本發(fā)明屬于生物，特別涉及mir-497a-5p抑制劑在制備預(yù)防或治療肝臟疾病的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、非酒精性脂肪肝病(nafld)是一種以肝細(xì)胞脂肪變性和脂質(zhì)貯積為特征的臨床病理綜合征(nat.rev.drug.discov.2016,15,249)。非酒精性脂肪性肝病(nafld)的疾病譜包括：非酒精性單純性脂肪肝(nafl)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)及nash誘發(fā)的肝硬化(science?2011，332,1519)。公認(rèn)的病理機(jī)制是“二次打擊”假說(j.gastroenterol.hepatol.2013,28(si?1),68)：“第一次打擊”是肝臟脂肪堆積和胰島素抵抗；“第二次打擊”是肝臟脂肪堆積引發(fā)的氧化應(yīng)激和炎性細(xì)胞因子的過度釋放，導(dǎo)致肝臟炎癥和肝纖維化，進(jìn)而導(dǎo)致肝硬化和肝癌。目前，針對(duì)nash尚無有效的臨床治療手段(med.res.rev.2019,39,328)。

2、原發(fā)性膽汁性膽管炎(pbc)和原發(fā)性硬化性膽管炎(psc)是目前臨床常見的兩大膽汁淤積性肝病。其中，pbc以肝內(nèi)膽汁淤積、循環(huán)血液中出現(xiàn)抗線粒體抗體和肝內(nèi)小膽管進(jìn)行性、非化膿性炎癥性破壞，最終導(dǎo)致廣泛性肝管破壞、膽汁性肝硬化甚至肝衰竭為顯著特征。目前，已批準(zhǔn)上市的治療pbc的藥物主要包括熊去氧膽酸、奧貝膽酸、糖皮質(zhì)激素和環(huán)孢素等，然而，上述藥物的有效性和安全性都存在問題。psc也是一種慢性膽汁淤積性疾病，其特征為肝內(nèi)外膽管進(jìn)行性炎癥和纖維化，進(jìn)而導(dǎo)致多灶性膽管狹窄。大多數(shù)患者最終發(fā)展為肝硬化、門靜脈高壓和肝功能失代償。psc的確切病理機(jī)制不明，并且針對(duì)psc尚無有效的治療藥物。

3、酒精性脂肪性肝病(afld)是由于長(zhǎng)期大量飲酒導(dǎo)致的肝臟疾病，是酒精性肝病中的一個(gè)分型?；颊哂虚L(zhǎng)期飲酒史，一般超過5年。臨床癥狀為非特異性，可無癥狀，或有右上腹脹痛、食欲不振、乏力、體重減輕等。目前，針對(duì)afld尚無有效的治療藥物。

4、肝纖維化是指由各種致病因子所致肝內(nèi)結(jié)締組織異常增生。任何肝臟損傷在肝臟修復(fù)愈合的過程中都有肝纖維化的過程，如果損傷因素長(zhǎng)期不能去除，纖維化的過程長(zhǎng)期持續(xù)就會(huì)發(fā)展成肝硬化。目前，針對(duì)肝纖維化和肝硬化均無有效的治療手段，主要的防治方法在于早期發(fā)現(xiàn)和阻止病程進(jìn)展，尤其是要防治肝硬化的并發(fā)癥。

5、mirna作為一類長(zhǎng)約22個(gè)核苷酸的非編碼小分子rna，廣泛存在于真核生物中。其通過與靶mrna3’-utr互補(bǔ)配對(duì)，降解mrna或阻遏基因翻譯，從而對(duì)基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控發(fā)揮重要的作用。mirna在生命活動(dòng)中具有廣泛的調(diào)節(jié)功能，與生物的發(fā)育進(jìn)程、細(xì)胞生長(zhǎng)分化、凋亡和器官形成等生命活動(dòng)過程密切相關(guān)。近年來，越來越多的mirna被報(bào)道與nash、pbc、psc和肝纖維化等肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)(gut?2021,70:784；curr.proteinpept.sc.2022,23:369)。

6、mir-497a-5p是一種生物功能仍有待明確的mirna。mir-497a-5p被報(bào)道與小膠質(zhì)細(xì)胞活化引起的神經(jīng)炎癥相關(guān)，且其抑制劑可以減輕lps誘導(dǎo)的bv2細(xì)胞的炎癥反應(yīng)(brainbehav.2023，doi：10.1002/brb3.2935)。據(jù)報(bào)道，二甲雙胍可以通過上調(diào)mir-497a-5p來抑制vegf-a的表達(dá)，從而減緩糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生(am.j.transl.res.2018,9:5558)。mir-497a-5p還被報(bào)道可以通過調(diào)控irak2的表達(dá)來減輕lps誘導(dǎo)的急性肺損傷(j.cell.physiol.2019,234:22874)。然而，mir-497a-5p在上述肝臟疾病中功能及其應(yīng)用尚不明確。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

0、
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

1、發(fā)明目的：為解決現(xiàn)有防治肝臟疾病的臨床治療手段的缺陷和不足，本發(fā)明在揭示mir-497a-5p的表達(dá)與肝臟疾病之間相互關(guān)系的基礎(chǔ)上，提供一種mir-497a-5p抑制劑在制備預(yù)防或治療肝臟疾病的藥物中的用途，即一種用于預(yù)防或治療肝臟疾病的mir-497a-5p抑制劑的用途，進(jìn)而把mir-497a-5p抑制劑應(yīng)用于肝臟疾病的預(yù)防或治療中。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)mir-497a-5p抑制劑在預(yù)防或治療肝臟疾病方面顯著效果，因此，mir-497a-5p抑制劑為有效成分，在制備預(yù)防或治療肝臟疾病藥物或者試劑方面具有重要的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)意義。

2、技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所述mir-497a-5p抑制劑在制備預(yù)防或治療肝臟疾病的藥物中的用途，所述mir-497a-5p的序列(rna)為：cagcagcacacugugguuugu。

3、其中，所述抑制劑包括特異性敲除mir-497a-5p基因的基因編輯試劑、特異性干擾mir-497a-5p基因表達(dá)的干擾分子、特異性抑制mir-497a-5p基因表達(dá)蛋白的小分子化合物、特異性與mir-497a-5p基因表達(dá)蛋白/結(jié)合的抗體或配體、或者特異性與靶向mir-497a-5p基因的多肽結(jié)合的抗體或配體。

4、其中，所述抑制劑選自能降低mir-497a-5p表達(dá)或活性的核酸制品，包括小干擾rna、dsrna、shrna、微小rna、反義核苷酸；或者能表達(dá)或形成所述小干擾rna、dsrna、shrna、微小rna、反義核苷酸的構(gòu)建物；所述小干擾rna、dsrna、shrna、微小rna、反義核苷酸可以被甲基化修飾、硫代修飾和膽固醇修飾。

5、進(jìn)一步地，所述抑制劑為攜帶mir-497a-5p?sponge的腺相關(guān)病毒，mir-497a-5psponge中包含有一個(gè)或多個(gè)拮抗序列。

6、進(jìn)一步地，所述mir-497a-5p抑制劑包括至少一條拮抗序列(rna)：acaaaccacagugugcugcug，優(yōu)選可以攜帶四條重復(fù)的上述拮抗序列。

7、作為優(yōu)選，所述mir-497a-5p抑制劑為aav8-mir497a-5p?sponge，其中含有一條到四個(gè)相同重復(fù)拮抗序列acaaaccacagugugcugcug。

8、其中，所述肝臟疾病包括非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、原發(fā)性膽汁性膽管炎(pbc)、原發(fā)性硬化性膽管炎(psc)、酒精性脂肪性肝病(afld)、肝纖維化或肝硬化。

9、本發(fā)明所述預(yù)防或治療肝臟疾病的藥物，包括mir-497a-5p抑制劑和包裹所述抑制劑的藥物載體。

10、其中，所述藥物載體可以為類脂質(zhì)、脂質(zhì)體、脂質(zhì)復(fù)合物、脂質(zhì)納米顆粒、聚合化合物、肽、蛋白質(zhì)、細(xì)胞、納米顆粒模擬物、納米管或綴合物。

11、本發(fā)明所述mir-497a-5p基因或靶向mir-497a-5p基因的多肽作為調(diào)控靶點(diǎn)或者調(diào)控標(biāo)志物在預(yù)防或治療肝臟疾病的藥物中的用途。

12、其中，所述肝臟疾病包括非酒精性脂肪性肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、原發(fā)性膽汁性膽管炎(pbc)、原發(fā)性硬化性膽管炎(psc)、酒精性脂肪性肝病(afld)、肝纖維化或肝硬化。

13、本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)在多種nash疾病動(dòng)物模型肝臟中，mir-497a-5p表達(dá)水平異常升高。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，給予nash模型小鼠mir-497a-5p抑制劑則可以有效逆轉(zhuǎn)肝臟脂質(zhì)堆積、炎癥反應(yīng)和纖維化，并改善肝臟功能。在作用機(jī)制方面，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，mir-497a-5p可以通過干預(yù)errα的mrna翻譯，從而降低nash模型小鼠肝臟中的errα蛋白水平。而errα蛋白水平的下調(diào)被報(bào)道與多種肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)(cn113117097a)。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，給予mir-497a-5p抑制劑則可以有效逆轉(zhuǎn)nash模型小鼠肝臟中的errα蛋白水平下調(diào)，從而發(fā)揮治療作用?？傊?，mir-497a-5p抑制劑可通過逆轉(zhuǎn)errα蛋白水平的下調(diào)而防治各種肝臟疾病。

14、有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：

15、本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)mir-497a-5p抑制劑在預(yù)防或治療肝臟疾病方面效果顯著，主要體現(xiàn)在：通過給予mir-497a-5p抑制劑，可降低肝臟的脂質(zhì)堆積，改善肝臟損傷，并減少肝臟炎癥反應(yīng)和纖維化，因而可用于防治各種肝臟疾病。

16、在作用機(jī)制方面，

17、本發(fā)明提供了一種mir-497a-5p基因作為肝臟疾病干預(yù)新靶點(diǎn)，使得本發(fā)明合成的mir-497a-5p抑制劑可以應(yīng)用在制備預(yù)防或治療肝臟疾病的藥物中，mir-497a-5p抑制劑可以通過抑制mir-497a-5p來上調(diào)errα的蛋白水平，從而發(fā)揮調(diào)控線粒體合成、氧化代謝、炎癥免疫、細(xì)胞自噬等生物學(xué)效應(yīng)，最終改善各種肝臟疾病的病理特征。而包括本發(fā)明mir-497a-5p抑制劑的藥物組合物可以成為新型的預(yù)防和/或治療肝臟腎病的藥物。