一種具有雌激素活性的蓬子菜提取物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種中草藥有效成分提取物，尤其涉及一種具有雌激素活性的蓬子菜 提取物及其制備方法，本發(fā)明還涉及該蓬子菜提取物在制備提高雌激素水平和刺激子宮發(fā) 育的藥物中的應(yīng)用，屬于中草藥提取技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 許多疾病的發(fā)生與體內(nèi)雌激素水平密切相關(guān)，如骨質(zhì)疏松、心血管疾病等，隨著婦 女進入絕經(jīng)期，這些疾病的發(fā)病風險也明顯增加。補充外源性激素的替代療法雖可減輕圍 絕經(jīng)期的臨床癥狀，降低骨質(zhì)疏松、心血管疾病的發(fā)病風險，但長期應(yīng)用外源性雌激素亦增 加乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生率，使激素替代療法的廣泛應(yīng)用受到了限制。植物雌激素是從 天然植物中提取的結(jié)構(gòu)與內(nèi)源性雌激素相似的一系列化合物，現(xiàn)代藥理研宄及流行病學資 料表明，植物雌激素對體內(nèi)的雌激素水平具有雙向調(diào)節(jié)作用，可參與多種疾病的預(yù)防和治 療，尤其是與雌激素水平相關(guān)的乳腺癌、前列腺癌、更年期綜合征及心血管疾病等，且副作 用小，日益受到研宄者們的關(guān)注。隨著研宄的不斷深入，尋找具有雌激素樣藥理作用的新的 藥用植物及其有效部位成為解決骨質(zhì)疏松、心血管疾病等雌激素相關(guān)性疾病的有效途徑。
[0003] 蓬子菜（Galium verum L.)為茜草科（Rubiaceae)拉拉藤（Galium)屬植物蓬子菜 的干燥全草。始載于《救荒本草》，其性溫，味苦、甘，具有清熱解毒、利膽、利濕止癢、行血的 功效，既可內(nèi)服也可外用，民間用其治療肝炎、跌打損傷、婦女血氣痛、蕁麻瘆、稻田皮炎等。 蓬子菜不同溶媒提取物分離得到的化學成分主要包括黃酮、蒽醌、環(huán)烯醚萜、苯丙素、有機 酸、三萜及揮發(fā)油類，其中以黃酮、蒽醌和環(huán)烯醚萜類化合物較多。目前對蓬子菜的現(xiàn)代藥 理研宄主要集中在抗腫瘤和抗氧化損傷的研宄上，研宄表明蓬子菜具有顯著抑制人肝癌細 胞H印G2增殖、誘導其凋亡的作用；對過氧化氫損傷的人臍靜脈內(nèi)皮細胞的亦具有良好保 護作用，未見有關(guān)雌激素藥理作用的研宄和相關(guān)提取物制備方法的介紹。目前有關(guān)蓬子菜 總黃酮的提取，有報道采用水提后醇提，堿溶酸沉，并采用有機溶劑萃取后再上樹脂柱的方 法，雖然得到總黃酮含量較高，但黃酮苷類成分在堿溶酸沉過程中容易發(fā)生水解而被破壞， 同時大量有機溶劑的引入也是不利因素之一。本發(fā)明制備方法的效果是：常規(guī)提取后，采用 體積百分比為8~12%乙醇溶解浸膏上樣，體積百分比為15~25%乙醇洗脫除雜，改善水 洗脫除雜效果差的缺點，可充分去除雜質(zhì)，且保證有效部位的收率及含量，該提取精制方法 工藝簡單，制備時間短，樹脂柱重復利用率高。制得的蓬子菜雌激素樣藥理作用提取物中主 要為黃酮類化合物，且有效部位中總黃酮類化合物含量達57%以上，總黃酮類化合物中主 要為木犀草苷。蓬子菜雌激素樣藥理作用提取物可刺激小鼠子宮發(fā)育，促進其體重增加，提 高雌激素水平。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種工藝簡單、提取率高和安全性高的具有雌激素活性的 蓬子菜提取物的制備方法。
[0005] 為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：
[0006] -種具有雌激素活性的蓬子菜提取物的制備方法，包括以下步驟：
[0007] (1)取蓬子菜全草粗粉，用體積百分比為60~80%的乙醇進行超聲提取和回流提 取，將得到的提取液過濾，濾液經(jīng)減壓回收乙醇后，得浸膏；
[0008] (2)將浸膏用體積百分比為8~12%的乙醇溶解后，上樣到大孔吸附樹脂柱進行 靜置，先用體積百分比為15~25 %的乙醇洗去雜質(zhì)，再用體積百分比為50~70 %的乙醇 洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，低溫干燥，即得一種具有雌激素活性的蓬子菜提取 物。
[0009] 在本發(fā)明中，優(yōu)選的，步驟（1)中所述超聲提取的時間為20~40min，使細胞充分 破碎；所述回流提取為用體積百分比為60~80%的乙醇溶液提取兩次，每次提取時間為 1~2h ;所述減壓回收乙醇為50°C下減壓回收乙醇。
[0010] 在本發(fā)明中，優(yōu)選的，所述回流提取的第一次提取中乙醇用量為10倍重量的蓬子 菜全草粗粉，第二次提取中乙醇用量為8倍重量的蓬子菜全草粗粉。
[0011] 在本發(fā)明中，優(yōu)選的，步驟（2)中所述靜置的時間為2~4h;所述洗去雜質(zhì)和洗脫 的流速均為每小時I. 〇~1. 5倍柱體積；所述洗去雜質(zhì)和洗脫的時間均為1~2h ;所述減 壓回收乙醇為50°C下減壓回收乙醇。
[0012] 在本發(fā)明中，優(yōu)選的，步驟（2)中所述大孔吸附樹脂為AB-8大孔吸附樹脂。
[0013] 在本發(fā)明中，優(yōu)選的，步驟（2)中所述大孔吸附樹脂在上樣前，樹脂常規(guī)處理后， 預(yù)先用體積百分比為8~12%的乙醇洗脫2倍柱體積。
[0014] 在本發(fā)明中，優(yōu)選的，蓬子菜全草粗粉與樹脂的質(zhì)量比為1:2~1:4。
[0015] 進一步的，本發(fā)明提供了由上述制備方法制備得到的具有雌激素活性的蓬子菜提 取物，其特征在于，所述蓬子菜提取物中總黃酮類化合物含量占總提取物總重量的57%以 上；其中，所述的總黃酮類化合物中主要為木犀草苷。
[0016] 蓬子菜具有清熱解毒、利膽、利濕止癢、行血的功效。民間用其治療肝炎、跌打損 傷、婦女血氣痛、蕁麻瘆、稻田皮炎等。
[0017] 經(jīng)小鼠子宮增重法實驗證明：本發(fā)明制得的蓬子菜雌激素樣藥理作用提取物可刺 激小鼠子宮發(fā)育，促進其體重增加；雌激素檢測結(jié)果表明：本發(fā)明制得的蓬子菜雌激素樣 藥理作用提取物可提高雌激素水平，顯示其具有良好的雌激素作用。
[0018] 因此，更進一步的，本發(fā)明還提出了所述的蓬子菜提取物在制備提高雌激素水平 和刺激子宮發(fā)育的藥物中的應(yīng)用。
[0019] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：
[0020] 本發(fā)明的制備方法除雜效果好，制備工藝簡單，制備時間短，樹脂柱重復利用率 高，產(chǎn)率高，產(chǎn)品含量高。制備得到的蓬子菜雌激素樣藥理作用提取物中含有大量的黃酮類 化合物，有效部位中總黃酮類化合物含量達57%以上，且總黃酮類化合物中主要為木犀草 苷。小鼠子宮增重法實驗表明，使用本發(fā)明制得的蓬子菜提取物可刺激小鼠子宮發(fā)育，促進 其體重增加。雌激素檢測結(jié)果表明，本發(fā)明的蓬子菜雌激素樣藥理作用提取物可提高雌激 素水平，顯示其具有良好的雌激素作用。
【附圖說明】
[0021] 圖1為木犀草苷標準品的高效液相色譜圖；
[0022] 圖2為采用本發(fā)明制備方法制備得到的具有雌激素活性的蓬子菜提取物的高效 液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0023] 下面結(jié)合具體實施例來進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述而 更為清楚。但實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員 應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細節(jié)和形式進行 修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
[0024] 實施例1
[0025] 取蓬子菜粗粉lkg，先以60% (v/v)乙醇超聲20min，使細胞充分破碎，然后用 60% (v/v)乙醇回流提取兩次，第一次回流提取乙醇用量為10倍重量的蓬子菜全草粗粉， 第二次回流提取乙醇用量為8倍重量的蓬子菜全草粗粉，回流提取時間每次lh。趁熱過濾， 合并濾液，50°C減壓回收乙醇至浸膏。AB-8大孔樹脂按說明書要求常規(guī)處理后，裝柱，樹脂 用量為2kg。樹脂柱用8% (v/v)乙醇洗脫2BV后，將上述浸膏用8% (v/v)乙醇溶解，上樹 脂柱，靜置2h。先以15% (v/v)乙醇按1.0 BV/h的流速洗脫，洗脫2BV，除雜。繼續(xù)用50% (v/v)乙醇按l.OBV/h的流速洗脫，收集2BV 50% (v/v)乙醇洗脫