移植用人工真皮及其制造方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及移植用人工真皮及其制造方法。
【背景技術】
[0002] 難治性皮膚潰瘍的原因有糖尿病、動脈不全、靜脈不全、褥瘡、外傷等。特別是近年 來，伴隨著糖尿病患者的增加，糖尿病的合并癥之一即糖尿病性皮膚潰瘍一味地增加。該難 治性皮膚潰瘍即使進行保守的治療等治療也不會治愈，大多需要皮瓣移植術或四肢切斷術 等侵襲性大的手術。
[0003]目前，作為其治療之一，正在進行使用以膠原等生物降解性材料作為主要成分的 人工真皮的治療。該人工真皮在真皮再生時作為支架起作用。其結果是，通過來自移植床 的成纖維細胞及血管的侵入及增殖而形成真皮成分（真皮樣肉芽組織），隨著患者自身的 擬真皮的再生，構成人工真皮的生物降解性材料被降解、吸收。
[0004] 通過將人工真皮的基于生物降解性材料構成的創(chuàng)傷接觸層制成多孔質(zhì)結構，能夠 促進該層的基于自身組織的置換。已知有在這樣的創(chuàng)傷接觸層上層疊有水蒸汽透過調(diào)節(jié)層 等的人工皮膚（參照日本特開平5-184662號公報及日本特開平5-285211號公報）。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 發(fā)明所要解決的課題
[0006] 然而，日本特開平5-184662號公報及日本特開平5-285211號公報等中記載的以 往的具有多孔質(zhì)結構的人工皮膚雖然在皮膚缺損部具有真皮樣組織（肉芽樣組織）的形成 能力，但期望真皮樣組織（肉芽樣組織）的形成能力更優(yōu)異的人工真皮。
[0007] 因此，本發(fā)明的目的在于提供皮膚缺損部的真皮樣組織（肉芽樣組織）的形成能 力優(yōu)異的移植用人工真皮。
[0008] 此外，本發(fā)明的其他目的在于提供所述移植用人工真皮的制造方法。
[0009] 用于解決課題的方案
[0010] 本發(fā)明人們?yōu)榱私鉀Q上述課題，對人工真皮繼續(xù)進行了深入研宄，結果發(fā)現(xiàn)，通過 將包含基于生物降解性材料構成的多孔質(zhì)片材的創(chuàng)傷接觸層的多孔質(zhì)制成特定的形狀，從 而人工真皮發(fā)揮優(yōu)異的真皮樣組織（肉芽樣組織）的形成能力，由此完成本發(fā)明。
[0011] 本發(fā)明的移植用人工真皮具有創(chuàng)傷接觸層，所述創(chuàng)傷接觸層包含基于生物降解性 材料構成的多孔質(zhì)片材，且上述多孔質(zhì)片材滿足下述的式子。
[0012] 式：X2/X1 彡 0.8
[0013] 上述多孔質(zhì)片材中，以相同長度繪制與創(chuàng)傷接觸面平行的直線和垂直的直線時， Xl為上述平行的直線與氣孔的壁的交點數(shù)，X2為上述垂直的直線與氣孔的壁的交點數(shù)。
[0014] 本發(fā)明的移植用人工真皮的制造方法是制造本發(fā)明的移植用人工真皮的方法，在 制造上述多孔質(zhì)片材時，包含將生物降解性材料的水溶液冷凍的工序。
[0015] 發(fā)明效果
[0016] 本發(fā)明的移植用人工真皮通過將多孔質(zhì)片材的多孔質(zhì)制成特定的形狀，從而在皮 膚缺損部具有優(yōu)異的真皮樣組織（肉芽樣組織）的形成能力。此外，本發(fā)明的移植用人工 真皮的制造方法可以采用公知的制造手段，簡便地制造本發(fā)明的移植用人工真皮。
【附圖說明】
[0017] 圖1是將實施例1中由基因重組明膠制作的多孔質(zhì)片材進行曙紅染色，用光學顯 微鏡觀察內(nèi)部截面結構而得到的圖像。
[0018] 圖2是將實施例1中由基因重組明膠制作的多孔質(zhì)片材進行曙紅染色，用光學顯 微鏡觀察內(nèi)部截面結構而得到的圖像（1，500 ymX 1，500 ym的放大圖）。
[0019] 圖3是使用實施例1中由基因重組明膠制作的多孔質(zhì)片材進行真皮樣組織（肉芽 樣組織）形成試驗，通過HE染色通過組織學方式觀察到的圖像。
[0020] 圖4是將實施例2中由基因重組明膠制作的多孔質(zhì)片材進行曙紅染色，用光學顯 微鏡觀察內(nèi)部截面結構而得到的圖像。
[0021] 圖5是將實施例2中由基因重組明膠制作的多孔質(zhì)片材進行曙紅染色，用光學顯 微鏡觀察內(nèi)部截面結構而得到的圖像（1，500 ymX 1，500 ym的放大圖）。
[0022] 圖6是使用實施例2中由基因重組明膠制作的多孔質(zhì)片材進行真皮樣組織（肉芽 樣組織）形成試驗，通過HE染色通過組織學方式觀察到的圖像。
[0023] 圖7是將比較例1中由基因重組明膠制作的多孔質(zhì)片材進行曙紅染色，用光學顯 微鏡觀察內(nèi)部截面結構而得到的圖像。
[0024] 圖8是將比較例1中由基因重組明膠制作的多孔質(zhì)片材進行曙紅染色，用光學顯 微鏡觀察內(nèi)部截面結構而得到的圖像（1，500 ymX 1，500 ym的放大圖）。
[0025] 圖9是使用比較例1中由基因重組明膠制作的多孔質(zhì)片材進行真皮樣組織（肉芽 樣組織）形成試驗，通過HE染色通過組織學方式觀察到的圖像。
[0026] 圖10是將比較例2的多孔質(zhì)片材進行曙紅染色，用光學顯微鏡觀察內(nèi)部截面結構 而得到的圖像。
[0027] 圖11是將比較例2的多孔質(zhì)片材進行曙紅染色，用光學顯微鏡觀察內(nèi)部截面結構 而得到的圖像（1，500 y mX 1，500 y m的放大圖）。
[0028] 圖12是使用比較例2的多孔質(zhì)片材進行真皮樣組織（肉芽樣組織）形成試驗，通 過HE染色通過組織學方式觀察到的圖像。
【具體實施方式】
[0029] 以下，對本發(fā)明的實施方式進行說明。另外，這些說明及實施例是例示本發(fā)明的， 并不限制本發(fā)明的范圍。
[0030] 本說明書中使用"~"表示的數(shù)值范圍表示包含"~"的前后記載的數(shù)值分別作為 下限值及上限值的范圍。
[0031] 本說明書中"工序"這一詞語不僅包括獨立的工序，在無法與其他工序明確區(qū)別的 情況下只要可達成本工序的所期望的作用，也就包含在本用語中。
[0032] 本說明書中，有時將氨基酸序列中的氨基酸殘基以本技術領域中周知的單字母表 述（例如，將甘氨酸殘基記載為"G"）或三字母表述（例如，將甘氨酸殘基記載為"Gly"） 來記載。
[0033] 本發(fā)明中，關于蛋白質(zhì)及多肽的氨基酸序列的" ％"只要沒有特別說明，則以氨基 酸殘基的個數(shù)為基準。
[0034] 本說明書中的關于氨基酸序列的"同源性"可以是指使用BLAST包（參照Ausubel 等、1999Short Protocolsin Molecular Biology、4thEd_Chapterl8)計算的值。例如，相對 于序列號1同源性為80%以上表示BLAST中的Max. Identities的值為80以上。
[0035] 本發(fā)明的移植用人工真皮（以下也稱為"本發(fā)明的人工真皮"。）具有創(chuàng)傷接觸層， 所述創(chuàng)傷接觸層包含基于生物降解性材料構成的多孔質(zhì)片材，且上述多孔質(zhì)片材滿足下述 的式子。
[0036]式：X2/X1彡0? 8
[0037] 上述多孔質(zhì)片材中，以相同長度繪制與創(chuàng)傷接觸面平行的直線和垂直的直線時， Xl為上述平行的直線與氣孔的壁的交點數(shù)，X2為上述垂直的直線與氣孔的壁的交點數(shù)。
[0038] 為了求出Xl及X2,上述平行的直線及上述垂直的直線優(yōu)選分別繪制3條，優(yōu)選1 條直線的長度為1，500 y m，3條直線的合計的長度為4, 500 y m。即，此時，在上述多孔質(zhì)片 材中，繪制3條與創(chuàng)傷接觸面平行的直線（長度為1，500 y m的直線3條。合計為4, 500 y m) 和3條與創(chuàng)傷接觸面垂直的直線（長度為1，500 y m的直線3條。合計為4, 500 y m)時，Xl 為上述3條平行的直線與氣孔的壁的交點數(shù)，X2為上述3條垂直的直線與氣孔的壁的交點 數(shù)。
[0039] Xl及X2例如可以如下求出：獲取以與創(chuàng)傷接觸面平行的直線和垂直的直線為邊 的1，500 ymXl，500 ym的正方形的截面圖像，繪制將該截面圖像等分成16個正方形的3 條平行線及3條垂直線，由此求出。即，此時，從上述多孔質(zhì)片材獲取以與創(chuàng)傷接觸面平行 的直線和垂直的直線為邊的截面圖像（1，500 ymX 1，500 ym的正方形），繪制將該截面圖 像等分成16個正方形的3條平行線及3條垂直線時，Xl為上述3條平行線與氣孔的壁的 交點數(shù)，X2為上述3條垂直線與氣孔的壁的交點數(shù)。1，500 y mX 1，500 y m的正方形的截面 圖像優(yōu)選從多孔質(zhì)片材的中央部獲取。
[0040] Xl及X2更詳細而言如下求得。
[0041] 當多孔質(zhì)片材的創(chuàng)傷接觸面為大致平面時，任意地取與該大致平面平行的平面 (以下稱為"平行面"。）、及垂直的平面（以下稱為"垂直面"。），獲取在該平行面及垂直面 具有兩條邊的1，500 ymX 1，500 ym的正方形的截面圖像。按照將獲取的正方形的截面圖 像的邊中通過平行面形成的邊、及通過垂直面形成的邊分別分割成四等分的方式，相對于 各邊沿垂直方向繪制3條分割線。其中，將分割通過平行面形成的邊的分割線稱為垂直線， 將分割通過垂直面形成的邊的分割線稱為平行線。該垂直線為與創(chuàng)傷接觸面垂直的線，該 平行線為與創(chuàng)傷接觸面平行的線。在截面圖像中，3條平行線與形成氣孔的壁部的交點數(shù)的 合計為XI，3條垂直線與形成氣孔的壁部的交點數(shù)的合計為X2。
[0042] 當多孔質(zhì)片材的創(chuàng)傷接觸面不為大致平面時，在使創(chuàng)傷接觸面變形為平面的基礎 上，使創(chuàng)傷接觸面朝下，將人工真皮置于平面上，任意地取與該平面平行的平面（平行面）、 及垂直的平面（垂直面），獲取在該平行面及垂直面具有兩條邊的1，500 y mX 1，500