為lmg/mL的聚合物溶液，總體積為20mL ;滴加聚合物溶液至乳化液中，溫度保持60°C，壓力保持1400bar，繼續(xù)乳化6min，形成10mL含有陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的溶液，即得陽(yáng)離子磷脂_聚合物納米顆粒，通過(guò)粒度儀檢測(cè)納米顆粒的zeta電位大于20mV，說(shuō)明該納米顆粒帶正電荷，粒徑范圍為20_300nm。
[0041]圖1為實(shí)施例1中陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的制備過(guò)程示意圖。從圖中可以看出，首先將大豆卵磷脂I和陽(yáng)離子脂質(zhì)體2混合后進(jìn)行初步乳化，然后加入聚合物PLGA3繼續(xù)乳化，得到陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒4，該陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒包括內(nèi)核和外殼，內(nèi)核為聚合物PLGA，陽(yáng)離子脂質(zhì)體和大豆卵磷脂通過(guò)物理作用結(jié)合在一起形成外殼，陽(yáng)離子脂質(zhì)體和大豆卵磷脂包覆于聚合物表面。
[0042]將實(shí)施例1制得的含有陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的溶液放置30天，30天后未出現(xiàn)沉降、凝絮現(xiàn)象，說(shuō)明陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的性質(zhì)較為穩(wěn)定，這是因?yàn)樵撽?yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒帶正電荷，納米顆粒之間帶同種電荷，相互排斥，很難出現(xiàn)沉降、凝絮的現(xiàn)象。
[0043]實(shí)施例2:
[0044]一種陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的制備方法，包括以下步驟:
[0045](I)將大豆卵磷脂和陽(yáng)離子脂質(zhì)體以質(zhì)量比為1:3溶于質(zhì)量濃度為4%的乙醇水溶液中，得到混合溶液，混合溶液總體積為80mL，混合溶液中大豆卵磷脂的濃度為0.05mg/mL,陽(yáng)離子脂質(zhì)體的濃度為0.15mg/mL，陽(yáng)離子脂質(zhì)體為DOTAP ;將混合溶液保持溫度90°C溫度下，壓力調(diào)至500bar，初步乳化5min，得到乳化液；
[0046](2)將分子量為15000的聚合物PLA溶于乙氰中，得到濃度為lmg/mL的聚合物溶液，總體積為20mL ;滴加聚合物溶液至乳化液中，溫度保持90°C，壓力保持500bar，繼續(xù)乳化4min，形成10mL含有陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的溶液，即得陽(yáng)離子磷脂_聚合物納米顆粒，該陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒包括內(nèi)核和外殼，內(nèi)核為聚合物PLA，外殼為陽(yáng)離子脂質(zhì)體DOTAP和大豆卵磷脂，陽(yáng)離子脂質(zhì)體和大豆卵磷脂包覆于聚合物表面。通過(guò)粒度儀檢測(cè)納米顆粒的zeta電位大于20mV，說(shuō)明該納米顆粒帶正電荷，粒徑范圍為20_300nm。
[0047]實(shí)施例3:
[0048]一種陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的制備方法，包括以下步驟:
[0049](I)將大豆卵磷脂和陽(yáng)離子脂質(zhì)體以質(zhì)量比為1:5溶于質(zhì)量濃度為4%的乙醇水溶液中，得到混合溶液，混合溶液總體積為800mL，混合溶液中大豆卵磷脂的濃度為
0.05mg/mL，陽(yáng)離子脂質(zhì)體濃度為0.25mg/mL，陽(yáng)離子脂質(zhì)體為DOTAP ;將混合溶液保持溫度70°C溫度下，壓力調(diào)至lOOObar，初步乳化lmin，得到乳化液；
[0050](2)將分子量為10000的聚合物PLGA溶于丙酮中，得到濃度為lmg/mL的聚合物溶液，總體積為200mL ;滴加聚合物溶液至乳化液中，溫度保持70°C，壓力保持lOOObar，繼續(xù)乳化5min，形成100mL含有陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的溶液，即得陽(yáng)離子磷脂_聚合物納米顆粒，該陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒包括內(nèi)核和外殼，內(nèi)核為聚合物PLGAjF殼為陽(yáng)離子脂質(zhì)體DOTAP和大豆卵磷脂，陽(yáng)離子脂質(zhì)體和大豆卵磷脂包覆于聚合物表面。通過(guò)粒度儀檢測(cè)納米顆粒的zeta電位大于20mV，說(shuō)明該納米顆粒帶正電荷，粒徑范圍為20_300nm。
[0051]以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒，其特征在于，包括內(nèi)核和外殼，所述內(nèi)核為聚合物，所述外殼為陽(yáng)離子脂質(zhì)體和磷脂，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體和所述磷脂包覆于所述聚合物表面，所述聚合物為聚乙交酯丙交酯或聚乳酸。
2.如權(quán)利要求1所述的納米顆粒，其特征在于，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體為1，2_二油?；?3-三甲基銨丙烷、雙油基雙甲基氯化銨、雙十八烷基二甲基溴化銨、1，2-二油?；?3-二甲基丙二醇胺、N-(N’，N’-二甲氨基乙基)氨甲?；?膽固醇、N，N-二甲基-N-羥乙基-N-(l，2-雙十四烷氧基)丙基溴化銨、1，2- 二亞油氧基-N，N- 二甲基丙胺、1，2- 二亞麻氧基-N，N- 二甲基丙胺、二硬脂基二甲基銨鹽、脂精胺GL-53和脂精胺GL-89中的至少一種。
3.如權(quán)利要求1所述的納米顆粒，其特征在于，所述磷脂為大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷月旨、蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺中的至少一種。
4.如權(quán)利要求1所述的納米顆粒，其特征在于，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體與所述聚合物的質(zhì)量比為0.6:1-1，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體與所述磷脂的質(zhì)量比為3-5:1。
5.如權(quán)利要求1所述的納米顆粒，其特征在于，所述陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的粒徑為 20-300nm。
6.一種陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)將陽(yáng)離子脂質(zhì)體和磷脂溶解于溶劑中，得到混合溶液，在60°C-90°C下，壓力在500-1400bar的條件下，將所述混合溶液進(jìn)行初步乳化2min，得到乳化液； (2)向所述乳化液中滴加聚合物溶液，在60°C-90°C下，壓力在500-1400bar的條件下，繼續(xù)乳化4-6min，形成含有陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的溶液，即得所述陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒；所述陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒包括內(nèi)核和外殼，所述內(nèi)核為聚合物，所述外殼為陽(yáng)離子脂質(zhì)體和磷脂，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體和所述磷脂包覆于所述聚合物表面，所述聚合物為聚乙交酯丙交酯或聚乳酸。
7.如權(quán)利要求6所述的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體為1，2- 二油?；?3-三甲基銨丙烷、雙油基雙甲基氯化銨、雙十八烷基二甲基溴化銨、1，2- 二油?；?3-二甲基丙二醇胺、N-(N’，N’ - 二甲氨基乙基)氨甲酰基-膽固醇、N，N-二甲基-N-羥乙基-N-(l，2-雙十四烷氧基)丙基溴化銨、1，2- 二亞油氧基-N，N- 二甲基丙胺、1，2- 二亞麻氧基-N，N- 二甲基丙胺、二硬脂基二甲基銨鹽、脂精胺GL-53和脂精胺GL-89中的至少一種。
8.如權(quán)利要求6所述的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述磷脂為大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺中的至少一種。
9.如權(quán)利要求6所述的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體與所述聚合物的質(zhì)量比為0.6:1-1，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體與所述磷脂的質(zhì)量比為3-5:1。
10.如權(quán)利要求6所述的納米顆粒的制備方法，其特征在于，所述陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的粒徑為20_300nm。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒，包括內(nèi)核和外殼，所述內(nèi)核為聚合物，所述外殼為陽(yáng)離子脂質(zhì)體和磷脂，所述陽(yáng)離子脂質(zhì)體和所述磷脂包覆于所述聚合物表面，所述聚合物為聚乙交酯丙交酯或聚乳酸。所述陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒粒徑均一、性質(zhì)穩(wěn)定，可以負(fù)載DNA進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。本發(fā)明還提供了一種陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒的制備方法，采用一步高壓勻漿法制備陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒，操作簡(jiǎn)單，能夠制備大劑量的陽(yáng)離子磷脂-聚合物納米顆粒，為該納米顆粒的放大生產(chǎn)和臨床研究提供基礎(chǔ)，該制備方法簡(jiǎn)便易行，便于推廣。
【IPC分類】A61K9-127, A61K48-00, A61K47-34
【公開號(hào)】CN104523595
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410837176
【發(fā)明人】蔡林濤, 鄭明彬, 陳澤, 羅震宇, 趙鵬飛, 龔萍
【申請(qǐng)人】深圳先進(jìn)技術(shù)研究院
【公開日】2015年4月22日
【申請(qǐng)日】2014年12月26日