本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體是涉及一種靶向中性粒細(xì)胞的納米藥物遞送系統(tǒng)及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、中性粒細(xì)胞可響應(yīng)趨化因子的誘導(dǎo)遷移至感染部位，并釋放由組蛋白、顆粒蛋白、彈性蛋白酶、髓過氧化物酶、dna等組成的胞外誘捕網(wǎng)(neutrophil?extracellular?traps，nets)捕獲并清除入侵機(jī)體的病原體，然而在嚴(yán)重感染性疾病如膿毒癥中由于細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外病原體的持續(xù)刺激會導(dǎo)致中性粒細(xì)胞表面趨化因子受體cxcr2內(nèi)化，減弱其病灶趨化能力。此外nets的殺菌作用存在不足，部分病原體可通過形成核酸酶降解nets，從而逃脫nets的捕獲與殺傷，僅靠nets難以達(dá)到抗感染需求。

2、目前，基于中性粒細(xì)胞對病灶區(qū)域的天然趨向性設(shè)計的納米藥物被廣泛研究。利用中性粒細(xì)胞運(yùn)輸納米藥物一般基于兩種不同的策略，第一種為在體外讓提取出的中性粒細(xì)胞負(fù)載納米藥物，由于中性粒細(xì)胞壽命短，復(fù)雜的操作會嚴(yán)重影響中性粒細(xì)胞的活力，且存在體外污染的風(fēng)險，因此該策略可行性低；第二種策略為讓納米藥物在體循環(huán)中劫持中性粒細(xì)胞，該策略規(guī)避了第一種策略的缺陷，然而需要納米顆粒具有能高效與中性粒細(xì)胞結(jié)合的能力。此外，由于在嚴(yán)重感染時中性粒細(xì)胞無法響應(yīng)趨化因子遷移至感染部位，病原體無法被清除而迅速傳播導(dǎo)致病情加重，因此對于中性粒細(xì)胞病灶趨化性的“再教育”措施對相關(guān)疾病的治療至關(guān)重要，目前的主要措施為針對中性粒細(xì)胞表面趨化因子受體cxcr2的內(nèi)化相關(guān)信號通路進(jìn)行干預(yù)。相關(guān)研究表明，中性粒細(xì)胞nets可將中性粒細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)的藥物釋放至胞外，如釋放中性粒細(xì)胞自身含有的抗菌肽以清除胞外病原體；或是nets被巨噬細(xì)胞識別并吞噬，清除巨噬細(xì)胞胞內(nèi)寄生菌。

3、目前，開發(fā)一種真正能有效恢復(fù)中性粒細(xì)胞感染部位趨化性并增強(qiáng)nets的抗菌性，從而有效清除胞內(nèi)及胞外病原體的藥物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于此，本發(fā)明的目的是提供一種靶向中性粒細(xì)胞的納米藥物遞送系統(tǒng)，所述納米藥物遞送系統(tǒng)既能劫持與教育中性粒細(xì)胞恢復(fù)其對感染部位的趨化性，又能增強(qiáng)中性粒細(xì)胞nets抗胞內(nèi)外菌的效果，達(dá)到更好的治療效果。

2、本發(fā)明的第一個方面，是提供一種靶向中性粒細(xì)胞的納米藥物遞送系統(tǒng)的制備方法，包括以下步驟：

3、s1、將卵磷脂、膽固醇、聚(2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰膽堿)修飾的脂肪胺、組氨酸修飾的脂肪胺、配體或受體加入有機(jī)溶劑1中，制備成脂質(zhì)體1；邊攪拌邊將包含藥物1的溶液滴入所述脂質(zhì)體1中，獲得包裹藥物1的脂質(zhì)體1；所述藥物1為抗炎藥物；

4、s2、將卵磷脂、膽固醇、二油酰磷脂酰乙醇胺、藥物2、與步驟s1中加入的配體或受體相對應(yīng)的受體或者配體加入有機(jī)溶劑2中，制備成脂質(zhì)體2；將所述脂質(zhì)體2與血小板膜混合，制備獲得包裹藥物2的脂質(zhì)體2；所述藥物2為誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞向感染部位趨化的藥物；

5、s3、將所述包裹藥物1的脂質(zhì)體1和包裹藥物2的脂質(zhì)體2混合孵育，脂質(zhì)體1和脂質(zhì)體2中的相對應(yīng)的配體和受體相連接，即得；

6、所述配體和受體分別為生物素和鏈霉親和素。

7、在其中一些實(shí)施例中，步驟s1中加入鏈霉親和素，步驟s2中加入生物素。

8、在其中一些實(shí)施例中，步驟s1中卵磷脂與鏈霉親和素的質(zhì)量比為(150～200)：(0.5～3)，優(yōu)選為150：(0.5～3)，更優(yōu)選為150：(0.5～1.5)。

9、在其中一些實(shí)施例中，步驟s2中卵磷脂與生物素的質(zhì)量比為(75～100)：(1～5)，優(yōu)選為75：(1～5)，更優(yōu)選為75：(1～3)。

10、在其中一些實(shí)施例中，所述藥物1選自衣康酸、抗生素中的至少一種；所述藥物2選自grk2抑制劑、erk抑制劑中的至少一種。

11、在其中一些實(shí)施例中，所述藥物1為衣康酸，藥物2為非諾貝特。

12、在其中一些實(shí)施例中，步驟s1中卵磷脂與衣康酸的質(zhì)量比為(150～200)∶(9～45)，優(yōu)選為150∶(15～45)，更優(yōu)選為150∶(30～45)。

13、在其中一些實(shí)施例中，步驟s2中卵磷脂與非諾貝特的質(zhì)量比為(75～100)：(20～30)，優(yōu)選為75：(20～30)。

14、在其中一些實(shí)施例中，步驟s3中按所述藥物1和藥物2的質(zhì)量比為(6～30)：(20～30)取所述包裹藥物1的脂質(zhì)體1和包裹藥物2的脂質(zhì)體2進(jìn)行混合孵育。

15、在其中一些實(shí)施例中，所述聚(2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰膽堿)修飾的脂肪胺選自聚(2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰膽堿)修飾的十八胺、聚(2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰膽堿)修飾的硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚(2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰膽堿)修飾的氫化大豆磷脂酰膽堿、聚(2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰膽堿)修飾的二棕櫚酰磷脂酰膽堿。

16、在其中一些實(shí)施例中，所述組氨酸修飾的脂肪胺選自組氨酸修飾的十八胺、組氨酸修飾的硬脂酰磷脂酰乙醇胺、組氨酸修飾的氫化大豆磷脂酰膽堿、組氨酸修飾的二棕櫚酰磷脂酰膽堿。

17、在其中一些實(shí)施例中，所述聚(2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰膽堿)修飾的脂肪胺選自聚(2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰膽堿)修飾的十八胺，組氨酸修飾的脂肪胺選自組氨酸修飾的十八胺。

18、在其中一些實(shí)施例中，步驟s1中卵磷脂、膽固醇、聚(2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酰膽堿)修飾的十八胺、組氨酸修飾的十八胺的質(zhì)量比為(150～200)：50：(10～20)：(10～20)。

19、在其中一些實(shí)施例中，步驟s2中卵磷脂、膽固醇、二油酰磷脂酰乙醇胺的質(zhì)量比為(75～100)：25：(10～20)。

20、在其中一些實(shí)施例中，步驟s2中卵磷脂與血小板膜總蛋白的質(zhì)量比為1：(50～500)，優(yōu)選為1：(50～250)，更優(yōu)選為1：(50～100)。

21、本發(fā)明的第二個方面，是提供一種靶向中性粒細(xì)胞的納米藥物遞送系統(tǒng)，由如上所述制備方法制備獲得。

22、本發(fā)明的第三個方面，是提供如上所述的靶向中性粒細(xì)胞的納米藥物遞送系統(tǒng)在制備抗感染藥物中的應(yīng)用。

23、本發(fā)明的第四個方面，是提供一種抗感染藥物，包括活性成分和藥物學(xué)上可接受的載體；所述活性成分包括如上所述的靶向中性粒細(xì)胞的納米藥物遞送系統(tǒng)。

24、本發(fā)明提供了一種靶向中性粒細(xì)胞的納米藥物遞送系統(tǒng)，將兩種不同功能的藥物脂質(zhì)體(包裹藥物1的脂質(zhì)體1和包裹藥物2的脂質(zhì)體2)成功地通過配體和受體系統(tǒng)連接獲得所述納米藥物遞送系統(tǒng)。其中，包裹藥物2的脂質(zhì)體2雜化了血小板膜，可使所述納米藥物遞送系統(tǒng)被中性粒細(xì)胞識別并吞噬進(jìn)入中性粒細(xì)胞內(nèi)。所述納米藥物遞送系統(tǒng)內(nèi)吞進(jìn)入中性粒細(xì)胞后，包裹藥物2的脂質(zhì)體2在溶酶體的酸性環(huán)境下可與中性粒細(xì)胞溶酶體膜融合，釋放藥物2，增強(qiáng)中性粒細(xì)胞的病灶趨化性；而包裹藥物1的脂質(zhì)體1能以完整的形態(tài)進(jìn)入到中性粒細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，被中性粒細(xì)胞遞送至感染部位并通過nets釋放，增強(qiáng)nets的胞內(nèi)及胞外抗菌效果。并且，藥物1的釋放又進(jìn)一步激活了機(jī)體天然免疫系統(tǒng)，從而進(jìn)一步增強(qiáng)中性粒細(xì)胞向感染部位的趨化性。

25、本發(fā)明通過配體和受體連接系統(tǒng)成功制備了包含兩種不同功能藥物脂質(zhì)體的納米藥物遞送系統(tǒng)。并且，發(fā)明人經(jīng)過大量的實(shí)驗和研究發(fā)現(xiàn)，脂質(zhì)體的卵磷脂與配體、受體的質(zhì)量比對兩種藥物脂質(zhì)體能通過配體和受體高效地、成功地連接，以及連接后獲得的納米藥物遞送系統(tǒng)的穩(wěn)定性具有很重要的影響，并篩選獲得了卵磷脂與配體和受體的合適質(zhì)量比，保證所述納米藥物遞送系統(tǒng)的成功制備和在體內(nèi)發(fā)揮療效。進(jìn)一步地，藥物1和藥物2的比例對于所述納米藥物遞送系統(tǒng)的抗感染效果具有明顯的影響，所述納米藥物遞送系統(tǒng)上藥物1和藥物2的合適的質(zhì)量比可以同時增強(qiáng)中性粒細(xì)胞向感染部位的趨化性和殺菌性能，從而使得本發(fā)明納米藥物遞送系統(tǒng)具有非常好的抗感染效果。