。之后，在-80°C的冷庫內(nèi)，于在鋁塊上放置有玻璃板的臺上靜置1 小時。之后進(jìn)行冷凍干燥，在160°C下進(jìn)行3小時熱交聯(lián)，得到由基因重組明膠構(gòu)成的多孔 質(zhì)片材（平均厚度為2300 ym)。將所得到的多孔質(zhì)片材進(jìn)行曙紅染色，用光學(xué)顯微鏡確認(rèn) 結(jié)構(gòu)（參照圖1)。圖2為1，500 y mX 1，500 y m的放大圖，通過上述的方法，繪制3條平行 線和3條垂直線，分別求出交點數(shù)。3條平行線與形成氣孔的壁部的交點數(shù)的合計即Xl為 98 (平行線1 :交點數(shù)37、平行線2 :交點數(shù)30、平行線3 :交點數(shù)31)，3條垂直線與形成氣 孔的壁部的交點數(shù)的合計即X2為68 (垂直線1 :交點數(shù)19、垂直線2 :交點數(shù)25、垂直線3 : 交點數(shù)24)，X2/X1為0.7。另外，本實施方式是僅由多孔質(zhì)片材即創(chuàng)傷接觸層構(gòu)成的人工 真皮。
[0116] (在大鼠背部的真皮樣組織（肉芽樣組織）形成試驗）
[0117] 使用Wistar大鼠（雄、10周齡以后），通過將鹽酸氯胺酮和鹽酸賽拉嗪分別以 90mg/kg和10mg/kg投與到腹腔內(nèi)而麻醉。將大鼠的背部脫毛后，制作直徑為19mm的 圓形的真皮缺損。將所得到的人工真皮貼附到真皮缺損部后，依次放上帶凡士林的紗布 (八0八?1'1(3(注冊商標(biāo)）、]〇11118〇11&]〇11118〇111(.1(.)、濕棉花、及紗布并固定。第2周在麻醉下， 將包含人工真皮的背部組織摘出。將該摘出組織通過(Hematoxylin Eosin)染色并通過 組織學(xué)方式進(jìn)行觀察，結(jié)果與后述的比較例1及比較例2相比顯著確認(rèn)到真皮樣組織（肉 芽樣組織）的形成（參照圖3)。
[0118] [實施例2]
[0119] (多孔質(zhì)片材的制作）
[0120] 使用基因重組明膠CBE3,制作3 %明膠水溶液，將該水溶液流入到鋁制杯子（直 徑53mmX高度37mm)中。之后，在-60°C的冷庫內(nèi)，于在鋁塊上放置有玻璃板的臺上靜置1 小時。之后進(jìn)行冷凍干燥，在160°C下進(jìn)行3小時熱交聯(lián)，得到由基因重組明膠構(gòu)成的多孔 質(zhì)片材（平均厚度為2500 ym)。將所得到的多孔質(zhì)片材進(jìn)行曙紅染色，用光學(xué)顯微鏡確認(rèn) 結(jié)構(gòu)（參照圖4)。圖5為1，500 y mX 1，500 y m的放大圖，通過上述的方法，繪制3條平行 線和3條垂直線，分別求出交點數(shù)。3條平行線與形成氣孔的壁部的交點數(shù)的合計即Xl為 108 (平行線I :交點數(shù)36、平行線2 :交點數(shù)34、平行線3 :交點數(shù)38)，3條垂直線與形成氣 孔的壁部的交點數(shù)的合計即X2為32 (垂直線1:交點數(shù)11、垂直線2:交點數(shù)7、垂直線3: 交點數(shù)14)，X2/X1為0. 3。另外，本實施方式是僅由多孔質(zhì)片材即創(chuàng)傷接觸層構(gòu)成的人工 真皮。
[0121] (在大鼠背部的真皮樣組織（肉芽樣組織）形成試驗）
[0122] 通過與實施例1同樣的方法進(jìn)行評價（參照圖6)。與后述的比較例1及比較例2 相比顯著地見到真皮樣組織（肉芽樣組織）的形成。此外，與實施例1相比見到同等以上 的真皮樣組織（肉芽樣組織）的形成。
[0123][比較例1]
[0124](多孔質(zhì)片材的制作）
[0125] 除了將實施例1的"_80°C的冷庫內(nèi)"變更為"_40°C的冷庫內(nèi)"以外，進(jìn)行與 實施例1同樣的操作，得到由基因重組明膠構(gòu)成的多孔質(zhì)片材（平均厚度為2200 ym)。 將所得到的多孔質(zhì)片材進(jìn)行曙紅染色，用光學(xué)顯微鏡確認(rèn)結(jié)構(gòu)（參照圖7)。圖8為 1，500 y mX 1，500 y m的放大圖，通過上述的方法，繪制3條平行線和3條垂直線，分別求出 交點數(shù)。3條平行線與形成氣孔的壁部的交點數(shù)的合計即Xl為58 (平行線1:交點數(shù)19、 平行線2 :交點數(shù)18、平行線3 :交點數(shù)21)，3條垂直線與形成氣孔的壁部的交點數(shù)的合計 即X2為57(垂直線1 :交點數(shù)20、垂直線2 :交點數(shù)19、垂直線3 :交點數(shù)18)，X2/X1為1。 另外，本實施方式是僅由多孔質(zhì)片材即創(chuàng)傷接觸層構(gòu)成的人工真皮。
[0126](在大鼠背部的真皮樣組織（肉芽樣組織）形成試驗）
[0127] 通過與實施例1同樣的方法進(jìn)行評價（參照圖9)?？梢源_認(rèn)實施例1及實施例2 更明顯地形成真皮樣組織（肉芽樣組織）。
[0128][比較例2]
[0129](多孔質(zhì)片材的制作）
[0130] 代替實施例1的人工真皮，使用市售的真皮缺損用移植片Terudermis(注冊 商標(biāo)）（Olympus Terumo Biomaterials Corp.)(平均厚度為 3300 y m)，進(jìn)行同樣的 試驗。將Terudermis進(jìn)行曙紅染色，用光學(xué)顯微鏡確認(rèn)結(jié)構(gòu)（參照圖10)。圖11為 1，500 y mX 1，500 y m的放大圖，通過上述的方法，繪制3條平行線和3條垂直線，分別求出 交點數(shù)。3條平行線與形成氣孔的壁部的交點數(shù)的合計即Xl為41 (平行線1:交點數(shù)13、 平行線2 :交點數(shù)12、平行線3 :交點數(shù)16)，3條垂直線與形成氣孔的壁部的交點數(shù)的合計 即X2為40(垂直線1 :交點數(shù)12、垂直線2 :交點數(shù)13、垂直線3 :交點數(shù)15)，X2/X1為1。 另外，本實施方式是僅由多孔質(zhì)片材即創(chuàng)傷接觸層構(gòu)成的人工真皮。
[0131](在大鼠背部的真皮樣組織（肉芽樣組織）形成試驗）
[0132] 通過與實施例1同樣的方法進(jìn)行評價（參照圖12)?？梢源_認(rèn)實施例1及實施例 2更明顯地形成真皮樣組織（肉芽樣組織）。
[0133] 如以上所示的那樣，本發(fā)明的實施例所述的人工真皮通過將多孔質(zhì)制成特定的形 狀，具有優(yōu)異的真皮樣組織（肉芽樣組織）的形成能力。
[0134] 2013年1月25日申請的日本專利申請2013-012626號的公開內(nèi)容其整體通過參 照納入本說明書中。
[0135] 本說明書中記載的全部文獻(xiàn)、專利申請、及技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)與具體且分別記載各個文獻(xiàn)、 專利申請、及技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)通過參照納入的情況相同程度地通過參照納入本說明書中。
【主權(quán)項】
1. 一種移植用人工真皮，其具有創(chuàng)傷接觸層，所述創(chuàng)傷接觸層包含基于生物降解性材 料構(gòu)成的多孔質(zhì)片材，所述多孔質(zhì)片材滿足下述的式子， 式：X2/X1 < 0? 8 在所述多孔質(zhì)片材中，以相同長度繪制與創(chuàng)傷接觸面平行的直線和垂直的直線時，Xl為所述平行的直線與氣孔的壁的交點數(shù)，X2為所述垂直的直線與氣孔的壁的交點數(shù)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的移植用人工真皮，其中，所述X2/X1為0. 1以上且0. 8以下。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的移植用人工真皮，其中，所述生物降解性材料為選自蛋白 質(zhì)、多肽、聚乳酸、聚乙醇酸、乳酸-乙醇酸共聚物、殼多糖、殼聚糖、纖維素及透明質(zhì)酸中的 至少1種。4. 根據(jù)權(quán)利要求1到3中任一項所述的移植用人工真皮，其中，所述生物降解性材料為 選自明膠、纖連蛋白、及層粘連蛋白中的至少1種。5. 根據(jù)權(quán)利要求1到4中任一項所述的移植用人工真皮，其中，所述生物降解性材料為 基因重組明膠。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的移植用人工真皮，其中，所述基因重組明膠具有下述的氨基 酸序列， A- [ (Gly-X-Y) n]m-B A表示1個或2個以上的任意的氨基酸殘基，B表示1個或2個以上的任意的氨基酸殘 基，n個X分別獨立地表示任意的氨基酸殘基，n個Y分別獨立地表示任意的氨基酸殘基，n 表示3以上且100以下的整數(shù)，m表示2以上且10以下的整數(shù)；n個Gly-X-Y可以全部相 同，也可以部分相同，還可以互不相同。7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的移植用人工真皮，其中，所述基因重組明膠具有下述的氨 基酸序列， Gly-Ala-Pro- [ (Gly-X-Y) 63]3_Gly 63個X分別獨立地表示任意的氨基酸殘基，63個Y分別獨立地表示任意的氨基酸殘 基；63個Gly-X-Y可以全部相同，也可以部分相同，還可以互不相同。8. 根據(jù)權(quán)利要求5到7中任一項所述的移植用人工真皮，其中，所述基因重組明膠為下 述的（1)或（2)， (1) 具有序列號1中記載的氨基酸序列的基因重組明膠； (2) 具有與序列號1中記載的氨基酸序列有80%以上的同源性的氨基酸序列、且具有 生物降解性的基因重組明膠。9. 根據(jù)權(quán)利要求1到8中任一項所述的移植用人工真皮，其中，所述生物降解性材料經(jīng) 過了交聯(lián)。10. -種移植用人工真皮的制造方法，其是權(quán)利要求1到9中任一項所述的移植用人工 真皮的制造方法， 在制造所述多孔質(zhì)片材時，包含將生物降解性材料的水溶液冷凍的工序。
【專利摘要】本發(fā)明提供移植用人工真皮，其具有創(chuàng)傷接觸層，所述創(chuàng)傷接觸層包含基于生物降解性材料構(gòu)成的多孔質(zhì)片材，上述多孔質(zhì)片材滿足下述的式子。式：X2/X1≤0.8。在上述多孔質(zhì)片材中，以相同長度繪制與創(chuàng)傷接觸面平行的直線和垂直的直線時，X1為上述平行的直線與氣孔的壁的交點數(shù)，X2為上述垂直的直線與氣孔的壁的交點數(shù)。
【IPC分類】A61L15/64
【公開號】CN104902934
【申請?zhí)枴緾N201480003773
【發(fā)明人】荻原一隆, 山口雄大, 佐佐木翼, 后藤榮子, 菅原桂, 畠賢一郎
【申請人】富士膠片株式會社, 株式會社日本組織工程
【公開日】2015年9月9日
【申請日】2014年1月21日
【公告號】EP2949347A1, US20150290359, WO2014115732A1