也可以采用文獻報道的其他方法從天麻或者含有3,4_二羥基苯甲醛的植 物（如丹參）中提取3,4-二羥基苯甲醛；或者直接購買市售產(chǎn)品（CAS號：139-85-5)。
[0052] 動物處理：
[0053] 摘眼球處死小鼠同時收集血液，離心（4500rpm/min，5min)取血清，-80°C保存。取 小鼠胸主動脈。
[0054] 3, 4-二羥基苯甲醛對高脂飲食ApoE-/-小鼠血脂的影響：
[0055] 將血清解凍，使用甘油三脂、C反應(yīng)蛋白、總膽固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白 檢測試劑盒檢測血清中以上各指標(biāo)的含量，并做統(tǒng)計。
[0056] 3, 4-二羥基苯甲醛對高脂飲食ApoE-/-小鼠血管功能的影響：
[0057] 將實驗所得胸主動脈完整放入事先配好的冰Krebs液里，于顯微鏡下小心剔除血 管周圍脂肪。將剔好脂肪的血管剪成3-4mm長的小環(huán)，注意不要撕扯損壞血管內(nèi)壁，隨即 小心輕輕掛上血管環(huán)裝置。將血管浸在37°C，充氧的krebs液中，開始平衡，平衡條件為張 力1.5g，時間間隔為lOmin。待到血管張力處于1.5g，加終濃度為10-6M的去氧腎上腺素 (PE)讓血管開始預(yù)收縮。當(dāng)張力曲線處于平臺期時，洗去PE，并重新平衡血管。血管平衡 好后，加IOmLkrebs液，3min后加PE定終濃度為10-5,當(dāng)張力曲線處于平臺期時，開始加 Ach，濃度從10-9到10-3. 5開始遞增。記錄張力值，計算舒張率并作關(guān)系曲線，與對照組比 較。
[0058] 胸主動脈H&E染色：
[0059] 將實驗所得胸主動脈用4%甲醛溶液固定（至少24h)。固定好后，取出組織，置于 包埋盒中，流水過夜洗滌，除去留在組織內(nèi)的固定液及其結(jié)晶沉淀。然后對組織進行脫水， 脫水使用梯度濃度的酒精，70 %、80 %、90 %、95 %、100 %共五缸，每缸1小時。脫完水后，將 組織連同包埋盒先后移入2個熔化的石蠟液（62°C)中，每缸浸漬2小時。浸蠟后的組織放 在裝有蠟液的容器中（擺好在蠟中的位置一一豎放），待蠟液表層凝固即迅速放入冷水中 冷卻，即做成含有組織塊的蠟塊。容器可用光亮且厚的紙折疊成紙盒或金屬包埋框盒。并對 各個組織進行編號，以免差錯。包埋好的蠟塊用刀片修成規(guī)整的四棱臺，夾在輪轉(zhuǎn)式切片機 的蠟塊鉗內(nèi)，使蠟塊切面與切片刀刃平行，旋緊。切片厚度為6微米，切出一片接一片的蠟 帶，用毛筆輕托輕放在水上（45°C)展開。撈至載玻片上鋪正，將載玻片放在烤片機（45°C) 上干燥。干燥后的切片放入烘箱中進行脫蠟，2小時后，在二甲苯進行脫蠟，再逐級經(jīng)純酒精 及梯度酒精直至蒸餾水。將脫完蠟的載玻片按流程進行H&E染色。
[0060] 油紅0染色：
[0061] 將完整胸主動脈小心縱向剖開，平整放在容器中。倒入油紅0,浸沒血管，靜置30 分鐘。時間到后，用75%乙醇洗2小時。最后拍照，統(tǒng)計。
[0062] 數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)誤（X土SEM)表示，兩兩比較采用t檢驗，組間比較采用單 因素方差分析進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。
[0063][實驗結(jié)果]
[0064] 高劑量組、中劑量組、低劑量組分別與模型組比較，*P〈0. 05, **P〈0. 01， #*P〈0. 001。
[0065] 高脂飲食小鼠血清中甘油三酯的含量檢測結(jié)果見圖1。給予3, 4-二羥基苯甲醛的 小鼠血清中甘油三酯的含量低于僅高脂飲食未給予3, 4-二羥基苯甲醛小鼠血清中甘油三 酯的含量（差異有統(tǒng)計學(xué)意義）。
[0066] 高脂飲食小鼠血清中C反應(yīng)蛋白的含量檢測結(jié)果見圖2。給予3, 4-二羥基苯甲 醛的小鼠血清中C反應(yīng)蛋白的含量低于僅高脂飲食未給予3, 4-二羥基苯甲醛小鼠血清中C反應(yīng)蛋白的含量（差異有統(tǒng)計學(xué)意義）。
[0067] 高脂飲食小鼠血清中總膽固醇的含量檢測結(jié)果見圖3。給予3, 4-二羥基苯甲醛的 小鼠血清中總膽固醇的含量低于僅高脂飲食未給予3, 4-二羥基苯甲醛小鼠血清中總膽固 醇的含量（差異有統(tǒng)計學(xué)意義）。
[0068] 高脂飲食小鼠血清中低密度脂蛋白的含量檢測結(jié)果見圖4。給予3, 4-二羥基苯甲 醛的小鼠血清中低密度脂蛋白的含量低于僅高脂飲食未給予3, 4-二羥基苯甲醛小鼠血清 中低密度脂蛋白的含量（差異有統(tǒng)計學(xué)意義）。
[0069] 3, 4-二羥基苯甲醛對高脂飲食小鼠內(nèi)皮依賴性血管舒張功能的影響見圖5。給予 3, 4-二羥基苯甲醛的小鼠血管較僅高脂飲食未給予3, 4-二羥基苯甲醛小鼠血管具有更強 的內(nèi)皮依賴性舒張率。
[0070] 3, 4-二羥基苯甲醛對高脂飲食小鼠血管增生的影響見圖6?？捎^察到給予3, 4-二 羥基苯甲醛的小鼠血管增生較僅高脂飲食未給予3, 4-二羥基苯甲醛小鼠明顯減小。
[0071] 3, 4-二羥基苯甲醛對高脂飲食小鼠血管粥樣硬化的影響見圖7?？捎^察到給予3， 4-二羥基苯甲醛的小鼠血管較僅高脂飲食未給予3, 4-二羥基苯甲醛小鼠血管紅色斑塊明 顯數(shù)量更少、顏色更淡。
[0072][結(jié)論]
[0073] 以上的實驗證明3,4_二羥基苯甲醛可以降低高脂飲食小鼠血清中甘油三酯、C反 應(yīng)蛋白、總膽固醇、低密度脂蛋白含量，提高內(nèi)皮依賴性血管舒張率、抑制血管增生以及減 少動脈粥樣斑塊形成。
【主權(quán)項】
1. 3,4-二羥基苯甲醛作為制備降血脂藥物的用途。 2. 3,4_二羥基苯甲醛作為制備治療或/和預(yù)防高脂血癥的藥物中的用途。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述的藥物是治療或/和預(yù)防血管 內(nèi)皮損傷的藥物。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述的藥物是治療或/和預(yù)防血管 增生的藥物。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于：所述的藥物是治療或/和預(yù)防動脈粥樣 硬化的藥物。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于：所述的藥物是降低血清中甘油三酯、C反 應(yīng)蛋白、總膽固醇、低密度脂蛋白中一種或幾種含量的藥物。7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項所述的用途，其特征在于：所述的藥物是由有效量的3， 4-二羥基苯甲醛為活性成分，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于：所述的制劑是口服制劑、注射制劑。9. 一種降血脂藥物組合物，其特征在于：由有效量的3,4-二羥基苯甲醛為活性成分， 加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其特征在于：所述的制劑是口服制劑、注射制 劑。
【專利摘要】本發(fā)明公開了3，4-二羥基苯甲醛用于制備降血脂、治療或/和預(yù)防與血脂偏高有關(guān)的血管內(nèi)皮損傷、血管增生或動脈粥樣硬化藥物的用途。與目前臨床上常用的同類藥物相比，3，4-二羥基苯甲醛價格低廉、來源廣泛，具有明顯的優(yōu)勢。
【IPC分類】A61P3/06, A61K31/11, A61P9/00, A61P9/10
【公開號】CN105078939
【申請?zhí)枴緾N201510546751
【發(fā)明人】代蓉, 林青, 李秀芳, 周寧娜
【申請人】云南中醫(yī)學(xué)院
【公開日】2015年11月25日
【申請日】2015年8月31日