增殖抑制能力。

從圖6中可知，白藜蘆醇脂質(zhì)體隨著與p53基因復合比例的增大，細胞存活率逐漸降低，并且在藥物脂質(zhì)體與p53基因質(zhì)量比為8/1時，細胞存活率最低。其次，加入CDO14空白脂質(zhì)體的細胞存活率高于藥物脂質(zhì)體，加入藥物脂質(zhì)體的細胞存活率高于復合物。然后，空白脂質(zhì)體在脂質(zhì)體與p53基因復合的1/1～8/1的比例中，細胞存活率均高于90％，且與商品化試劑Lipofectamine 2000和DOTAP相比，空白脂質(zhì)體毒性相當，甚至更低，說明本發(fā)明的復合物對MCF-7細胞和Hela細胞均具有一定細胞增殖抑制能力。