[0037] 本發(fā)明還提供了一種監(jiān)測(cè)其中施用BMP-6拮抗劑的治療的方法，所述方法包括： 使來自已經(jīng)施用了 BMP-6拮抗劑的人的生物樣品與特異性結(jié)合BMP-6的抗體在適合于所述 抗體與人BMP-6結(jié)合的條件下接觸；和定量與所述抗體結(jié)合的BMP-6,其中如在（b)中所定 量的血清BMP-6水平的量的變化指示BMP-6拮抗劑的功效。在具體的實(shí)施方案中，所述拮 抗劑是抗體。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述拮抗劑是小分子。
[0038] 本發(fā)明還提供了特異性結(jié)合人BMP-6的抗體，其中在一定濃度的包含 TQSQDVARVSSASDY(SEQ ID N0:3)的氨基酸序列的肽的存在下，所述抗體被競(jìng)爭(zhēng)不與人 BMP-6特異性結(jié)合。
[0039] 本發(fā)明還提供了一種特異性結(jié)合TQSQDVARVSSASDY(SEQ ID N0:3)的任何5個(gè)連 續(xù)氨基酸的抗體。在具體的實(shí)施方案中，所述抗體特異性地結(jié)合TQSQDVARVSSASDY(SEQ ID N0:3)的6、7、8、9或10個(gè)連續(xù)氨基酸。
[0040] 在下面的發(fā)明詳述和附圖以及實(shí)施方案中，本發(fā)明和本發(fā)明的其他目的、特征和 優(yōu)勢(shì)將變得進(jìn)一步顯而易見。
【附圖說明】
[0041] 圖1A-1D顯示DRAGON. Fc選擇性地抑制BMP對(duì)鐵調(diào)素表達(dá)的誘導(dǎo)的證據(jù)；
[0042] 圖2A-2G顯示在小鼠中施用DRAGON. Fc不影響鐵調(diào)素表達(dá)或鐵代謝的證據(jù)；
[0043] 圖3A-3D顯示特異性中和BMP-6的抗體在體內(nèi)抑制肝臟鐵調(diào)素表達(dá)和增加血清鐵 和轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度的證據(jù)；
[0044] 圖4A-4H顯示Bmp6敲除小鼠顯示減少的肝臟鐵調(diào)素表達(dá)、增加的脾膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 表達(dá)、增加的血清鐵和轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度、增加的肝臟鐵含量和減少的脾鐵含量的證據(jù)；
[0045] 圖5A-5C顯示在小鼠中施用BMP-6增加鐵調(diào)素 mRNA表達(dá)和減少血清鐵的證據(jù)；
[0046] 圖 6 是對(duì) BMP-6 的 Western 印跡；
[0047] 圖7是對(duì)HJV的Western印跡；
[0048] 圖 8 是對(duì) hBMP-6 的 Western 印跡。
【具體實(shí)施方式】
[0049] 本發(fā)明人已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)BMP-6是鐵調(diào)素表達(dá)和鐵代謝的重要調(diào)節(jié)物。與可 溶性血幼素（HJV. Fe)相比，同源的DRAGON. Fc融合蛋白在體外是對(duì)BMP-2和BMP-4產(chǎn)生 的鐵調(diào)素啟動(dòng)子活化的較為有效的抑制劑，但是為BMP-6的不太有效的抑制劑。在體內(nèi)， DRAGON. Fc對(duì)鐵調(diào)素表達(dá)和鐵代謝沒有作用，而HJV. Fc或特異性中和BMP-6的抗體抑制鐵 調(diào)素表達(dá)并增加血清鐵。此外，Bmp6敲除小鼠具有類似遺傳性血色素沉著病的表型，其具有 減少的鐵調(diào)素表達(dá)、增加的膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)、增加的血清鐵和轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度、減少的脾 鐵儲(chǔ)備和組織鐵過載。本發(fā)明人顯示在小鼠中施用BMP-6增加鐵調(diào)素表達(dá)并減少血清鐵。 總之，這些數(shù)據(jù)支持了 BMP-6作為體內(nèi)鐵調(diào)素表達(dá)和鐵代謝的內(nèi)源性調(diào)節(jié)物的關(guān)鍵作用。
[0050] 特異性中和BMP-6的抗體的施用導(dǎo)致增加的血清鐵和轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度，表明對(duì)鐵 調(diào)素表達(dá)和鐵代謝的作用。通過siRNA或中和抗體抑制內(nèi)源性BMP-6抑制血幼素-介導(dǎo)的 對(duì)鐵調(diào)素表達(dá)的誘導(dǎo)。BMP-6可能是血幼素的配體。
[0051] 此外，發(fā)現(xiàn)添加外源性BMP-6增加鐵調(diào)素表達(dá)并導(dǎo)致血清鐵和血清轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和 度的劑量依賴性減少。
[0052] pro-BMP-6的氨基酸序列顯示在下表1中：
[0053]
[0054] BMP-6由表1中顯示的pro-BMP-6序列的氨基酸297-428構(gòu)成。BMP-6顯示在下 表2中。
[0056] 除非另外定義，與本發(fā)明相關(guān)使用的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語應(yīng)當(dāng)具有本領(lǐng)域中普通技術(shù) 人員所普遍理解的含義。此外，除非另外上下文需要，單數(shù)術(shù)語應(yīng)當(dāng)包括復(fù)數(shù)，并且復(fù)數(shù)術(shù) 語應(yīng)當(dāng)包括單數(shù)術(shù)語。通常，與本文所述的細(xì)胞和組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)和蛋白質(zhì)和寡核 苷酸或多核苷酸化學(xué)和雜交相關(guān)采用的命名法和技術(shù)是本領(lǐng)域中所公知和普遍使用的那 些。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用于重組DNA、寡核苷酸合成和組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化（例如，電穿孔，脂質(zhì)轉(zhuǎn)染）。 根據(jù)生產(chǎn)廠商的說明書或如本領(lǐng)域中普遍實(shí)現(xiàn)的那樣或如本文所述進(jìn)行酶反應(yīng)和純化技 術(shù)。除非相反地具體指明，本發(fā)明的實(shí)施將采用本領(lǐng)域技術(shù)范圍內(nèi)的病毒學(xué)、免疫學(xué)、微生 物學(xué)、分子生物學(xué)和重組DNA技術(shù)的常規(guī)方法，為了說明的目的下面描述它們中的許多。參 見，例如，Sambrook,等 Molecular Cloning:A Laboratory Manual (分子克?。簩?shí)驗(yàn)室指 南）（第二版，1989) ;Maniatis 等 Molecular Cloning:A Laboratory Manual (分子克?。?實(shí)驗(yàn)室指南）（1982) ;DNA Cloning:A Practical Approach(DNA 克?。簩?shí)踐方法），vol. I&II(D. Glover,編輯）；01igonucleotide Synthesis (寡核苷酸合成）（Ν· Gait,編輯， 1984) ;Nucleic Acid Hybridization(核酸雜交）（B.Hames&S. Higgins,編輯，1985); Transcription and Translation (轉(zhuǎn)錄和翻譯）（B. Hames&S. Higgins,編輯，1984); Animal Cell Culture (動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)）（R.Freshney,編輯，1986) ;Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning (分子克隆實(shí)踐指導(dǎo)）（1984)。
[0057] 與本文所述的分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)，以及醫(yī)學(xué)和藥物化學(xué)相關(guān)采用的命名法， 和實(shí)驗(yàn)室步驟和技術(shù)是本領(lǐng)域中所公知和普遍使用的那些。標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用于化學(xué)合成，化學(xué) 分析，藥物制備，配制和遞送，以及患者的治療。
[0058] 下面的定義可用于理解本發(fā)明：
[0059] 如本文使用的術(shù)語"抗體"（Ab)包括單克隆抗體、多克隆抗體、多特異性抗體（例 如，雙特異性抗體），和抗體片段，只要它們顯示所需的生物活性。術(shù)語"免疫球蛋白"(Ig) 在本文中與"抗體"互換使用。
[0060] "分離的抗體"是已經(jīng)與其天然環(huán)境的組分分開和/或從其天然環(huán)境的組分中回收 的一種抗體。其天然環(huán)境的污染組分是將干擾該抗體的診斷或治療用途的物質(zhì)，并且可以 包括酶、激素和其他蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)溶質(zhì)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體：（1)如通過Lowry 法測(cè)定，被純化至大于95重量％抗體，和最優(yōu)選大于99重量％ ; (2)通過利用自旋杯序列 分析儀（spinning cup sequenator)被純化至足以獲得N末端或內(nèi)部氨基酸序列的至少15 個(gè)殘基的程度；或（3)在還原或非還原條件下使用考馬斯藍(lán)或優(yōu)選地銀染通過SDS-PAGE被 純化至均質(zhì)。分離的抗體包括重組細(xì)胞內(nèi)的原位抗體，因?yàn)椴淮嬖诳贵w的天然環(huán)境的至少 一個(gè)組分。然而，通常，分離的抗體將通過至少一個(gè)純化步驟制備。
[0061] 基本的四鏈抗體單元是由兩個(gè)相同的輕（L)鏈和兩個(gè)相同的重（H)鏈構(gòu)成的異四 聚體糖蛋白。IgM抗體由5個(gè)基本的異四聚體單元以及稱為J鏈的附加多肽組成，并且因 此含有10個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，而分泌的IgA抗體可以聚合形成多價(jià)集合體，所述集合體包含 2-5個(gè)基本的4鏈單元以及J鏈。在IgG的情況下，4鏈單元通常為約150, 000道爾頓。每 個(gè)L鏈通過一個(gè)共價(jià)二硫鍵與H鏈連接，而兩個(gè)H鏈通過一個(gè)或多個(gè)二硫鍵彼此連接，取決 于H鏈的同種型。每個(gè)H和L鏈還具有規(guī)則地間隔開的鏈內(nèi)二硫橋。每個(gè)H鏈在N末端處 具有可變結(jié)構(gòu)域（V h)，緊接著對(duì)于每個(gè)α和γ鏈?zhǔn)侨齻€(gè)恒定結(jié)構(gòu)域（Ch)，對(duì)于μ和ε同 種型是4個(gè)Ch結(jié)構(gòu)域。每個(gè)L鏈在N末端處具有可變結(jié)構(gòu)域（V J，緊接著在其另一端是恒 定結(jié)構(gòu)域（Q)。'與Vh對(duì)齊，且q與重鏈的第一個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域（ChI)對(duì)齊。認(rèn)為特定氨基 酸殘基形成輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域之間的界面。％和V l的配對(duì)一起形成單個(gè)抗原結(jié)合位 點(diǎn)。對(duì)于不同類型抗體的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，參見，例如，Basic and Clinical Immunology(基礎(chǔ) 和臨床免疫學(xué)），第 8 版，Daniel P.Stites, Abba I. Terr 和 Tristram G. Parslow (編輯）， Appleton&Lange, Norwalk, Conn.，1994, 71 頁，和第 6 章。
[0062] 基于其恒定結(jié)構(gòu)域（Q)的氨基酸序列，來自任何脊椎動(dòng)物物種的L鏈可以被指 定為兩種顯然不同的類型中的一種，稱為kappa〇 )和Iambda(A)。取決于其重鏈（Ch) 的恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列，免疫球蛋白可以被指定為不同的類型或同種型。存在5種類 型的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，具有分別被指定為alpha(a)、delta(S)、 epsilon( ε )、gamma( γ )和mu( μ )的重鏈。基于(^序列和功能的相對(duì)微小差異，γ和α 類進(jìn)一步分成為亞類，例如，人表達(dá)下列的亞類：IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。
[0063] 術(shù)語"可變的"是指在抗體之間V結(jié)構(gòu)域的某些區(qū)段的序列廣泛地不同的事實(shí)。 V結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)抗原結(jié)合并且限定特定抗體對(duì)其特定抗原的特異性。然而，可變性在可變結(jié) 構(gòu)域的110個(gè)氨基酸范圍內(nèi)并不均勻地分布。事實(shí)上，V區(qū)由相對(duì)不變的稱為構(gòu)架區(qū)（FR) 的15-30個(gè)氨基酸的序列段（stretch)構(gòu)成，所述序列段被稱為"超變區(qū)"的具有高可變 性的較短區(qū)域分隔，每個(gè)超變區(qū)的長(zhǎng)度為9-12個(gè)氨基酸。天然重鏈和輕鏈的每個(gè)可變結(jié) 構(gòu)域包含4個(gè)FR，主要采取β -折疊構(gòu)型，它們通過三個(gè)超變區(qū)連接，形成連接β -折疊 結(jié)構(gòu)的環(huán)，并且在一些情況下形成β-折疊結(jié)構(gòu)的一部分。每條鏈中的超變區(qū)通過FR相 互靠近地結(jié)合在一起，并且和來自其他鏈的超變區(qū)一起，對(duì)抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)的形成作 出貢獻(xiàn)（參見 Kabat 等，Sequences of Proteins of Immunological Interest (免疫學(xué) 感興趣的蛋白質(zhì)的序列），第5版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))。恒定結(jié)構(gòu)域不直接參與抗體與抗原的結(jié)合，但顯示多種效 應(yīng)器功能，諸如抗體參與抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC)。
[0064] 當(dāng)在本文中使用時(shí)術(shù)語"超變區(qū)"是指抗體中負(fù)責(zé)抗原結(jié)合的氨基酸殘 基。超變區(qū)通常包含來自"互補(bǔ)決定區(qū)"或"CDR"的氨基酸殘基（例如，八中大約殘 基 24-34 (LI) ,50-56 (L2)和 89-97 (L3)周圍，和 Vh中大約 1-35 (HI) ,50-65 (H2)和 95-102 (H3)周圍；Kabat 等，Sequences of Proteins of Immunological Interest (免 疫學(xué)感興趣的蛋白質(zhì)的序列），第5版，Public Health Service, National Institutes of Health，Bethesda，Md. (1991))和/或來自"超變環(huán)"的那些殘基（例如，Vl中殘 基 26-32 (LI) ,50-52 (L2)和 91-96 (L3)，和 Vh中 26-32 (HI) ,53-55 (H2)和 96-101 (H3); Chothia 和 Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917(1987))。
[0065] 如本文使用的術(shù)語"單克隆抗體"是指從基本上均一的抗體的群體獲得的抗體， 即，構(gòu)成該群體的各個(gè)抗體除了可以微量存在的可能天然存在的突變以外是相同的。單克 隆抗體具有高度特異性，針對(duì)單個(gè)抗原位點(diǎn)。此外，與包括針對(duì)不同決定簇（表位）的不 同抗體的多克隆抗體制劑相反，每個(gè)單克隆抗體針對(duì)抗原上的單個(gè)決定簇。除了它們的特 異性以外，單克隆抗體的優(yōu)勢(shì)在于它們可以合成而不會(huì)被其他抗體污染。修飾語"單克隆" 不應(yīng)被解釋為需要通過任何特定的方法來制備抗體。例如，可用于本發(fā)明中的單克隆抗體 可以通過首先由Kohler等，Nature, 256:495 (1975)所述的雜交瘤方法學(xué)來制備，或可以使 用重組DNA方法在細(xì)菌、真核動(dòng)物或植物細(xì)胞中制備（參見，美國(guó)專利號(hào)4, 816, 567)。"單 克隆抗體"也可以使用例如 Clackson 等，Nature, 352:624-628 (1991)和 Marks 等，上1\1〇1· Biol，222:581-597(1991)中所述的技術(shù)從噬菌體抗體文庫中分離。
[0066] 本文中的單克隆抗體包括"嵌合"抗體，其中一部分重鏈和/或輕鏈與來源于特 定物種或?qū)儆谔囟贵w類型或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而該鏈的剩余部分與 來源于另一種物種或?qū)儆诹硪环N抗體類型或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，以及此 類抗體的片段，只要它們顯示所需的生物活性（參見美國(guó)專利號(hào)4, 816, 567 ;和Morrison 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984))。本發(fā)明提供了來源于人抗體的可變 結(jié)構(gòu)域抗原結(jié)合序列。因此，本文中主要感興趣的嵌合抗體包括具有一個(gè)或多個(gè)人抗原結(jié) 合序列（例如，CDR)且含有來源于非人抗體的一個(gè)或多個(gè)序列（例如，F(xiàn)R或C區(qū)序列）的 抗體。另外，本文主要感興趣的嵌合抗體包括包含一種抗體類型或亞類的人可變結(jié)構(gòu)域抗 原結(jié)合序列和來源于另一抗體類型或亞類的另一序列（例如，F(xiàn)R或C區(qū)序列）的那些。本 文感興趣的嵌合抗體還包括含有與本文所述的那些相關(guān)的或來自不同物種（諸如非人靈 長(zhǎng)類動(dòng)物（例如，舊大陸猴（Old World Monkey),猿等））的可變結(jié)構(gòu)域抗原結(jié)合序列的那 些。嵌合抗體還包括靈長(zhǎng)類動(dòng)物源化抗體和人源化抗體。
[0067] 此外，嵌合抗體可以包含不存在于受體抗體或供體抗體中的殘基。可以作 出這些修飾作用以進(jìn)一步改善抗體性能。對(duì)于更多的細(xì)節(jié)，參見Jones等，Nature 321:522-525(1986) ;Riechmann 等，Nature 332:323-329(1988);和 Presta,Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596(1992)〇
[0068] 〃人源化抗體〃通常被認(rèn)為是人抗體，其具有一個(gè)或多個(gè)引入其中的 來自非人來源的氨基酸殘基。這些非人氨基酸殘基通常被稱為"輸入"殘基，其 典型地取自"輸入"可變結(jié)構(gòu)域。人源化傳統(tǒng)地根據(jù)Winter及其同事（Jones 等，Nature, 321:522-525(1986) ;Reichmann 等，Nature, 332:323-327(1988) ;Verhoeyen 等，Science，239:1534-1536 (1988))的方法進(jìn)行，該方法通過用輸入超變區(qū)序列代替人抗 體的相應(yīng)序列來進(jìn)行。因此，這種"人源化"抗體是嵌合抗體（美國(guó)專利號(hào)4, 816, 567)，其 中基本上少于完整的人可變結(jié)構(gòu)域已經(jīng)被來自非人物種的相應(yīng)序列替代。
[0069] "人抗體"是僅含有存在于由人天然產(chǎn)生的抗體中的序列的抗體。然而，如本文所 使用，人抗體可以包含不存在于天然存在的人抗體中的殘基或修飾作用，包括本文所述的 那些修飾作用和變體序列。典型地作出這些以進(jìn)一步改善或增強(qiáng)抗體性能。
[0070] "完整"抗體是包含抗原結(jié)合位點(diǎn)以及Q和至少重鏈恒定結(jié)構(gòu)域C H1、Ch 2和Ch 3 的抗體。恒定結(jié)構(gòu)域可以是天然序列恒定結(jié)構(gòu)域（例如，人天然序列恒定結(jié)構(gòu)域）或其氨 基酸變體。優(yōu)選地，完整抗體具有一種或多種效應(yīng)器功能。
[0071] "抗體片段"包含完整抗體的一部分，優(yōu)選完整抗體的抗原結(jié)合區(qū)或可變區(qū)。抗 體片段的實(shí)例包括？ &13^&13'^(&13'）2和？ ￥片段；雙抗體；線性抗體（參見美國(guó)專利號(hào) 5, 641，870 ;Zapata 等，Protein Eng. 8 (10) : 1057-1062 [1995]);單鏈抗體分子；和由抗體 片段形成的多特異性抗體。
[0072] 短語抗體的"功能性片段或類似物"是具有在性質(zhì)上與全長(zhǎng)抗體一樣的生物活性 的化合物。例如，抗IgE抗體的功能性片段或類似物可以以下列的方式結(jié)合IgE免疫球蛋 白，從而防止或基本上減少此類分子具有結(jié)合高親和性受體Fc ε RI的能力的能力。
[0073] 抗體的木瓜蛋白酶消化產(chǎn)生兩個(gè)相同的抗原結(jié)合片段，稱為"Fab"片段，和殘留 的"Fc"片段，該名稱反映了容易結(jié)晶的能力。Fab片段由完整的L鏈以及H鏈的可變區(qū)結(jié) 構(gòu)域（V h)，和一條重鏈的第一個(gè)恒定結(jié)構(gòu)域（CH 1)組成。每個(gè)Fab片段就抗原結(jié)合而言是 單價(jià)的，即，其具有單個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。抗體的胃蛋白酶處理產(chǎn)生單個(gè)大的F(ab'） 2片段， 其大概對(duì)應(yīng)于兩個(gè)二硫鍵連接的Fab片段，其具有二價(jià)抗原結(jié)合活性，并且仍能夠交聯(lián)抗 原。Fab'片段與Fab片段的區(qū)別在于其在C hI結(jié)構(gòu)域的羧基末端處具有額外的幾個(gè)殘基， 包括來自抗體鉸鏈區(qū)的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸。在本文中Fab'-SH是Fab'的名稱，其中恒定 結(jié)構(gòu)域的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基帶有游離的硫醇基。F(ab'） 2抗體片段初始地作為成對(duì) 的Fab'片段產(chǎn)生，在它們之間具有鉸鏈半胱氨酸。還已知有抗體片段的其他化學(xué)偶合。
[0074] "Fc"片段包含通過二硫鍵結(jié)合在一起的兩個(gè)H鏈的羧基末端?？贵w的效應(yīng)器功能 由Fc區(qū)中的序列決定，該區(qū)也是被在某些類型細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的Fc受體（FcR)識(shí)別的部分。
[0075] "Fv"是最小的抗體片段，其包含完整的抗原識(shí)別和抗原結(jié)合位點(diǎn)。此片段由一個(gè) 重鏈和一個(gè)輕鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域以緊密、非共價(jià)方式締合的二聚體組成。由這兩種結(jié)構(gòu)域的 折疊產(chǎn)生6個(gè)超變環(huán)（各3個(gè)環(huán)來自H鏈和L鏈），它們貢獻(xiàn)用于抗原結(jié)合的氨基酸殘基并 且賦予抗體以抗原結(jié)合特異性。然而，甚至單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域（或Fv的一半，其僅包含對(duì)抗 原特異的三個(gè)CDR)就具有識(shí)別和結(jié)合抗原的能力，盡管親和性比整個(gè)結(jié)合位點(diǎn)低。
[0076] "單鏈Fv"也縮寫為"sFv"或"scFv"，其是包含連接至單條多肽鏈中的V#P Vl 抗體結(jié)構(gòu)域。優(yōu)選地，sFv多肽進(jìn)一步包含VjPV j吉構(gòu)域之間的多肽接頭，使sFv能夠 形成用于結(jié)合抗原的所需結(jié)構(gòu)。對(duì)于sFv的綜述，參見Pluckthun的The Pharmacology of Monoclonal Antibodies(單克隆抗體藥理學(xué)），第 113 卷，Rosenburg 和 Moore 編 輯，Springer-Verlag, New York, 269-315 頁（1994) ;Borrebaeck 1995，見下。
[0077] 術(shù)語"雙抗體（diabody) "是指通過如下方法制備的小抗體片段，即用V j吉 構(gòu)域之間的短接頭（約5-10個(gè)殘基）構(gòu)建sFv片段（參見前面的段落），使得實(shí)現(xiàn)V結(jié)構(gòu) 域的鏈間而非鏈內(nèi)配對(duì)，產(chǎn)生二價(jià)片段，即，具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段。雙特異性雙抗 體是兩個(gè)"交換（crossover) "sFv片段的異二聚體，其中兩個(gè)抗體的VjP V 結(jié)構(gòu)域存在于 不同的多肽鏈上。雙抗體更充分地描述在，