一種用于熒光成像靶向納米探針的制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明主要涉及腫瘤檢測領域，具體是一種檢測腫瘤納米探針的制備方法。
【背景技術】
[0002]癌癥是世界上對人類健康和生命的威脅最嚴重的疾病之一，由于目前缺乏對晚期癌癥的有效的治療手段，所以早期腫瘤的發(fā)現和診斷對癌癥患者來說尤為重要，研宄表明若能盡早發(fā)現并及時采取治療可大大提高癌癥的治愈率。為了增大癌癥患者的治愈機率，我們急需發(fā)展新的腫瘤早期診斷方法和治療手段。
[0003]納米科學和技術的發(fā)展為腫瘤的早期診斷提供了一種強有力的條件，許多納米材料能用于細胞成像和癌癥治療。納米材料不僅能對癌癥患者體內的腫瘤進行高靈敏和特異性成像，而且還能將抗癌藥物精確輸送到腫瘤部位。目前，我們在以下三個方面的技術手段還不夠成熟:一是選擇適合用于生物成像納米材料；二是選擇合適的成像靶標(即靶向分子)；三是如何通過簡單方法將納米材料用于生物成像。我們在發(fā)展腫瘤的特異性成像劑上同樣遇到一些困難，比如:1)探針對腫瘤的靶向運輸；2)生物相容性和生物毒性；3)探針在體內穩(wěn)定性及有效的增強信號；4)足夠的成像方法和成像策略。
[0004]現在，發(fā)展腫瘤革E向性納米探針也存在著很大的挑戰(zhàn)。焚光成像(FluorescenceImaging)是一種很好的成像方式。量子點雖然有很強的熒光性能并且在腫瘤診斷工作中被廣泛地接受，但是它熒光時間相對較短且其中含有的重金屬元素具有一定的生物毒性。在細胞對量子點進行內吞時量子點的毒性和生物相容性還是未知的。近幾年，摻有稀上元素的發(fā)光羥基磷灰石成為了新一代的熒光成像造影劑。摻有稀土元素的發(fā)光羥基磷灰石比量子點在熒光方面更為有效。摻有稀土元素的發(fā)光羥基磷灰石具有較大的斯托克斯位移(藍光激發(fā)紅光發(fā)射)，更重要的是它具有很好的生物相容性，沒有生物毒性。
[0005]盡管我們在發(fā)展使用基于發(fā)光羥基磷灰石的熒光成像劑方面做出了很多努力，但是依舊存在很多難題。主要難題是缺少一種表面修飾材料，該材料不僅可以提高納米材料的穩(wěn)定性還可以為探針分子提供可控生物交聯的活性功能基團。傳統的用于提高發(fā)光羥基磷灰石納米材料穩(wěn)定性的表面修飾材料(如:pluronic F127)由于無法提供活性基團，從而導致發(fā)光羥基磷灰石無法特異性識別腫瘤細胞，從而降低了成像的效果。
[0006]維他命E聚乙二醇琥珀酸酯是一種表面修飾材料，該材料可用于提高納米材料的穩(wěn)定性。葉酸是一種常用的細胞靶向分子，它可與腫瘤細胞表面表達的葉酸受體進行特異性結合。研宄表明維他命E聚乙二醇琥珀酸酯可與葉酸通過共價鍵連接到一起，且連接后它也可作為表面修飾材料用于提高納米材料的穩(wěn)定性。
[0007]本發(fā)明基于發(fā)光羥基磷灰石的特性，提出一種利用維他命E聚乙二醇琥珀酸酯與葉酸修飾的維他命E聚乙二醇琥珀酸酯制備新型熒光探針的方法，此方法具有對設備要求低，操作簡單，制作周期短等優(yōu)點。

【發(fā)明內容】

[0008]本發(fā)明的目的在于提供了一種用于熒光成像靶向納米探針的制備方法，在維他命E聚乙二醇琥珀酸酯的端頭羥基通過化學方法共價連接了一個葉酸分子。通過薄膜水化法制備了一種基于發(fā)光羥基磷灰石的靶向納米探針。這種雙功能探針能夠用于腫瘤細胞的活細胞或者活體的腫瘤組織的靶向熒光成像，為腫瘤檢測提供便利。
[0009]本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現的。
[0010](一 ) 一種氨基化葉酸的制備方法，其步驟是:
[0011]I)稱取葉酸溶于二甲基亞砜，置于圓底燒瓶，備用；
[0012]2)稱取N-羥基琥珀酰亞胺和N，N’_ 二環(huán)己基碳二亞胺溶于二甲基亞砜中，備用；
[0013]3)將步驟2)處理好的混合溶液與步驟I)處理的溶液混合均勻后，加熱反應；
[0014]4)將步驟3)處理好的溶液過濾，除去反應副產物；
[0015]5)將步驟4)處理好的濾液與乙二胺混合后，加熱反應；
[0016]6)用大量乙腈將步驟5)中的氨基化葉酸沉淀出來；
[0017]7)用離心方法將氨基化葉酸收集起來，備用。
[0018]( 二)、葉酸修飾的維他命E聚乙二醇琥珀酸酯的制備方法，其步驟是:
[0019]I)稱取維他命E聚乙二醇琥珀酸酯溶解于二甲基亞砜中，置于圓底燒瓶，備用；
[0020]2)稱取N，N’ - 二環(huán)己基碳二亞胺和戊二酸溶于二甲基亞砜，備用；
[0021]3)將步驟2)處理好的混合溶液與步驟I)處理的溶液混合后，加熱反應；
[0022]4)將步驟3)反應好的溶液過濾，除去反應副產物，并將濾液轉移進入透析袋，以二甲基亞砜為透析液，透析除去反應剩余戊二酸；
[0023]5)將步驟4)處理后的溶液與氨基化葉酸溶液混合，加熱反應；
[0024]6)將步驟5)反應好的溶液轉移進透析袋，透析除去剩余氨基化葉酸以及二甲基亞砜；
[0025]7)將步驟6)處理好的樣品冷凍干燥，得到葉酸修飾的維他命E聚乙二醇琥珀酸酯。
[0026](三)一種利用維他命E聚乙二醇琥珀酸酯與葉酸修飾的維他命E聚乙二醇琥珀酸酯制備新型熒光探針的方法，其步驟是:
[0027]I)稱取維他命E聚乙二醇琥珀酸酯與葉酸修飾的維他命聚乙二醇琥珀酸酯溶于二氯亞砜中，備用；
[0028]2)稱取摻稀土元素發(fā)光羥基磷灰石溶于二氯亞砜中，備用；
[0029]3)將步驟I)與步驟2)處理好的溶液混合，備用；
[0030]4)將步驟3)處理好的溶液置于旋轉蒸發(fā)儀，將混合溶液中的二氯亞砜蒸出；
[0031]5)向步驟4)處理好的樣品中加入去離子水，攪拌；
[0032]6)將步驟5)處理好的樣品冷凍干燥，制成用于熒光成像的靶向探針。
[0033]所制得的靶向探針具有較好的熒光特性及腫瘤靶向的特點。
【具體實施方式】
[0034]下面結合實例對本發(fā)明作進一步說明。
[0035]實施例1
[0036]—種利用維他命E聚乙二