一種陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物載體領(lǐng)域，具體涉及一種陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來(lái)，聚合物納米顆粒和納米脂質(zhì)體為代表的兩類主流納米載體能高效包裹和傳輸藥物，已成為各國(guó)科學(xué)家的研宄熱點(diǎn)。聚合物納米顆粒的藥物包封能力強(qiáng)、細(xì)胞內(nèi)吞效率高、體內(nèi)循環(huán)時(shí)間長(zhǎng)。納米脂質(zhì)體具備生物安全性優(yōu)良、傳輸能力高效、制備工藝簡(jiǎn)單等特性。結(jié)合聚合物和磷脂各自的優(yōu)勢(shì)制備出的磷脂-聚合物納米顆粒已廣泛應(yīng)用于藥物的傳遞。
[0003]基因治療為一些長(zhǎng)期困擾人類的重大疾病，如惡性腫瘤、遺傳病、感染性疾病的有效預(yù)防和治療帶來(lái)了希望，然而，將親水性的大分子質(zhì)粒DNA卻難以被疏水性的磷脂-聚合物材料負(fù)載。因此，有必要提供一種能夠有效負(fù)載大分子質(zhì)粒DNA的載體。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒，所述陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒中含有陽(yáng)離子脂質(zhì)體，可以吸附帶負(fù)電荷的DNA，解決了現(xiàn)有技術(shù)中磷脂-聚合物納米顆粒難以負(fù)載大分子質(zhì)粒DNA的問(wèn)題；本發(fā)明還提供了一種陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的制備方法，制備方法工藝簡(jiǎn)單，易于操作，可以進(jìn)行大規(guī)模制備。
[0005]本發(fā)明第一方面提供了一種陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒，包括內(nèi)核和外殼，所述內(nèi)核為聚合物，所述外殼為陽(yáng)離子脂質(zhì)體和磷脂，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體和所述磷脂包覆于所述聚合物表面，所述聚合物為聚乙交酯丙交酯(PLGA)或聚乳酸(PLA)。
[0006]優(yōu)選地，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體和所述磷脂通過(guò)物理作用結(jié)合在一起形成所述外殼。
[0007]所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體和所述磷脂均包括一個(gè)親水性頭部和兩個(gè)疏水性尾部，當(dāng)所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體和所述磷脂處于水性環(huán)境時(shí)，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體和所述磷脂結(jié)合在一起形成親水性頭部均朝向水環(huán)境、疏水性尾部均朝向內(nèi)核的外殼。
[0008]優(yōu)選地，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體與所述聚合物的質(zhì)量比為0.6-1:1，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體與所述磷脂的質(zhì)量比為3-5:1。
[0009]優(yōu)選地，所述聚合物的分子量為5000-15000。
[0010]優(yōu)選地，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體為1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)、雙油基雙甲基氯化銨、雙十八烷基二甲基溴化銨、1，2- 二油?；?3- 二甲基丙二醇胺、N-(N’，N’ - 二甲氨基乙基)氨甲?；?膽固醇、N, N- 二甲基-N-羥乙基-N-(l，2-雙十四烷氧基)丙基溴化銨、1，2- 二亞油氧基-N，N- 二甲基丙胺、1，2- 二亞麻氧基-N，N- 二甲基丙胺、二硬脂基二甲基銨鹽、脂精胺GL-53和脂精胺GL-89中的至少一種。
[0011]優(yōu)選地，所述磷脂為大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺中的至少一種。
[0012]優(yōu)選地，所述磷脂-聚合物納米顆粒的粒徑為20-300nm。
[0013]所述聚合物的細(xì)胞內(nèi)吞效率高，包封能力強(qiáng)，同時(shí)具有良好的生物相容性和生物降解性，降解產(chǎn)物能通過(guò)人體正常新陳代謝排出體外，毒性低，原料廉價(jià)。
[0014]所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體帶有正電荷，可以吸附負(fù)電荷的DNA，同時(shí)所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體生物相容性好。
[0015]所述磷脂可以延長(zhǎng)納米顆粒在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，提高所述納米顆粒的穩(wěn)定性。
[0016]所述陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒結(jié)合了聚合物和磷脂的優(yōu)勢(shì)，同時(shí)所述陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒中的陽(yáng)離子脂質(zhì)體可以通過(guò)電荷吸引力的作用吸附負(fù)電荷的DNA，從而可以負(fù)載DNA進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，解決了現(xiàn)有技術(shù)中磷脂-聚合物納米顆粒難以負(fù)載大分子質(zhì)粒DNA的問(wèn)題。
[0017]本發(fā)明第一方面提供的陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒可以負(fù)載DNA進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，顆粒粒徑均一、性質(zhì)穩(wěn)定。
[0018]本發(fā)明第二方面提供了一種陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的制備方法，包括以下步驟:
[0019](I)將陽(yáng)離子脂質(zhì)體和磷脂溶解于溶劑中，得到混合溶液，在60°C -90°C下，壓力在500-1400bar的條件下，將所述混合溶液進(jìn)行初步乳化l_5min，得到乳化液；
[0020](2)向所述乳化液中滴加聚合物溶液，在60°C -90°C下，壓力在500-1400bar的條件下，繼續(xù)乳化4-6min，形成含有陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的溶液，即得所述陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒；所述陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒包括內(nèi)核和外殼，所述內(nèi)核為聚合物，所述外殼為陽(yáng)離子脂質(zhì)體和磷脂，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體和所述磷脂包覆于所述聚合物表面，所述聚合物為聚乙交酯丙交酯(PLGA)或聚乳酸(PLA)。
[0021]優(yōu)選地，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體與所述聚合物的質(zhì)量比為0.6:1-1，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體與所述磷脂的質(zhì)量比為3-5:1。
[0022]優(yōu)選地，所述聚合物的分子量為5000-15000。
[0023]優(yōu)選地，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體為1，2-二油?；?3-三甲基銨丙烷(DOTAP)、雙油基雙甲基氯化銨、雙十八烷基二甲基溴化銨、1，2- 二油?；?3- 二甲基丙二醇胺、N-(N’，N’ - 二甲氨基乙基)氨甲?；?膽固醇、N, N- 二甲基-N-羥乙基-N-(l，2-雙十四烷氧基)丙基溴化銨、1，2- 二亞油氧基-N，N- 二甲基丙胺、1，2- 二亞麻氧基-N，N- 二甲基丙胺、二硬脂基二甲基銨鹽、脂精胺GL-53和脂精胺GL-89中的至少一種。
[0024]優(yōu)選地，所述磷脂為大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺中的至少一種。
[0025]優(yōu)選地，所述溶劑為質(zhì)量濃度為4%的乙醇水溶液。
[0026]優(yōu)選地，所述混合溶液中，所述磷脂的濃度為0.05mg/mL，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體的濃度為 0.15-0.25mg/mL。
[0027]優(yōu)選地，將所述聚合物溶解于乙氰或丙酮中得到所述聚合物溶液。
[0028]優(yōu)選地，所述聚合物溶液的濃度為0.8-1.5mg/mL。
[0029]優(yōu)選地，所述含有陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的溶液的體積為lOOmL-lOOOmL。
[0030]優(yōu)選地，所述陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的粒徑為20-300nm。
[0031]本發(fā)明第二方面提供的一種陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的制備方法，采用一步高壓勻漿法制備陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒，操作簡(jiǎn)單，能夠制備大劑量的陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒，為該納米顆粒的放大生產(chǎn)和臨床研宄提供基礎(chǔ)，該制備方法簡(jiǎn)便易行，便于推廣。
[0032]綜上，本發(fā)明提供的一種陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒及其制備方法的有益效果包括以下幾個(gè)方面:
[0033]1、本發(fā)明提供的一步高壓勻漿法能夠制備大劑量的陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒，為該納米顆粒的放大生產(chǎn)和臨床研宄提供基礎(chǔ)，該制備方法簡(jiǎn)便易行，便于推廣。
[0034]2、所述陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆?？梢载?fù)載DNA進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，顆粒粒徑均一、性質(zhì)穩(wěn)定。
【附圖說(shuō)明】
[0035]圖1為實(shí)施例1陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的制備過(guò)程示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0036]以下所述是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0037]實(shí)施例1:
[0038]一種陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的制備方法，包括以下步驟:
[0039](I)將大豆卵磷脂和陽(yáng)離子脂質(zhì)體以質(zhì)量比為1:4溶于質(zhì)量濃度為4%的乙醇水溶液中，得到混合溶液，混合溶液總體積為80mL，混合溶液中大豆卵磷脂的濃度為0.05mg/mL，陽(yáng)離子脂質(zhì)體的濃度為0.2mg/mL，陽(yáng)離子脂質(zhì)體為DOTAP ;將混合溶液保持溫度60°C下，壓力調(diào)至1400bar，初步乳化2min，得到乳化液；
[0040](2)將分子量為5000的聚合物PLGA溶于乙氰中，得到濃度