甲病毒在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種甲病毒在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 腫瘤源于正常細胞中基因和表觀遺傳學(xué)的積累變化，這種改變驅(qū)使正常細胞轉(zhuǎn)變 為惡性腫瘤。這個復(fù)雜病理變化過程決定了不同腫瘤在發(fā)生、維持以及轉(zhuǎn)移中機制的多樣 性。目前，手術(shù)切除、化療和放療是臨床治療腫瘤常用的方法，然而手術(shù)切除腫瘤易復(fù)發(fā)， 放、化療毒副作用大。
[0003] 15~20 %人類的癌癥與病毒感染有關(guān)，如乙型肝炎病毒（HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV)與肝癌、人乳頭瘤病毒（HPV)與宮頸癌等。
[0004] 甲病毒屬病毒屬于披膜病毒科，是一類有包膜結(jié)構(gòu)的單正鏈RNA病毒，主要通過 節(jié)肢動物作為傳播媒介。29種甲病毒中有13種可引起人、畜疾?。―avid M.Knipe，Peter M. Howley, Chapter23, Alphaviruses, Fields Virology6th edition :651-685,2013)〇
[0005] 甲病毒委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒可作為載體轉(zhuǎn)導(dǎo)樹突細胞治療腫瘤（Moran TPj Burgents JEj Long Bj et al:Alphaviral vector-transduced dendritic cells are successful therapeutic vaccines against neu-〇verexpressing tumors in wild-type mice. Vaccine25:6604-6612, 2007)。然而，這種病毒曾引起人類發(fā)熱、抽搐、流產(chǎn)甚至死亡， 因此選擇性與安全性問題嚴重影響病毒在抗腫瘤治療中的應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種安全有效的病毒抗腫瘤藥物。
[0007] 本發(fā)明的進一步目的在于提供一種針對特定腫瘤類型的安全有效的病毒抗腫瘤 藥物。
[0008] 本發(fā)明的進一步目的在于針對特定的個體/腫瘤提供一種安全有效的病毒抗腫 瘤藥物。
[0009] 本發(fā)明的進一步目的在于提供一種有效的抗腫瘤用藥系統(tǒng)及用藥方法。
[0010] 本發(fā)明的進一步目的在于提供一種更為有效的抗腫瘤藥物和腫瘤治療方法。
[0011] 發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)上述目的。
[0012] 發(fā)明提供了甲病毒在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述的甲病毒為Ml病毒或蓋塔 病毒。
[0013] Ml病毒（Alphavirus Ml)屬于甲病毒屬（Alphavirus)，于1964年從中國海南島庫 蚊屬（Culex)蚊蟲中分離得到（Li XD, et al: Isolation of Getah virus from mosquitos collected on Hainan Island，China，and results of a serosurvey. Southeast Asian J Trop Med Public Health23:730-734, 1992.)。2008年Ml病毒的全基因組序列被測定（Zhai YGj et al:Complete sequence characterization of isolates of Getah virus(genus Alphavirus，family Togaviridae) from China. J Gen Virol89:1446-1456, 2008·)。其獲取 方式可選但不限于通過上述文獻方法獲得，或者通過以下保藏信息獲得（保藏編號：CCTCC V201423 ;保藏時間：2014年7月17日；分類命名：Alphavirus Ml ;保藏單位：中國典型培 養(yǎng)物保藏中心；保藏地址：湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學(xué)）。
[0014] 本發(fā)明研究者此前對Ml病毒的研究結(jié)果表明，其對一些腫瘤細胞具有殺傷作用， 例如對大鼠惡性膠質(zhì)瘤細胞C6,人惡性膠質(zhì)瘤細胞U251和U-87 ;然而，對另外一些腫瘤細 胞則不具備殺傷作用，例如對人惡性膠質(zhì)瘤細胞T98G。這些研究并不能確定Ml病毒具備有 效抗腫瘤效應(yīng)。
[0015] 本發(fā)明進一步提供了該病毒所適用的腫瘤類型，以提高Ml病毒作為抗腫瘤藥物 時的治療有效性。
[0016] 進一步優(yōu)選地，本發(fā)明以Ml病毒作為抗腫瘤藥物所適用的腫瘤類型包括肝癌、結(jié) 直腸癌、膀胱癌、乳腺癌、宮頸癌、前列腺癌、膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、胰腺癌、鼻咽癌、肺癌、胃癌 中的一種或多種。
[0017] 發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，Ml病毒對各種腫瘤細胞引起不同程度的細胞死亡。Ml病毒（Μ0Ι = 10)處理腫瘤細胞48小時，胰腺癌、鼻咽癌、前列腺癌和黑色素瘤細胞死亡率超過50% ;結(jié) 直腸癌（L〇V〇、HCT-8、SW620和SW480)、肝癌〇fep3B、Huh-7和Huh-6)、膀胱癌和乳腺癌細胞 死亡率超過40% ;膠質(zhì)瘤、宮頸癌、肺癌細胞死亡率超過30% ;胃癌細胞死亡率超過20%。 上述結(jié)果提示Ml病毒作為抗腫瘤藥物效果最顯著的針對以下癌癥類型：胰腺癌、鼻咽癌、 前列腺癌和黑色素瘤；其次為：結(jié)直腸癌、肝癌、膀胱癌和乳腺癌；再其次為：膠質(zhì)瘤、宮頸 癌、肺癌；而最不顯著的為胃癌。
[0018] 鑒于Ml病毒屬于蓋塔相似病毒，其與蓋塔病毒同源性高達97. 8%，本領(lǐng)域技術(shù)人 員有理由認可，基于Ml病毒的抗腫瘤效果，蓋塔病毒也可類似地與Ml病毒起到相似的作用 和效果。
[0019] 進一步地，本發(fā)明提供了一種可以針對特定個體/腫瘤更為準確有效地給予治療 方案和治療藥物的方法，以及針對特定個體/腫瘤相關(guān)的藥物。
[0020] 發(fā)明人首次發(fā)現(xiàn)，所述的病毒適合用于治療ZAP低表達腫瘤或ZAP陰性腫瘤，優(yōu)選 用于治療ZAP低表達的實體瘤或ZAP陰性的實體瘤。
[0021] Ml病毒治療腫瘤的有效性，與腫瘤ZAP表達調(diào)控密切相關(guān)。Ml病毒的復(fù)制受到 ZAP的抑制，并且ZAP在多種腫瘤中低表達或陰性，Ml病毒可選擇性地治療ZAP低表達或 ZAP陰性的腫瘤/個體。
[0022] ZAP是鋅指CCCH型抗病毒蛋白1縮寫，其英文名是Zinc finger CCCH-type antiviral proteinl，它由zc3havl基因編碼。文獻報道細胞內(nèi)ZAP通過誘導(dǎo)RNA降解和 翻譯抑制的機制來抑制某些病毒的復(fù)制，比如埃博拉病毒和馬爾堡病毒，但ZAP對其他病 毒復(fù)制無抑制作用，例如水皰疹性口炎病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒和黃熱病病毒等。
[0023] 發(fā)明人發(fā)現(xiàn)Ml病毒能夠顯著在ZAP低表達/ZAP陰性的細胞株中引起細胞死亡， Ml病毒在荷瘤動物體內(nèi)富集于ZAP低表達/ZAP陰性的腫瘤組織，并抑制腫瘤生長，同時Ml 病毒抑制ZAP低表達/ZAP陰性的人離體活腫瘤組織的存活。
[0024] 發(fā)明人首次發(fā)現(xiàn)在多個不同種類腫瘤中，ZAP的表達量在腫瘤組織中低于癌旁非 瘤組織。臨床多種腫瘤病理標本的免疫組化分析表明，在69%的肝癌、52%的結(jié)直腸癌和 61 %的膀胱癌組織中ZAP表達水平顯著低于相對應(yīng)的癌旁非瘤組織。Ml病毒可用于選擇性 治療ZAP低表達/ZAP陰性的腫瘤。
[0025] 發(fā)明人的實驗結(jié)果首次證明Ml病毒的復(fù)制受到ZAP抑制，ZAP表達水平是Ml病毒 選擇性引起腫瘤細胞死亡和抑制腫瘤生長的決定因素。發(fā)明人的研究發(fā)現(xiàn)Ml病毒抗腫瘤 效果與ZAP的表達水平直接相關(guān)。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，敲低ZAP后的腫瘤細胞感染Ml病毒，腫瘤 細胞存活率較未敲低ZAP的細胞顯著降低。因此，作為一種可選的優(yōu)選治療方案，可以在給 予癌癥患者Ml病毒治療時，同時或預(yù)先給予ZAP抑制劑，以提高腫瘤對Ml病毒的敏感性。
[0026] 因此，為了進一步提高Ml病毒作為抗腫瘤藥物治療的有效率，在治療方案的選擇 中，可以首先判斷患者腫瘤的ZAP表達情況，再針對性地給予Ml病毒的治療方案，以此來提 高治療方案的有效性，避免無效給藥所造成的時間上的拖延和藥物濫用。例如，在給藥前先 測定患者腫瘤ZAP表達情況，如果是ZAP低表達或ZAP陰性的腫瘤，可直接給以Ml病毒治 療；如果是ZAP正常表達/ZAP高表達腫瘤，則可在Ml病毒給藥前或同時給予ZAP抑制劑 (例如ZAP表達或功能抑制劑，ZAP干擾片段，或者ZAP抗體等），以提高腫瘤對Ml病毒的 敏感性，提高治療有效性。腫瘤ZAP表達量的高低直接影響到Ml治療的有效性。ZAP表達 量越低的腫瘤越有利于Ml的治療效果。判斷某個體/腫瘤是否適于利用Ml進行治療，可 先檢測腫瘤ZAP的表達水平。判斷ZAP表達水平高低可以優(yōu)選但不限于以下方式 ：
[0027] ZAP低或高表達是指兩組（個）樣本之間ZAP mRNA或者蛋白質(zhì)數(shù)量比較后得出的 結(jié)論，如果一組（個）樣本比另外一組（個）ZAP mRNA或者蛋白質(zhì)數(shù)量少或多稱為該樣本 ZAP低或高表達；ZAP陰性是指樣本完全不表達ZAP mRNA或蛋白。用于ZAP mRNA和蛋白質(zhì) 的數(shù)量比較的樣本可以是腫瘤細胞和正常細胞、腫瘤組織與癌旁非瘤組織，或者Ml治療有 效與無效的腫瘤。
[0028] 作為一種可選的方式，腫瘤的ZAP高、低或陰性表達均指腫瘤組織與相應(yīng)癌旁非 瘤組織比較，ZAP mRNA和蛋白質(zhì)的數(shù)量多、少或者無表達。若前者的ZAP的mRN