液，50°C減壓回收乙醇， 即得具有雌激素活性的蓬子菜提取物，總黃酮類化合物含量達(dá)57. 5%。
[0026] 實施例2
[0027] 取蓬子菜粗粉2kg，先以70% (v/v)乙醇超聲30min，使細(xì)胞充分破碎，然后用 70% (v/v)乙醇回流提取兩次，第一次回流提取乙醇用量為10倍重量的蓬子菜全草粗粉， 第二次回流提取乙醇用量為8倍重量的蓬子菜全草粗粉，回流提取時間每次I. 5h。趁熱過 濾，合并濾液，50°C減壓回收乙醇至浸膏。AB-8大孔樹脂按說明書要求常規(guī)處理后，裝柱， 樹脂用量為6kg。樹脂柱用10% (v/v)乙醇洗脫2BV后，將上述浸膏用10% (v/v)乙醇溶 解，上樹脂柱，靜置3h。先以20% (v/v)乙醇按1.5BV/h的流速洗脫，洗脫2BV，除雜。繼續(xù) 用60% (v/v)乙醇按1.5BV/h的流速洗脫，收集2BV 60% (v/v)乙醇洗脫液，50°C減壓回 收乙醇，即得具有雌激素活性的蓬子菜提取物，總黃酮類化合物含量達(dá)59. 5%。
[0028] 實施例3
[0029] 取蓬子菜粗粉3kg，先以80 % (v/v)乙醇超聲40min，使細(xì)胞充分破碎，然后用 80% (v/v)乙醇回流提取兩次，第一次回流提取乙醇用量為10倍重量的蓬子菜全草粗粉， 第二次回流提取乙醇用量為8倍重量的蓬子菜全草粗粉，回流提取時間每次2h。趁熱過濾， 合并濾液，50°C減壓回收乙醇至浸膏。AB-8大孔樹脂按說明書要求常規(guī)處理后，裝柱，樹脂 用量為12kg。樹脂柱用12% (v/v)乙醇洗脫2BV后，將上述浸膏用12% (v/v)乙醇溶解， 上樹脂柱，靜置4h。先以25% (v/v)乙醇按1.2BV/h的流速洗脫，洗脫2BV，除雜。繼續(xù)用 70% (v/v)乙醇按1.2BV/h的流速洗脫，收集2BV 70% (v/v)乙醇洗脫液，50°C減壓回收乙 醇，即得具有雌激素活性的蓬子菜提取物，總黃酮類化合物含量達(dá)58. 0%。
[0030] 將上述實施例制備得到的具有雌激素活性的蓬子菜提取物經(jīng)高效液相測定，測定 結(jié)果見圖1和圖2。從圖1和圖2中可知：上述實施例制備得到的具有雌激素活性的蓬子 菜提取物中主要成分為木犀草苷。
[0031] 試驗例I
[0032] 通過子宮增重法來比較蓬子菜水提取物、醇提取物、精制醇提取物、己烯雌酚的雌 激素生物活性：
[0033] (1)蓬子菜水提取物制備方法：蓬子菜藥材粗粉加水浸泡30min，第一次水用量為 10倍重量的蓬子菜藥材粗粉，煎煮40min，第二次水用量為8倍重量的蓬子菜藥材粗粉，煎 煮30min，過濾，合并濾液，水浴蒸干。所得浸膏以0. 5% CMC溶液溶解，相當(dāng)于每毫升溶液 含生藥量lg。
[0034] (2)蓬子菜醇提取物制備方法：蓬子菜藥材粗粉加70% (v/v)乙醇，浸泡30min， 第一次乙醇用量為10倍重量的蓬子菜藥材粗粉，回流提取I. 5h，第二次乙醇用量為8倍重 量的蓬子菜藥材粗粉，回流提取lh，過濾，合并濾液，50°C減壓回收乙醇至浸膏。所得浸膏以 0. 5% CMC溶液溶解，相當(dāng)于每毫升溶液含生藥量lg。
[0035] (3)蓬子菜精制醇提取物制備方法：實施例2制得的蓬子菜提取物以0. 5% CMC溶 液溶解，相當(dāng)于每毫升溶液含生藥量lg。
[0036] (4)己烯雌酚陽性藥液的制備：稱取己烯雌酚適量，以0. 5 % CMC溶液配成 Img · ml/1己稀雌酷陽性對照液。
[0037] (5)給藥方法：將小鼠按體重均衡和隨機(jī)的原則分為5組：空白組、陽性藥物組、 蓬子菜水提取物組，蓬子菜醇提取物組、蓬子菜精制醇提取物組?？瞻捉M給予等體積〇. 5% CMC溶液；陽性對照組給予陽性藥物己烯雌酚，實驗組分別給予蓬子菜水提取物、蓬子菜醇 提取物和蓬子菜精制醇提取物。灌胃分早、晚2次進(jìn)行，每次給藥0. 2mL，均持續(xù)給藥4天。 各組動物于最后一次給藥后第2天稱重，斷頸處死后迅速剖開腹腔，剝離子宮系膜及周圍 脂肪，切除兩側(cè)卵巢，在子宮頸與子宮角的交界部位剪下子宮并立即稱重；計算子宮系數(shù)及 給藥前后體重變化率。試驗結(jié)果見表1和表2.
[0038] 子宮系數(shù)=子宮濕重/體重X 100%
[0039] 表1不同方法制備的蓬子菜提取物對性未成熟小鼠體重增長速度的影響(^±S：)
[0040]
【主權(quán)項】
1. 一種具有雌激素活性的蓬子菜提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 取蓬子菜全草粗粉，用體積百分比為60~80%的乙醇進(jìn)行超聲提取和回流提取， 將得到的提取液過濾，濾液經(jīng)減壓回收乙醇后，得浸膏； (2) 將浸膏用體積百分比為8~12%的乙醇溶解后，上樣到大孔吸附樹脂柱進(jìn)行靜置， 先用體積百分比為15~25%的乙醇洗去雜質(zhì)，再用體積百分比為50~70%的乙醇洗脫， 收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，低溫干燥，即得一種具有雌激素活性的蓬子菜提取物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1)中所述超聲提取的時間為 20~40min，使細(xì)胞充分破碎；所述回流提取為用體積百分比為60~80%的乙醇溶液提取 兩次，每次提取時間為1~2h;所述減壓回收乙醇為50°C下減壓回收乙醇。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述回流提取的第一次提取中乙醇 用量為10倍重量的蓬子菜全草粗粉，第二次提取中乙醇用量為8倍重量的蓬子菜全草粗 粉。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2)中所述靜置的時間為2~ 4h;所述洗去雜質(zhì)和洗脫的流速均為每小時I. 0~1. 5倍柱體積；所述洗去雜質(zhì)和洗脫的 時間均為1~2h;所述減壓回收乙醇為50°C下減壓回收乙醇。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2)中所述大孔吸附樹脂為 AB-8大孔吸附樹脂。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2)中所述大孔吸附樹脂在上樣 前，樹脂常規(guī)處理后，預(yù)先用體積百分比為8~12%的乙醇洗脫2倍柱體積。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，蓬子菜全草粗粉與樹脂的質(zhì)量比為 1:2 ~1:4〇
8. 按照權(quán)利要求1-7任一項所述的制備方法制備得到的具有雌激素活性的蓬子菜提 取物，其特征在于，所述蓬子菜提取物中總黃酮類化合物含量占總提取物總重量的57%以 上；其中，所述的總黃酮類化合物中主要為木犀草苷。
9. 權(quán)利要求8所述的蓬子菜提取物在制備提高雌激素水平和刺激子宮發(fā)育的藥物中 的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有雌激素活性的蓬子菜提取物及其制備方法和應(yīng)用，屬于中草藥提取技術(shù)領(lǐng)域。該方法包括以下步驟：(1)取蓬子菜全草粗粉，用60～80％的乙醇進(jìn)行超聲提取和回流提取，將得到的提取液過濾，濾液經(jīng)減壓回收乙醇后，得浸膏；(2)將浸膏用8～12％的乙醇溶解后，上樣到大孔吸附樹脂柱進(jìn)行靜置，先用15～25％的乙醇洗去雜質(zhì)，再用50～70％的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，低溫干燥，即得。本發(fā)明的制備方法具有工藝簡單、周期短和產(chǎn)率高等優(yōu)點。所制得的蓬子菜提取物中主要為總黃酮類化合物，含量高達(dá)57％以上，且總黃酮類化合物中主要為木犀草苷，可刺激小鼠子宮發(fā)育，促進(jìn)其體重增加，提高雌激素水平。
【IPC分類】A61P15-00, A61K36-74, A61P5-30
【公開號】CN104784291
【申請?zhí)枴緾N201510038517
【發(fā)明人】崔明宇, 陳婷婷, 李艷鳳, 吳倫, 馬英麗
【申請人】黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【公開日】2015年7月22日
【申請日】2015年1月26日