甾體 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物0. 68Kg，采用實(shí)施例1的方法測(cè)定徐長(zhǎng)卿C21留體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中C21留體苷元重量 百分含量為92%。
[0040] 實(shí)施例4 取徐長(zhǎng)卿(產(chǎn)地江蘇）干燥根和根莖粗粉300Kg，加90%乙醇回流提取三次，每次用量 為2400L，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，分次濾過(guò)，提取液合并，減壓回收乙醇，所得提取物加水 溶解，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂柱DlOl色譜，填充大孔吸附樹(shù)脂DlOl體積為150L，用水洗脫至洗脫 液近無(wú)色，棄去洗脫液，用30%乙醇洗脫至洗脫液近無(wú)色，棄去洗脫液，用70%乙醇洗脫至洗 脫液近無(wú)色，收集洗脫液，經(jīng)已處理好的脫色樹(shù)脂D941柱色譜，填充脫色樹(shù)脂D941體積為 150L，用90%乙醇900L洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥得洗脫物，洗脫物加2 %硫酸溶 液水解，硫酸溶液體積為600L，置80°C水浴中加熱回流5小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙 酯振搖提取5次，乙酸乙酯每次體積為300L，提取液合并，回收乙酸乙酯得徐長(zhǎng)卿C21甾體 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物0. 77Kg，采用實(shí)施例1的方法測(cè)定徐長(zhǎng)卿C21留體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中C21留體苷元重量 百分含量為91%。
[0041] 實(shí)施例5 徐長(zhǎng)卿C21留體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物和徐長(zhǎng)卿C21留體提取物逆轉(zhuǎn)人胃癌多藥耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR對(duì)阿霉素耐藥作用 徐長(zhǎng)卿C21留體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的制備：取徐長(zhǎng)卿(產(chǎn)地山東）干燥根和根莖粗粉300Kg， 加90%乙醇回流提取三次，每次用量為2400L，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，分次濾過(guò)，提取液 合并，減壓回收乙醇，所得提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂柱DlOl色譜，填充大孔吸附樹(shù) 脂DlOl體積為150L，用水洗脫至洗脫液近無(wú)色，棄去洗脫液，用30%乙醇洗脫至洗脫液近 無(wú)色，棄去洗脫液，用70%乙醇洗脫至洗脫液近無(wú)色，收集洗脫液，經(jīng)已處理好的脫色樹(shù)脂 D941柱色譜，填充脫色樹(shù)脂D941體積為150L，用90%乙醇900L洗脫，收集洗脫液，減壓 濃縮，干燥得洗脫物，洗脫物加2 %硫酸溶液水解，硫酸溶液體積為600L，置80°C水浴中加 熱回流5小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取5次，乙酸乙酯每次體積為300L，提取 液合并，回收乙酸乙酯得徐長(zhǎng)卿C21留體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物0. 59Kg。
[0042] 徐長(zhǎng)卿C21甾體提取物的制備：取徐長(zhǎng)卿（產(chǎn)地山東）干燥根和根莖粗粉300Kg， 加90%乙醇回流提取三次，每次用量為2400L，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，分次濾過(guò)，提取液 合并，減壓回收乙醇，所得提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂柱DlOl色譜，填充大孔吸附樹(shù) 脂DlOl體積為150L，用水洗脫至洗脫液近無(wú)色，棄去洗脫液，用30%乙醇洗脫至洗脫液近 無(wú)色，棄去洗脫液，用70%乙醇洗脫至洗脫液近無(wú)色，收集洗脫液，經(jīng)已處理好的脫色樹(shù)脂D941柱色譜，填充脫色樹(shù)脂D941體積為150L，用90%乙醇900L洗脫，收集洗脫液，減壓 濃縮，干燥，得徐長(zhǎng)卿C21留體提取物0.84Kg。
[0043] 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人胃癌多藥耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR用含10%FBS的PPMI-1640 培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度至IXio5個(gè)/ml，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，100 #1/孔，置于含有 5%0)2的37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，然后在各孔中加入100 含有不同濃度阿霉素 的培養(yǎng)基、徐長(zhǎng)卿C21留體提取物(終濃度50 #g/ml)和不同濃度阿霉素的培養(yǎng)基、徐長(zhǎng)卿C21留體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物(終濃度50 #g/ml)和不同濃度阿霉素的培養(yǎng)基，加藥后繼續(xù)培養(yǎng)48小 時(shí)后，在各孔中加入20 # 1濃度為5%的MTT，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，吸棄培養(yǎng)液，在各孔中加入 DMS0,經(jīng)微量混合振蕩器振蕩10分鐘后，全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀于570nm處測(cè)定吸光度 值，計(jì)算抑制率和IC5tl，計(jì)算逆轉(zhuǎn)指數(shù)=阿霉素IC5c/阿霉素聯(lián)合徐長(zhǎng)卿C21甾體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物 IC5tl或阿霉素聯(lián)合徐長(zhǎng)卿C21留體提取物IC5tl。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0044] 表1徐長(zhǎng)卿C21留體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物和徐長(zhǎng)卿C21留體提取物 逆轉(zhuǎn)人胃癌多藥耐藥細(xì)胞株SGC7901/VCR對(duì)阿霉素耐藥作用
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 徐長(zhǎng)卿C21留體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，其特征在于，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中C21留體苷元重量百分含量大 于等于90%，制備方法包括以下步驟：徐長(zhǎng)卿干燥根和根莖粉碎后，加90%乙醇回流提取三 次，每次用量為徐長(zhǎng)卿干燥根和根莖重量的8倍體積量，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，分次濾過(guò)， 提取液合并，減壓回收乙醇，所得提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂柱DlOl色譜，填充大孔 吸附樹(shù)脂DlOl體積為徐長(zhǎng)卿干燥根和根莖重量的0. 5倍體積，用水洗脫至洗脫液近無(wú)色， 棄去洗脫液，用30%乙醇洗脫至洗脫液近無(wú)色，棄去洗脫液，用70%乙醇洗脫至洗脫液近無(wú) 色，收集洗脫液，經(jīng)已處理好的脫色樹(shù)脂D941柱色譜，填充脫色樹(shù)脂D941體積為徐長(zhǎng)卿干 燥根和根莖重量的〇. 5倍體積，用6倍柱體積90%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥得 洗脫物，洗脫物加2 %硫酸溶液水解，硫酸溶液體積為徐長(zhǎng)卿干燥根和根莖重量的2倍體積 量，置80°C水浴中加熱回流5小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取5次，乙酸乙酯每 次體積徐長(zhǎng)卿干燥根和根莖重量的1倍體積量，提取液合并，回收乙酸乙酯得徐長(zhǎng)卿C21甾 體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。
2. 徐長(zhǎng)卿C21留體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在制備腫瘤細(xì)胞多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用，其特征在于， 所述的徐長(zhǎng)卿C21留體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中C21留體苷元重量百分含量大于等于90%，通過(guò)下列方法 得到的：徐長(zhǎng)卿干燥根和根莖粉碎后，加90%乙醇回流提取三次，每次用量為徐長(zhǎng)卿干燥根 和根莖重量的8倍體積量，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，分次濾過(guò)，提取液合并，減壓回收乙醇， 所得提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂柱DlOl色譜，填充大孔吸附樹(shù)脂DlOl體積為徐長(zhǎng)卿 干燥根和根莖重量的〇. 5倍體積，用水洗脫至洗脫液近無(wú)色，棄去洗脫液，用30%乙醇洗脫 至洗脫液近無(wú)色，棄去洗脫液，用70%乙醇洗脫至洗脫液近無(wú)色，收集洗脫液，經(jīng)已處理好 的脫色樹(shù)脂D941柱色譜，填充脫色樹(shù)脂D941體積為徐長(zhǎng)卿干燥根和根莖重量的0. 5倍體 積，用6倍柱體積90%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥得洗脫物，洗脫物加2 %硫酸 溶液水解，硫酸溶液體積為徐長(zhǎng)卿干燥根和根莖重量的2倍體積量，置80°C水浴中加熱回 流5小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取5次，乙酸乙酯每次體積徐長(zhǎng)卿干燥根和根 莖重量的1倍體積量，提取液合并，回收乙酸乙酯得徐長(zhǎng)卿C21留體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。
3. -種具有逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞多藥耐藥作用的徐長(zhǎng)卿C21留體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的制備方法，其特 征在于，該方法包括以下步驟：徐長(zhǎng)卿干燥根和根莖粉碎后，加90%乙醇回流提取三次，每 次用量為徐長(zhǎng)卿干燥根和根莖重量的8倍體積量，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，分次濾過(guò)，提取 液合并，減壓回收乙醇，所得提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂柱DlOl色譜，填充大孔吸附 樹(shù)脂DlOl體積為徐長(zhǎng)卿干燥根和根莖重量的0. 5倍體積，用水洗脫至洗脫液近無(wú)色，棄去 洗脫液，用30%乙醇洗脫至洗脫液近無(wú)色，棄去洗脫液，用70%乙醇洗脫至洗脫液近無(wú)色，收 集洗脫液，經(jīng)已處理好的脫色樹(shù)脂D941柱色譜，填充脫色樹(shù)脂D941體積為徐長(zhǎng)卿干燥根和 根莖重量的〇. 5倍體積，用6倍柱體積90%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥得洗脫 物，洗脫物加2 %硫酸溶液水解，硫酸溶液體積為徐長(zhǎng)卿干燥根和根莖重量的2倍體積量， 置80 °C水浴中加熱回流5小時(shí)，取出，立即冷卻，用乙酸乙酯振搖提取5次，乙酸乙酯每次體 積徐長(zhǎng)卿干燥根和根莖重量的1倍體積量，提取液合并，回收乙酸乙酯得徐長(zhǎng)卿C21留體轉(zhuǎn) 化產(chǎn)物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，該轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在制備胃癌多藥耐藥細(xì)胞耐 5-氟尿嘧啶逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，該轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在制備結(jié)腸癌多藥耐藥細(xì)胞 耐5-氟尿嘧啶逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，該轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在制備結(jié)腸癌多藥耐藥細(xì)胞 耐阿霉素逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用。
7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，該轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在制備結(jié)腸癌多藥耐藥細(xì)胞 耐順鉑逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用。
8. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，該轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在制備肺癌多藥耐藥細(xì)胞耐 紫杉醇逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用。
9. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，該轉(zhuǎn)化產(chǎn)物在制備胃癌多藥耐藥細(xì)胞耐 順鉑逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種徐長(zhǎng)卿C21甾體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物及其在制備腫瘤細(xì)胞多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中C21甾體苷元重量百分含量大于等于90%，逆轉(zhuǎn)人胃癌多藥耐藥細(xì)胞、人結(jié)腸癌多藥耐藥細(xì)胞、人肺癌多藥耐藥細(xì)胞對(duì)臨床常用藥物紫杉醇、阿霉素、5-氟尿嘧啶、順鉑耐藥作用，同時(shí)還提供徐長(zhǎng)卿C21甾體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物制備方法，制備方法簡(jiǎn)便。本發(fā)明的徐長(zhǎng)卿C21甾體轉(zhuǎn)化產(chǎn)物與抗腫瘤藥物聯(lián)合應(yīng)用于臨床，提高化療的療效，具有廣泛的應(yīng)用前景。
【IPC分類(lèi)】A61P35-00, A61K125-00, A61K36-27
【公開(kāi)號(hào)】CN104758332
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510161897
【發(fā)明人】王威, 劉小紅, 褚文希, 高華, 韓立春
【申請(qǐng)人】青島大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年7月8日
【申請(qǐng)日】2015年4月8日