免疫調(diào)節(jié)蛋白的制作方法
【專利說明】免疫調(diào)節(jié)蛋白 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及具有免疫調(diào)節(jié)功能的工程化蛋白，及其用于治療自身免疫性疾病或炎 性疾病的醫(yī)療用途。特別地，所述工程化蛋白可用作靜脈內(nèi)免疫球蛋白（IVIG)的替代物。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 自身免疫性疾病和炎性疾病是高發(fā)病率和死亡率的原因。在2003年，自身免疫性 疾病是75歲以下的全部年齡組中第6位最常見死亡的根本原因。一種重要的治療方式為 靜脈內(nèi)免疫球蛋白（IVIG)或IgG。最初，開發(fā)了來自人血漿的免疫球蛋白產(chǎn)品以治療免疫 缺陷。然而，目前使用了 70%處方IVIG用于治療自身免疫狀況或炎性狀況。全世界消耗的 IVIG從1980年的每年300kg增加到2010年的每年100公噸。根據(jù)漫長和昂貴的制造工 藝，從約3, 000匿名捐贈者匯集的血漿中衍生得到IVIG。對于捐贈者和捐贈血漿的病毒的 廣泛篩選的需求產(chǎn)生了高成本。考慮到增加的需求，以及IVIG生產(chǎn)的嚴(yán)格調(diào)控，可能發(fā)生 IVIG的短缺。IVIG制品可受制于不充分無菌度、雜質(zhì)的存在和批次間的變化。它們在其免 疫球蛋白A含量方面可極大地變化，并且IgA可在IgA缺陷的接受者中引起變態(tài)反應(yīng)或過 敏反應(yīng)。使它們不適合某些患者。不得不向患者給予非常大劑量的IVIG，典型地2克每公 斤體重，且這可在一些患者中引起不良反應(yīng)。鑒于這些限制，需要用于IVIG的界定的替代 物。
[0004] 盡管IVIG作用的機制還不清楚，源自IVIG的Fc片段可治愈罹患特發(fā)性血栓性 紫癜（ITP)的兒童（Debre M等，1993)。盡管所涉及的確切受體被激烈爭論（Samuelsson A 等，2001 ;Bazin R 等，2006 ;Crow. A. R 等，2003 ;Leontyev D 等，2012 ;Siragam. V 等，2006)且可因為疾?。▽υ摷膊∈褂昧?IVIG)而變化（Araujo L. M等，2011 ;Anthony R. Μ.等，2011)，認(rèn)為IgG的Fe部分與在單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的抑制性和活化型 Fcy R兩者之間的相互作用是重要的。已證明抑制性Fc受體Fcy RIIb對于IVIG在ITP小 鼠模型中的保護性作用是必需的（Samuelsson等，2001)。還已經(jīng)證明在多種疾病中活化型 Fc受體Fc γ RIIIa的作用（Mekhaiel等，2011b綜述）。盡管近期工作已證明在小鼠模型中 FcRn不參與改善ITP (Crow等，2011)，還已經(jīng)假設(shè)FcRn負(fù)責(zé)維持Fc在血漿中的長半衰期 (Roopenian和Akilesh, 2007)。Fc部分不僅與Fc受體相互作用，而且與某些凝集素相互作 用。已知IVIG通過Fc-聚糖的末端唾液酸與B淋巴細(xì)胞上的⑶22凝集素結(jié)合（Siglec-2) (Seite J. F等，2010)，且最近研宄證明，由于唾液酸化Fe與DC上的人凝集素受體DC-SIGN 相互作用，唾液酸化Fc是小鼠關(guān)節(jié)炎模型中IVIG抗炎作用的原因 （Anthony R.M等，2011)。
[0005] IVIG還可通過在其中注射的IVIG首先在患者中形成一類免疫復(fù)合物的多步模型 起作用（Clynes 等，2005 ;Siragam 等，2005, 2006 ;Machino 等，2012)。形成了這些免疫復(fù) 合物之后，它們與這些受體相互作用以介導(dǎo)有助于減少自身免疫性疾病或炎性狀態(tài)嚴(yán)重性 的抗炎性作用（Siragam等，2006)。通過抗獨特型相互作用（Machino等，2010 ;Machino 等，2012 ;Roux 和 Tankersley, 1990 ;Teeling 等，2001)或通過 Fe 的共價相互作用（Yoo 等，2003)在IVIG中形成了 Fc的多聚體。假定IgG多聚體顯示了與以上受體結(jié)合的更高 的總親和力（avidity)并通過交聯(lián)所述受體的性質(zhì)誘導(dǎo)了不能被Fc單體所誘導(dǎo)的保護性 信號。這通過免疫復(fù)合物（IC)在小鼠中逆轉(zhuǎn)ITP (Bazin等，2006)并通過觀察IC通過 Fe YRIIb增強不成熟樹突細(xì)胞的致耐受性來促進狼瘡的減輕（Zhang等，2011)所支持?？?市購獲得的IVIG中多聚體IgG和/或唾液酸化IgG的比例極其低（分別〈1 %和5% )，其 可以是需要施用很大量的原因（Nimmerjahn和Ravetch, 2007)。
[0006] 其他提出的IVIG作用機制為獨特型-抗獨特型網(wǎng)絡(luò)的修復(fù)；由IVIG中的特異性 抗體抑制或中和細(xì)胞因子；阻斷在白細(xì)胞上的粘附分子與血管內(nèi)皮的結(jié)合；抑制補體在靶 組織中的攝入；中和微生物毒素；由IVIG中的抗Fas抗體阻斷Fas配體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡； 在高濃度IVIG下抗Fas抗體誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；由IVIG中的抗Siglec-9抗體的嗜中性粒細(xì) 胞的細(xì)胞凋亡；使FcRn受體飽和以增強自身抗體的消除；在效應(yīng)物巨噬細(xì)胞上誘導(dǎo)抑制性 Fc γ RIIb受體沖和B細(xì)胞的生長因子，諸如B細(xì)胞活化因子；抑制T細(xì)胞增殖反應(yīng)；Treg 細(xì)胞群的擴增、活化或兩者；抑制樹突細(xì)胞的分化和成熟；增強"致敏"樹突細(xì)胞的分化和 成熟（在 Ballow, 2011 ;Mekhaiel 等，2011b 中綜述）。
[0007] 已經(jīng)提出了用于在治療自身免疫性疾病中使用和/或作為IVIG替代化合物的 重組蛋白。US 2011/0081345(Moore)公開了在治療自身免疫性疾病中可以是有用的單鏈 Fc(scFc)蛋白，所述單鏈Fc蛋白的每分子具有一個Fc單元，包含兩個連接的Fc結(jié)構(gòu)域氨 基酸鏈。US 2004/0062763 (Temple University ;Mosser)公開了使用多價 Ab 或其部分以 連接Fe YRI來上調(diào)IL-10的產(chǎn)生，以治療自身免疫紊亂。劑可以是偶聯(lián)在一起的或提供于 單個重組肽中的兩種或更多種Fc片段。US 2008/0206246(The Rockefeller University ; Ravetch)公開了包含至少一個唾液酸化的IgG Fe區(qū)域的多肽，和其用作IVIG替代化合物 的用途。盡管在這些文獻中公開的化合物可靶向Fc受體，包含F(xiàn)c單體或二聚體的化合物可 不以有效地或完全有效地作為IVIG替代化合物的足夠的總親和力來結(jié)合Fc受體。因此， 它們不是IVIG的多聚體級分的適合仿生物。在這些文獻中沒有公開更高等級多聚體。也 沒有公開工程化作為IVIG替代化合物是有活性的更高等級多聚體的任何方式。
[0008] US 2010/0239633 (University of Maryland, Baltimore ;Strome)公開了包含多 個連接的Fe部分的IVIG替代化合物。設(shè)想使用了 IgM的C μ 4結(jié)構(gòu)域和J鏈的星形排列 以實現(xiàn)聚合。然而，沒有描述工作實例，且在此處報道的計算機模擬表明，示例性分子將不 會有效地聚合和/或Fc部分將不會被排列用于有效結(jié)合Fc或其他受體。此外，包含多于 一個的不同多肽鏈的生物復(fù)合物可更難以均勻地制造，因為不是所有的多肽亞單位可以以 穩(wěn)定地并可預(yù)測的方式相互作用。例如，產(chǎn)生包含正確比例的輕鏈和重鏈的活性完整抗體 的表達抗體重鏈和輕鏈的細(xì)胞系，還可產(chǎn)生不含輕鏈連接物的治療上無活性重鏈二聚體或 半聚體（halfmer)分子。
[0009] US 2010/0239633中還提出了線性結(jié)構(gòu)，其中通過相同的Fc結(jié)構(gòu)域氨基酸鏈之間 的配對使單個氨基酸鏈二聚化，因此生成了 Fc區(qū)域。例如，鉸鏈區(qū)可在兩個單個氨基酸鏈 之間形成鏈間二硫鍵。然而，如在US 2010/0239633的圖11和圖12中圖解的，在多個Fc 氨基酸鏈串聯(lián)地連接的情況下，可存在多個不同方式，其中這些鏈可以配對。因此，將不能 預(yù)期具有可靠和可預(yù)測的性質(zhì)的一致產(chǎn)品。提出了包括來自IgE的末端重鏈結(jié)構(gòu)域以防止 此"拉鏈"效應(yīng)。然而，分子與IgE受體的結(jié)合可具有不希望的結(jié)果，包括過敏性休克或其 他變態(tài)反應(yīng)的風(fēng)險。
[0010] US 2010/0239633還提出制造簇分子，其中多聚化區(qū)域諸如IgG2a鉸鏈或異亮氨 酸拉鏈，引起氨基酸鏈二聚化或多聚化，因此使Fe結(jié)構(gòu)域氨基酸鏈的對聯(lián)合在一起以形成 功能性Fe單元。在后續(xù)的研宄中，Jain等（2012)描述了重組蛋白的制備，其中人IgG2鉸 鏈序列或異亮氨酸拉鏈融合到小鼠 IgG2a。作者報道了，多聚化區(qū)域中的任一個引起了同源 二聚體（即此處稱為單體的單個功能Fe單元）和多聚體的形成。這些蛋白的多聚級分在 治療ITP小鼠模型或膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎小鼠模型中具有一些功效。然而，大多數(shù)包含IgG2鉸 鏈的制備的蛋白為單體或作為二聚體或三聚體存在。具有未知四級結(jié)構(gòu)的更高等級寡聚體 僅占小部分。在包含異亮氨酸拉鏈的蛋白中，更高等級多聚體的比例更低。更高等級多聚 體在大小上表現(xiàn)不均一，且其結(jié)構(gòu)、包括附接在N297的聚糖的性質(zhì)是未知的。考慮到這些 多聚體的一些或全部在產(chǎn)生的蛋白中的低比例，分離它們用于治療用途將使得大量的浪費 不可避免，且表現(xiàn)出不太可能在商業(yè)上可行。
[0011] 為了治療自身免疫性疾病和炎性疾病，對于確定結(jié)構(gòu)的化合物存在需求，所述化 合物有效靶向IVIG的生物活性潛在的適合機制。
[0012] 該說明書中的在先公布文獻的列表或討論將不被認(rèn)為承認(rèn)該文獻為本領(lǐng)域的狀 態(tài)的一部分或為公知常識。
[0013] 發(fā)明概述
[0014] 本發(fā)明的第一方面提供了用于治療哺乳動物受試者的自身免疫性疾病或炎性疾 病的方法，所述方法包括：
[0015] 向哺乳動物受試者施用有效量的多聚蛋白，所述多聚蛋白包含5個、6個或7個多 肽單體單元；
[0016] 其中每個多肽單體單元包含F(xiàn)e受體結(jié)合部分，所述Fe受體結(jié)合部分包含2個免 疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)；
[0017] 其中每個免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)包含半胱氨酸殘基，所述半胱氨酸殘基通過二 硫鍵連接到毗鄰多肽單體單元的免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)的半胱氨酸殘基；
[0018] 其中多聚蛋白不包含另外的免疫調(diào)節(jié)部分，或當(dāng)施用到哺乳動物受試者時引起抗 原特異性免疫抑制的抗原部分。
[0019] 本發(fā)明的第二方面提供了用于治療哺乳動物受試者的自身免疫性疾病或炎性疾 病的方法，所述方法包括：
[0020] 向哺乳動物受試者施用有效量的多聚蛋白，所述多聚蛋白由5個、6個或7個多肽 單體單元組成；
[0021] 其中每個多肽單體單元由Fe受體結(jié)合部分組成，所述Fe受體結(jié)合部分由兩個免 疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)和任選地連接兩個免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)為單鏈Fe的多肽接頭 (linker)組成；且
[0022] 其中每個免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)包含半胱氨酸殘基，所述半胱氨酸殘基通過二 硫鍵連接到毗鄰多肽單體單元的免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)的半胱氨酸殘基。
[0023] 本發(fā)明的第三方面提供了用于治療哺乳動物受試者的自身免疫性疾病或炎性疾 病的方法，所述方法包括：
[0024] 向哺乳動物受試者施用有效量的多聚蛋白，所述多聚蛋白由5個、6個或7個多肽 單體單元組成；
[0025] 其中每個多肽單體單元由Fe受體結(jié)合部分和尾片段區(qū)（tailpiece region)組 成；
[0026] 其中Fe受體結(jié)合部分由兩個免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)和任選地連接兩個免疫球 蛋白G重鏈恒定區(qū)為單鏈Fe的多肽接頭組成；
[0027] 其中每個修飾的人免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)包含半胱氨酸殘基，所述半胱氨酸殘 基通過二硫鍵連接到毗鄰多肽單體單元的修飾的人免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)的半胱氨酸 殘基；且
[0028] 其中尾片段區(qū)融合到多肽單體單元的兩個修飾的人免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)的 每個并促進單體單元組裝成聚合體。
[0029] 本發(fā)明的第四方面提供了多聚蛋白，所述多聚蛋白包含5個、6個或7個多肽單體 單元；
[0030] 其中每個多肽單體單元包含F(xiàn)e受體結(jié)合部分，所述Fe受體結(jié)合部分包含兩個免 疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)；
[0031] 其中每個免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)包含半胱氨酸殘基，所述半胱氨酸殘基通過二 硫鍵連接到毗鄰多肽單體單元的免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)的半胱氨酸殘基；
[0032] 其中，多聚蛋白不包含另外的免疫調(diào)節(jié)部分，或當(dāng)向哺乳動物受試者施用時引起 抗原特異性免疫抑制的抗原部分；
[0033] 其中每個多肽單體單元不包含融合到兩個免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)的每個的尾 片段區(qū)。
[0034] 本發(fā)明的第五方面提供了多聚蛋白，所述多聚蛋白由5個、6個或7個多肽單體單 元組成；
[0035] 其中每個多肽單體單元由Fe受體結(jié)合部分組成，所述Fe受體結(jié)合部分由兩個免 疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)和任選地連接兩個免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)為單鏈Fe的多肽接頭 組成；且
[0036] 其中每個免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)包含半胱氨酸殘基，所述半胱氨酸殘基通過二 硫鍵連接到毗鄰多肽單體單元的免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)的半胱氨酸殘基。
[0037] 本發(fā)明的第六方面提供了核酸分子，所述核酸分子包含編碼如根據(jù)本發(fā)明第四或 第五方面定義的多聚蛋白的多肽單體單元的編碼部分。
[0038] 本發(fā)明的另外方面為包含本發(fā)明第六方面的核酸分子的表達載體、包含表達載體 的宿主細(xì)胞、和包含本發(fā)明第四或第五方面的多聚蛋白的治療組合物。
[0039] 還設(shè)想了相應(yīng)于本發(fā)明第一方面至第三方面的治療方法的醫(yī)療用途。
[0040] 附圖簡述
[0041] 圖1 :六聚體Fe和結(jié)構(gòu)表征。A.顯示了一個單體和其毗鄰單體之間形成的Cys309 和Cys360(尾片段）二硫鍵（disulphide linkage)的六聚體Fe模型（左圖）。輕敲模式 原子力顯微術(shù)圖像（右手圖）揭示了與六聚體相一致的桶形、六倍對稱復(fù)合物。在更小的 掃描尺寸下（兩幅右手圖的下圖），顯示這些復(fù)合物直徑為約20nm(在下圖中的比例尺為 50nm)。B.從哺乳動物細(xì)胞系產(chǎn)生的六聚體Fe可通過體積排阻色譜法作為約312kDa的分 子被檢測到（高亮的痕跡為六聚體）。還檢測到了小比例的二聚體。
[0042] 圖2 :六聚體Fe與人和小鼠 Fe γ受體（Fe γ R)的結(jié)合。將滴定量（50-0. 3nM)的 Fe蛋白包被到ELISA孔上。使用辣根過氧化物酶（HRP)綴合的抗GST抗體可視化被如所示 的由人或小鼠谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST)-融合的Fe γ R的結(jié)合。值代表一式三份的確定 值。誤差線為在平均值附近的標(biāo)準(zhǔn)誤差（SE)。如在Mekhaiel等，2011a中所描述的，抗原 融合的Fc蛋白幾乎不與Fc受體結(jié)合。
[0043] 圖3 :六聚體Fc與人⑶19+人B淋巴細(xì)胞的結(jié)合。特征化流式細(xì)胞術(shù)圖顯示了通過 其前向角和側(cè)向角散射的圖形（左圖）所代表的人白細(xì)胞的不同群體。對以抗人CD19-FITC 染色的單個CD19+B淋巴細(xì)胞（加框的，中間圖片）門控并調(diào)查了與六聚體Fc的結(jié)合（右 圖）。通過右邊最遠(yuǎn)的標(biāo)記線（箭頭所指的六-Fe)表示50 μ g六-Fc與⑶19+B細(xì)胞的結(jié) 合。用FcRL5特異性單克隆抗體509F6 (箭頭所指的六-Fe+阻斷FcRL5的mAb 509F6)對 細(xì)胞的在先孵育使六聚體Fe的結(jié)合脫落，表明FcRL5是六聚體Fe結(jié)合B細(xì)胞的部分原因。
[0044] 圖4 :對Fe蛋白的補體結(jié)合分析。通過ELISA確定的Clq(左圖）和C5_9(右圖） 對Fe融合物的沉積。每個點代表對在給定組內(nèi)的每個小鼠雙重孔的平均光密度（+/-SD)。 顯示了來自三個重復(fù)實驗中的一個實驗的數(shù)據(jù)。
[0045] 圖5 :六聚體Fe蛋白在ITP的小鼠模型中保護免受血小板損失。用六-Fc、 IVIG(GammaGard)或PBS腹腔（i.p.)注射了 Balb/C小鼠。一小時以后，在所有小鼠中誘導(dǎo) 了 ITP。在處理之后示出的時間點計算了血小板。
[0046] 本發(fā)明的優(yōu)選實施方案的詳述
[0047] 根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供了用于治療哺乳動物受試者的自身免疫性疾病或炎 性疾病的方法。通過施用包含5個、6個或7個多肽單體單元的多聚蛋白治療受試者；其中 每個多肽單體單元包含F(xiàn)e受體結(jié)合部分，所述Fe受體結(jié)合部分包含兩個免疫球蛋白G重 鏈恒定區(qū)。
[0048] 術(shù)語"免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)"意指天然免疫球蛋白G重鏈區(qū)或其變體或片段。 Fe受體結(jié)合部分典型地包含免疫球蛋白G的Fe部分、或其片段或變體。術(shù)語"Fc部分"包 括通過酶木瓜蛋白酶的有限蛋白水解獲得的IgG分子的片段，所述木瓜蛋白酶在IgG的鉸 鏈區(qū)起作用。以此方式獲得Fe部分包含兩個相同的二硫鍵連接的肽，所述肽包含IgG的 重鏈CH2和CH3結(jié)構(gòu)域，也被分別稱為C γ 2和C γ 3結(jié)構(gòu)域。兩個肽通過在肽的N端部分 中半胱氨酸殘基之間的兩個二硫鍵連接。對于IgG，描述的二硫鍵的排列屬于天然人抗體。 盡管在本發(fā)明的上下文中此類抗體可以是適合的，一些變化可存在于其他哺乳動物物種的 抗體之間。在鳥類、爬行動物和兩棲動物中也發(fā)現(xiàn)了抗體，且它們同樣地可以是合適的。在 例如 Ellison 等（1982)NUCLEIC ACIDS RES. 10:4071-4079 中公開了人 Fe IgG 的核苷酸序 列和氨基酸序列。在例如Bourgois等（1974)EUR. J.BI0CHEM. 43:423-435中公開了小鼠 Fe IgG2a的核苷酸序列和氨基酸序列。免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)可典型地通過重組表達技 術(shù)產(chǎn)生，且如在天然抗體中發(fā)生的，作為單體單元通過二硫鍵相締合?？蛇x地，兩個恒定區(qū) 可產(chǎn)生作為具有中間接頭區(qū)的單氨基酸鏈，即作為典型地還通過重組表達技術(shù)產(chǎn)生的單鏈 Fe (seFe)。在US 2011/0081345中描述了 scFc分子，包括具有以下從N端到C端的一般結(jié) 構(gòu)的實例：鉸鏈-CH2-CH3-接頭-鉸鏈-CH2-CH3。
[0049] 典型地，每個免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)包含哺乳動物重鏈恒定區(qū)，優(yōu)選地人重鏈 恒定區(qū)的氨基酸序列、或其變體。適合的人IgG亞型是IgGl。
[0050] Fe受體結(jié)合部分可包含多于免疫球蛋白的Fe部分。例如，它可包括在天然免疫球 蛋白中的CHl與CH2結(jié)構(gòu)域之間出現(xiàn)的免疫球蛋白的鉸鏈區(qū)。對于某些免疫球蛋白，鉸鏈 區(qū)對于與Fe受體的結(jié)合是必需的。優(yōu)選地，F(xiàn)e受體結(jié)合部分缺少CHl結(jié)構(gòu)域和重鏈可變 區(qū)結(jié)構(gòu)域（VH)。與相應(yīng)的免疫球蛋白的Fe部分相比，可在C端和/N端截短Fe受體結(jié)合部 分。因此，此Fe受體結(jié)合部分是Fe部分的"片段"。
[0051] 憑借包含半胱氨酸殘基的各個免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)形成了多聚蛋白，所述半 胱氨酸殘基通過二硫鍵連接到毗鄰多肽單體單元的免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)的半胱氨酸 殘基。由于IgM和IgA天然是聚合體，而IgG天然是單體，基于IgG重鏈恒定區(qū)的單體單 元形成聚合體的能力可通過修飾IgG重鏈恒定區(qū)的部分使其更加類似于IgM或IgA的相 應(yīng)部分來提高。適合地，每個免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)或其變體是包含含有根據(jù)EU編號系 統(tǒng)在309位置上的半胱氨酸殘基、并優(yōu)選地還包含在310位置上的亮氨酸殘基的氨基酸序 列的 IgG 重鏈恒定區(qū)。在 Kabat EA 等，1983Sequences of proteins of immunological interest. US Department of Health and Human Services, National Institutes of Health, Washington DC 中描述了用于 IgG 的 EU 編號系統(tǒng)。Sorensen 等（1996) J Tmmunol 156:2858-2865中描述了在包含IgM尾片段的人IgG分子中Leu 309突變?yōu)镃ys 309,以促 進聚合體形成。Leu 309通過序列同源性相應(yīng)于在IgM的Cy 3結(jié)構(gòu)域的Cys 414和在IgA 的Ca 2結(jié)構(gòu)域中的Cys 309。（注意，在IgM和IgA或IgG類別之間氨基酸殘基的編號不 同。）其他的突變也可以是有利的。
[0052] 適合地，每個多肽單體單元包含融合到兩個免疫球蛋白G重鏈恒定區(qū)中每個的尾 片段區(qū)；其中每個多肽單體單元的尾片段區(qū)有助于單體單元組裝成聚合體。典型地，尾片段 區(qū)融合到兩個免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)中每個的C端。適合地，尾片段區(qū)是IgM或IgA尾片 段、或其片段或變體。這些尾片段分別是IgM的C μ 4結(jié)構(gòu)域或IgA的C a 3結(jié)構(gòu)域的最末 的部分。
[0053] 在描述一個區(qū)域為融合到另一個區(qū)域的C端的情況下，前面的區(qū)域可直接地融合 到后面區(qū)域的C端，或它可