醇琥珀酸酯制備熒光探針的方法:
[0037]I)稱取維他命E聚乙二醇琥珀酸酯溶于二氯甲烷中，備用；
[0038]2)稱取發(fā)光羥基磷灰石，備用；
[0039]3)在45攝氏度下，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去混合液中二氯甲烷；
[0040]4)水化制得用于熒光成像的探針；
[0041]通過以上步驟得到的靶向探針具有長度為200nm左右，寬度為15nm左右的形貌；在405nm激發(fā)條件下發(fā)射617nm的焚光。
[0042]實(shí)施例2
[0043]—種利用維他命E聚乙二醇琥珀酸酯與葉酸修飾的維他命E聚乙二醇琥珀酸酯制備熒光探針的方法:
[0044]I)制備氨基化葉酸，備用；
[0045]2)制備葉酸修飾維他命E聚乙二醇琥珀酸酯，備用；
[0046]3)按照配比，將混合好的維他命E聚乙二醇琥珀酸酯與葉酸修飾的維他命E聚乙二醇琥珀酸酯加入圓底燒瓶中；
[0047]4)在45°C條件下，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去混合液中二氯甲烷；
[0048]5)水化制得用于熒光成像的靶向探針；
[0049]通過以上步驟得到的靶向探針具有長度為200nm左右，寬度為15nm左右的形貌；在405nm激發(fā)條件下發(fā)射615nm的焚光。
[0050]實(shí)施例3
[0051]雙功能腫瘤檢測探針用于腫瘤細(xì)胞的特異性熒光成像，其步驟是:
[0052]I)選擇人乳腺癌腫瘤細(xì)胞株MCF_7(購自)，其細(xì)胞表面都具有腫瘤標(biāo)志物葉酸受體的過表達(dá)。細(xì)胞用含有10%胎牛血清以及I %青霉素-鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基，在37°C，5%的二氧化碳環(huán)境中傳代培養(yǎng)，傳代比例為1: 3。
[0053]2)將MCF-7細(xì)胞鋪在中央粘好蓋玻片的培養(yǎng)皿中，在37°C，5%的二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)24-36小時，達(dá)到70%細(xì)胞匯合度后，PBS緩沖溶液洗3遍，換為不完全DMEM培養(yǎng)基(不含葉酸)，把制備好的靶向探針加入細(xì)胞至終濃度為250 μ g/mL，37°C孵育I小時，在共聚焦熒光顯微鏡下檢測器熒光，并用沒有靶向的探針作為對照。
[0054]3)熒光檢測發(fā)現(xiàn)靶向探針在MCF-7細(xì)胞表面，具有很明顯的紅色熒光信號(圖)，而沒有靶向的探針不能在MCF-7細(xì)胞上產(chǎn)生明顯熒光信號，說明上述制備的多功能探針可以用于腫瘤細(xì)胞的特異性靶向識別和熒光成像。
【主權(quán)項】
1.用于熒光成像的靶向納米探針的制備方法，其特征在于在維他命E聚乙二醇琥珀酸酯的端頭羥基共價連接了一個葉酸分子，通過薄膜水化法制備了一種基于發(fā)光羥基磷灰石的靶向納米探針，包括以下步驟: 步驟1、一種氨基化葉酸的制備: 1)稱取葉酸溶于二甲基亞砜，置于圓底燒瓶，備用； 2)稱取N-羥基琥珀酰亞胺和N，N’- 二環(huán)己基碳二亞胺溶于二甲基亞砜中，備用； 3)將步驟2)處理好的混合溶液與步驟I)處理的溶液混合均勻后，加熱反應(yīng)； 4)將步驟3)處理好的溶液過濾，除去反應(yīng)副產(chǎn)物； 5)將步驟4)處理好的濾液與乙二胺混合后，加熱反應(yīng)； 6)用大量乙腈將步驟5)中的氨基化葉酸沉淀出來； 7)用離心方法將氨基化葉酸收集起來，備用； 步驟2、葉酸修飾的維他命E聚乙二醇琥珀酸酯的制備: 1)稱取維他命E聚乙二醇琥珀酸酯溶解于二甲基亞砜中，置于圓底燒瓶，備用； 2)稱取N，N’- 二環(huán)己基碳二亞胺和戊二酸溶于二甲基亞砜，備用； 3)將步驟2)處理好的混合溶液與步驟I)處理的溶液混合后，加熱反應(yīng)； 4)將步驟3)反應(yīng)好的溶液過濾，除去反應(yīng)副產(chǎn)物，并將濾液轉(zhuǎn)移進(jìn)入透析袋，以二甲基亞砜為透析液，透析除去反應(yīng)剩余戊二酸； 5)將步驟4)處理后的溶液與氨基化葉酸溶液混合，加熱反應(yīng)； 6)將步驟5)反應(yīng)好的溶液轉(zhuǎn)移進(jìn)透析袋，透析除去剩余氨基化葉酸以及二甲基亞砜； 7)將步驟6)處理好的樣品冷凍干燥，得到葉酸修飾的維他命E聚乙二醇琥珀酸酯； 步驟3、一種利用維他命E聚乙二醇琥珀酸酯與葉酸修飾的維他命E聚乙二醇琥珀酸酯制備新型熒光探針的方法，其步驟是: 1)稱取維他命E聚乙二醇琥珀酸酯與葉酸修飾的維他命聚乙二醇琥珀酸酯溶于二氯亞砜中，備用； 2)稱取摻稀土元素發(fā)光羥基磷灰石溶于二氯亞砜中，備用； 3)將步驟I)與步驟2)處理好的溶液混合，備用； 4)將步驟3)處理好的溶液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，將混合溶液中的二氯亞砜蒸出； 5)向步驟4)處理好的樣品中加入去離子水，攪拌； 6)將步驟5)處理好的樣品冷凍干燥，制成用于熒光成像的靶向探針； 所制得的靶向探針具有較好的熒光特性及腫瘤靶向的特點(diǎn)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述的使用的維他命E聚乙二醇琥珀酸酯和二環(huán)己基碳二亞胺的分子比為1:1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述的使用的N-羥基琥珀酰亞胺和二環(huán)己基碳二亞胺的分子比為1:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述的N-羥基琥珀酰亞胺和二環(huán)己基碳二亞胺反應(yīng)，較合適的溫度為50°C。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述的使用的維他命E聚乙二醇琥珀酸酯修飾的N-羥基琥珀酰亞胺和葉酸修飾的氨基的分子比為1: 2。
【專利摘要】本發(fā)明主要涉及腫瘤檢測領(lǐng)域，具體是一種檢測腫瘤納米探針的制備方法。改方法包括以下步驟：(1)一種氨基化葉酸的制備；(2)葉酸修飾的維他命E聚乙二醇琥珀酸酯的制備；(3)一種利用維他命E聚乙二醇琥珀酸酯與葉酸修飾的維他命E聚乙二醇琥珀酸酯制備新型熒光探針。此方法具有對設(shè)備要求低，操作簡單，制作周期短等優(yōu)點(diǎn)。該方法制備出具有熒光及腫瘤靶向功能的雙功能納米探針，這種雙功能納米探針能夠用于腫瘤細(xì)胞或活體的腫瘤靶向的熒光成像檢測。
【IPC分類】A61K49-00
【公開號】CN104857530
【申請?zhí)枴緾N201510292497
【發(fā)明人】潘杰, 汪麗麗, 張矩辰, 劉偉嬌
【申請人】天津工業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年8月26日
【申請日】2015年5月27日