含有羥基化脂肪酸的腸道保護劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及含有羥基化脂肪酸的腸道保護劑。具體地，本發(fā)明涉及含有羥基化不 飽和脂肪酸的腸道保護劑。更具體地，其涉及10-羥基-順-12-十八碳烯酸等對腸道屏障 功能的改善。
【背景技術(shù)】
[0002] 腸道上皮細(xì)胞與食品、腸細(xì)菌、病原體等直接接觸。它們不僅作為物理屏障發(fā)揮作 用，而且在腸道免疫應(yīng)答等的誘導(dǎo)和引導(dǎo)等等中發(fā)揮重要作用。腸道上皮細(xì)胞形成這樣的 結(jié)構(gòu)，其中細(xì)胞間隙緊密由多個緊密連接相關(guān)因子（tight junction-related factors)諸 如ΖΟ-l、閉合蛋白和密蛋白家族緊密粘連。當(dāng)由于IL-6、TNF_a、胰島素等導(dǎo)致腸道上皮細(xì) 胞中所述相關(guān)因子的表達降低等時，腸道屏障功能可能有時受損（非專利文獻1)。此外，當(dāng) 病原體等損傷腸道上皮細(xì)胞層時，外周免疫細(xì)胞被活化以修復(fù)上皮層且去除外來物質(zhì)。
[0003] 然而，當(dāng)免疫應(yīng)答變得過度時，腸道組織中可發(fā)生炎癥，并且作為抑制此類炎癥的 治療劑，已經(jīng)報道了炎性腸病的治療劑，其含有乳桿菌細(xì)菌等（專利文獻1)。作為通過注意 到經(jīng)由緊密連接的物質(zhì)滲透和防止緊密連接的松動而抑制過敏原物質(zhì)等的滲透的治療藥 物，也已經(jīng)報道了含有乳清蛋白、酪蛋白、血清白蛋白等作為有效成分等的腸道保護劑（專 利文獻2)。
[0004] 盡管已經(jīng)報道了上述腸道保護劑，但仍期望開發(fā)新的腸道保護劑，其可用于預(yù)防 或治療腸道屏障功能的損傷或由此引起的疾病。
[0005] 已經(jīng)報道通過共軛亞油酸（CLA)代表的共軛脂肪酸具有各種生理活性，諸如脂質(zhì) 代謝改善效果、抗動脈硬化作用、身體脂肪降低作用等（非專利文獻2 -4)，并且是期望可 適于藥物、功能性食品等的各種領(lǐng)域的功能性脂質(zhì)。此外，對腸道保護的作用已經(jīng)引起關(guān) 注，并且已經(jīng)報道了共軛亞油酸對具有潰瘍性結(jié)腸炎諸如克羅恩氏病等的患者的癥狀的改 善，等等（http://www. nimml. org/838/) 〇
[0006] 共軛亞油酸由乳桿菌產(chǎn)生作為不飽和脂肪酸的飽和代謝的中間體。作為代謝的 中間體，例如，存在羥基化脂肪酸，諸如10-羥基-順-12-十八碳烯酸、10-羥基-十八烷 酸等，氧代脂肪酸（oxofatty acids)諸如10-氧代-12-十八碳稀酸、10-氧代十八燒酸、 10-氧代-11-十八碳烯酸等，等。然而，據(jù)申請人所知，沒有關(guān)于由乳桿菌的不飽和脂肪酸 的飽和代謝的中間體對腸道的作用和效果的報道。
[0007] [文獻列表]
[專利文獻] 專利文獻 I: JP-A-2003-073286 專利文獻 2: JP-A-9-241177 [非專利文獻] 非專利文獻 I: Nusrat A, (2000)，Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol·， vol.279, no. 5, p. G851-G857 非專利文獻 2: HaYL, (1987)，Carcinogenesis, vol. 8，no. 12 p.1881-1887 非專利文獻 3: Clement Ip, (1991)，Cancer Res·，（1991)，vol. 51，p. 6118-6124 非專利文獻 4: Kisun NL, (1994)，Atherosclerosis, vol. 108，p.l9_25〇
[0008] 發(fā)明概述 本發(fā)明待解決的問題 本發(fā)明的目的是提供新型腸道保護藥，其可用于預(yù)防或治療腸道屏障功能的損傷或由 此引起的疾病。
[0009] 解決問題的方式 本發(fā)明人已經(jīng)鑒于上述問題進行了深入研宄，并且發(fā)現(xiàn)，羥基化脂肪酸，特別是具 有18個碳原子且在10位和/或12位具有羥基的羥基化不飽和脂肪酸，諸如10-羥 基-順-12-十八碳烯酸等，這是乳桿菌代謝不飽和脂肪酸的中間體，具有腸道屏障保護作 用、對炎性細(xì)胞因子IL-8的表達的抑制作用和腸炎模型中的病理減少作用。
[0010] 因此，本發(fā)明如下。
[0011] [1]腸道保護劑，其包含具有18個碳原子且在10位和/或12位具有羥基的羥基 化脂肪酸。
[0012] [2] [1]的腸道保護劑，其中所述羥基化脂肪酸是羥基化不飽和脂肪酸。
[0013] [3] [2]的腸道保護劑，其中所述羥基化不飽和脂肪酸在12位具有順式雙鍵。
[0014] [4] [2]的腸道保護劑，其中所述羥基化不飽和脂肪酸是10-羥基-順-12-十八 碳稀酸。
[0015] [5] [1] - [4]中任一項的腸道保護劑，其用于預(yù)防或改善由腸道屏障功能損傷 引起的疾病。
[0016] [6] [5]的腸道保護劑，其中所述由腸道屏障功能損傷引起的疾病是至少一種選 自炎性腸病、潰瘍和腸易激綜合征的疾病。
[0017] [7] [1]-[6]中任一項的腸道保護劑，其是食品或食品添加劑。
[0018] [8] [1]_[6]中任一項的腸道保護劑，其是藥品。
[0019] [9] [1]_[6]中任一項的腸道保護劑，其是飼料或飼料添加劑。
[0020] [10]用于預(yù)防或治療溫血動物中的腸道屏障功能損傷或者由所述損傷引起的疾 病的方法，其包括向哺乳動物施用有效量的具有18個碳原子且在10位和/或12位具有羥 基的羥基化脂肪酸。
[0021] [11]具有18個碳原子且在10位和/或12位具有羥基的羥基化脂肪酸，其用作 腸道保護劑。
[0022] [12]具有18個碳原子且在10位和/或12位具有羥基的羥基化脂肪酸用于生產(chǎn) 腸道保護劑的用途。
[0023] 發(fā)明效果 在本發(fā)明中，已經(jīng)闡明，羥基化脂肪酸，特別是具有18個碳原子且在10位和/或12位 具有羥基的羥基化不飽和脂肪酸，諸如10-羥基-順-12-十八碳烯酸（以下也稱為HYA)， 具有常規(guī)未知的腸道屏障保護作用?；诖祟愖饔?，本發(fā)明可以提供含有所述脂肪酸的腸 道保護劑。由于所述試劑可用于各個領(lǐng)域諸如藥品、食品、飼料等中，本發(fā)明在工業(yè)上極為 有用。
[0024] 附圖簡述 圖1顯示實施例中使用的脂肪酸的結(jié)構(gòu)式。
[0025] 圖2顯示通過使用人結(jié)腸直腸癌來源的細(xì)胞系Caco-2的跨上皮電阻（以下稱為 TER)作為指標(biāo)的測試脂肪酸HYA、HYB、Ket〇A、Ket〇B和KetoC的腸道屏障保護作用的結(jié)果。 圖2A的垂直軸顯示TER值（Ω cm2)，且水平軸顯示培養(yǎng)時間。不添加測試脂肪酸、IFN-γ 和TNF-α的孔（圖中顯示為無），和不添加測試脂肪酸且添加 IFN-γ和TNF-α的孔（圖 中顯示為（-))用作對照（在下文圖3 - 8和10中也是如此）。圖2Β顯示當(dāng)圖2Α中培養(yǎng) 6小時時對照（無）組中的值為1時TER值的相對值。在圖中，顯示*相對于無、#相對于 (_)、$相對于ΗΥΑ，兩個標(biāo)記顯示Ρ〈0. 01，且一個標(biāo)記顯示Ρ〈0. 05 (在圖3 - 8和10中 也是如此）。
[0026] 圖3顯示使用Caco-2細(xì)胞中的IL-8產(chǎn)生（測量蛋白和基因水平兩者）作為指標(biāo) 檢查的HYA和HYB的腸道屏障保護作用的結(jié)果。圖3A的垂直軸顯示IL-8產(chǎn)生量（pg/mL)。 圖3B的垂直軸顯示IL-8 mRNA的表達。
[0027] 圖4顯示HYA和HYB對緊密連接相關(guān)因子的基因表達的影響。
[0028] 圖5顯示HYA或HYB施用對DSS誘導(dǎo)的腸炎模型小鼠的體重的時間-進程變化 (相對于作為100 %的HYA或HYB施用開始時的體重的％變化）的影響。
[0029] 圖6顯示HYA或HYB施用對DSS誘導(dǎo)的腸炎模型小鼠的體重的降低（從HYA或 HYB施用開始至施用DSS 5天結(jié)束時降低的量（g))的影響。
[0030] 圖7顯示HYA或HYB施用對DSS誘導(dǎo)的腸炎模型小鼠的排泄物評分的時間-進程 變化的影響。
[0031] 圖8顯示HYA或HYB施用對DSS誘導(dǎo)的腸炎模型小鼠的大腸長度的影響。
[0032] 圖9顯示HYA或HYB施用對DSS誘導(dǎo)的腸炎模型小鼠的大腸的上皮細(xì)胞損傷的影 響。
[0033] 圖10顯示HYA和HYB對DSS誘導(dǎo)的腸炎模型小鼠的大腸組織中的緊密連接相關(guān) 因子的基因表達的影響。
[0034] 實施方案的描述 下面詳細(xì)解釋本發(fā)明。本發(fā)明提供含有具有18個碳原子和在10位和/或12位具有 羥基的羥基化脂肪酸，諸如10-羥基-順-12-十八碳烯酸（以下也稱為"本發(fā)明的羥基化 脂肪酸"）的腸道保護劑。
[0035] 在本發(fā)明中，"腸道保護"意指修復(fù)受損的腸道屏障功能和/或增強腸道屏障功能。 至于損傷，其程度不顯著，且其包括嚴(yán)重水平至輕度水平中任一者。功能的修復(fù)意指使異常 狀態(tài)至初始狀態(tài)和/或接近初始狀態(tài)的狀態(tài)。功能的增強包括執(zhí)行功能，并且在一些情況 下，同樣抑制功能降低。
[0036] 在本發(fā)明中，"腸道屏障（功能）"生理上意指通過形成其中腸道上皮細(xì)胞之間的 細(xì)胞間隙受緊密連接相關(guān)因子強烈和緊密粘附的結(jié)構(gòu)防止除了低分子以外的物質(zhì)的滲透。 在生物學(xué)上，它意