用于預(yù)防或治療糖尿病和促進(jìn)β-細(xì)胞存活的TPL2激酶抑制劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及Τρ12激酶抑制劑用于促進(jìn)β -細(xì)胞存活和功能的用途。這開辟了預(yù) 防或治療糖尿病的新的治療領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病特征在于空腹?fàn)顟B(tài)下或口服葡萄糖耐受測(cè)試期間施用葡萄糖之后升高水 平的血糖（高血糖）。在I型糖尿?。═DlM)或胰島素依賴型糖尿?。↖DDM)中，患者產(chǎn)生 少量或不產(chǎn)生胰島素（調(diào)節(jié)葡萄糖利用的激素）。TlDM是導(dǎo)致β-細(xì)胞破壞的自身免疫疾 病，所述β-細(xì)胞是生物體中存在于胰島中的唯一分泌胰島素的細(xì)胞。通過自身免疫激活 后的促炎性細(xì)胞因子介導(dǎo)β-細(xì)胞攻擊。在過去的十年中，胰島移植已成為TlDM的一種有 前途的替代治療。這種技術(shù)需要從死者捐贈(zèng)胰腺分離胰島并將它們移植到患者的肝臟。成 功移植可改善血糖控制，減輕患者胰島素依賴及提高生活質(zhì)量。然而，臨床結(jié)果并不總是歸 因于移植過程中或移植之后胰島質(zhì)量的顯著損失。胰島的損失由包括即刻血液介導(dǎo)的炎癥 反應(yīng)（IBMIR)和適應(yīng)性免疫反應(yīng)在內(nèi)的幾個(gè)原因引起。增加的證據(jù)表明細(xì)胞因子在這兩個(gè) 過程中起到關(guān)鍵的作用。細(xì)胞因子本身可以直接觸發(fā)胰島細(xì)胞死亡。事實(shí)上，細(xì)胞因子如 IL-I β (白細(xì)胞介素1 β )、TNF- α (腫瘤壞死因子a)和IFN- γ (干擾素 γ )在TlDM和胰 島移植中具有重要的促炎癥和促凋亡作用。雖然胰島移植后服用免疫抑制劑，但它們不靶 向于細(xì)胞因子介導(dǎo)的對(duì)胰島的損傷。抗-TNF當(dāng)今被廣泛用于胰島移植以預(yù)防IBMIR :盡管 它改善胰島接受者的結(jié)果，它不能完全阻止炎癥現(xiàn)象。在這種情況下，靶向于介導(dǎo)炎癥的其 他細(xì)胞因子將是非常重要的。
[0003] 此外，2型糖尿?。═2DM)或者非胰島素依賴型糖尿?。∟IDDM)是一個(gè)嚴(yán)重的健康 問題，到2030年預(yù)計(jì)其將影響到世界各地的3. 5億以上的個(gè)體，其中約6000萬將在歐洲。 因?yàn)橄嚓P(guān)的發(fā)病率和死亡率，糖尿病是對(duì)健康和社會(huì)保障體系負(fù)擔(dān)最高的一個(gè)，并且會(huì)隨 著人口的老齡化而增加。目前，沒有可用的治療可以阻止T2DM的進(jìn)展。目前的治療主要集 中在降低血液血糖或降低胰島素抵抗，這是不充分防止后續(xù)疾病進(jìn)展和下游糖尿病并發(fā)癥 的治療策略。事實(shí)上，國際健康組織強(qiáng)烈推薦開發(fā)作用于疾病的發(fā)病源的治療而不僅僅是 對(duì)其癥狀的治療。因此，需要超越當(dāng)今一代的抗血糖劑的創(chuàng)新治療，來治療T2DM患者并防 止這種疾病的發(fā)生和發(fā)展。
[0004] 應(yīng)該記得，T2DM的病理生理特點(diǎn)在于外圍慢性胰島素抵抗和β細(xì)胞功能和質(zhì)量 的逐漸下降（Kudva等人，1997 !DeFronzo 1988)。肥胖是T2DM發(fā)展的主要風(fēng)險(xiǎn)因素 （Burke 等人，1999 ;⑶C 1997)，并且其被認(rèn)為通過肥胖相關(guān)的胰島素抵抗賦予T2DM增加的風(fēng)險(xiǎn) (Ludvik等人，1995)。然而，大多數(shù)肥胖人群（且相對(duì)胰島素抵抗）不患糖尿病，而通過增 加 β細(xì)胞的胰島素分泌來補(bǔ)償（Polonsky 2000)。因此，現(xiàn)在廣為接受的是，T2DM的胰島 素抵抗（雖然其病理生理學(xué)很重要）不足以建立疾病，除非是β細(xì)胞功能的主要缺陷并存 (Butler等人，2003 !Leibowitz等人，2009年）。因此，旨在提高具有發(fā)展為T2DM的確定 的高風(fēng)險(xiǎn)的人群中增加的β細(xì)胞功能和存活的藥理學(xué)策略是減緩T2DM的進(jìn)展或甚至防止 T2DM所必不可少的。
[0005] 應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步指出，雖然肥胖（一種狀態(tài)其中其他方面健康的受試者具有身體質(zhì)量 指數(shù)（BMI)大于或等于30kg/m2)是T2DM的一個(gè)關(guān)鍵組成部分，但是特別是在西方世界，許 多患者按傳統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)是不超重的。因此患有T2DM的個(gè)人可呈現(xiàn)多變臨床特點(diǎn)。因此，有許多 消瘦型糖尿病患者（BMI低于25kg/m2,甚至低于20kg/m2的人群）和許多超重的但沒有糖 尿病的人群。相關(guān)并發(fā)癥的臨床表現(xiàn)和特征相對(duì)于肥胖者在T2DM的消瘦型患者中不同。 因此，消瘦型T2DM可以被認(rèn)為是一個(gè)獨(dú)特的臨床實(shí)體。在診斷的消瘦型患者更可能是老年 人，并且可以具有對(duì)某些病理生理特征，特別是較少的胰島素抵抗和較差的胰島素分泌能 力的傾向。一些研究提示在這種消瘦型患者中差的β細(xì)胞功能。
[0006] 最近，已經(jīng)變清楚，慢性炎癥是T2DM的一個(gè)標(biāo)志，其影響胰腺β -細(xì)胞的功能和質(zhì) 量。如前所述，由于不能適當(dāng)補(bǔ)償胰島素抵抗，患者可因此成為糖尿病人。在人類中，胰島 內(nèi)β細(xì)胞最初通過增加胰島素輸出補(bǔ)償胰島素抵抗。因此，由于β細(xì)胞質(zhì)量增加不足（或 實(shí)際下降）的T2DM的發(fā)作是由于相對(duì)于非糖尿病胰島素抵抗個(gè)體的增加的β-細(xì)胞凋亡。
[0007] 事實(shí)上，先天免疫系統(tǒng)的慢性活化被發(fā)現(xiàn)與β細(xì)胞功能和質(zhì)量的減少有關(guān)。已發(fā) 現(xiàn)T2DM患者的胰島顯示升高水平的促炎性細(xì)胞因子如IL-I β和TNF-α、多樣化的趨化因 子，并被巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)（Donath和Shoelson，2011 ;Dinarello等人，2010)。長(zhǎng)期暴露在高 濃度的IL-Ιβ對(duì)β細(xì)胞和人胰島起不利的影響。將人胰島暴露于代謝應(yīng)激例如升高的葡 萄糖（葡萄糖毒性）和棕櫚酸酯（脂毒性）濃度增加 IL-I β和趨化因子的水平。由巨噬細(xì) 胞和/或β細(xì)胞產(chǎn)生的進(jìn)入胰島的炎性細(xì)胞因子可能有助于β細(xì)胞死亡和胰島素分泌功 能衰竭（Donath 和 Shoelson，2011 ;Dinarello 等人，2010 ;Maedler 等人，2002)?；谶@些 觀察，用于T2DM治療的免疫調(diào)節(jié)策略已經(jīng)出現(xiàn)（B5ni-Schnet?ler等人，2012 ;Larsen等人， 2009 ;Larsen等人，2007)。在用IL-I β受體拮抗劑（IL-IRA)治療2型糖尿病患者中觀察 到非常溫和降低的高血糖和改善的β細(xì)胞功能（Larsen等人，2007)，但沒有觀察到實(shí)際的 臨床影響。這第一次證明了在T2DM中使用免疫調(diào)節(jié)策略的概念，但靶向于其他細(xì)胞因子將 可能更為有效。
[0008] 在這些不同的情況中（T2DM、T1DM、胰島移植），特異性控制不僅由IL-I β誘導(dǎo)，也 由其他細(xì)胞因子（TNF-α和IFN-γ)誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的蛋白激酶可以是用于對(duì)抗β細(xì)胞 衰竭的治療性干預(yù)的令人感興趣的靶點(diǎn)。已經(jīng)報(bào)道胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK)-1/2 (ρ44/42 促分裂原活化蛋白（MP)激酶）的活化在IL-Ιβ對(duì)β細(xì)胞的不利影響中發(fā)揮作用 (Maedler等人，2004)。然而，必須指出的是，這取決于刺激的性質(zhì)，ERK1/2通路參與β細(xì) 胞內(nèi)的廣泛的生物過程（Maedler等人，2004 ;Costes等人，2006)。
[0009] 作為例子，ERK1/2在葡萄糖介導(dǎo)的β細(xì)胞存活中起關(guān)鍵作用（Costes等人， 2006)。同時(shí)，調(diào)節(jié)對(duì)細(xì)胞因子（IL-Ιβ、TNF-a、IFN-y)特異性反應(yīng)的ERK1/2活性的蛋白 的確認(rèn)不僅可以對(duì)促進(jìn)β細(xì)胞功能障礙的分子機(jī)制提供重要的新的見解，還可以建議這 些蛋白作為治療靶點(diǎn)，以減輕T2DM中的β細(xì)胞衰竭。
[0010] 因此，確認(rèn)特異性控制炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)的促炎性細(xì)胞因子IL-I β、TNF_ a和IFN- γ 的新靶點(diǎn)，對(duì)于最佳預(yù)防或治療糖尿病（例如TlDM和T2DM)，以及對(duì)于有效和安全的胰島細(xì) 胞移植可能是令人感興趣的。
[0011] 在數(shù)量龐大的潛在可靶向的激酶中，多年前公開了 Tpl2激酶作為通過NFkB活性 參與炎癥的激酶，因?yàn)橐驯砻鳓肠?2激酶導(dǎo)致ρ105的降解，并隨之釋放Rel亞單元。因此， 在美國公開號(hào)2003/0319427中推測(cè)了治療NFkB可能參與的自身免疫疾病，例如多發(fā)性硬 化癥（MS)、炎性腸?。↖BS)、胰島素依賴型糖尿病（TlDM)、銀肩病和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以及很 多其他疾病的基本原理，盡管沒有公開關(guān)于TlDM的相關(guān)結(jié)果或具體的技術(shù)支持。
[0012] 最近，通過使用Tpl2敲除（KO)小鼠研究了 Tpl2激酶在介導(dǎo)肥胖相關(guān)的胰島素抵 抗中的作用（Perfield等人2011)，并且提示Τρ12激酶是用于改善與肥胖有關(guān)的代謝狀態(tài)， 特別是用于恢復(fù)胰島素敏感性的有希望的治療靶點(diǎn)。然而，另一個(gè)小組使用相同的Τρ12Κ0 小鼠對(duì)這種初步的結(jié)果提出質(zhì)疑，因?yàn)樽髡呶茨苷业皆谡{(diào)節(jié)肥胖相關(guān)的代謝紊亂中的任何 顯著作用（Lancaster等人，2012)，甚至他們的結(jié)論是Τρ12缺失加劇高脂肪（HF)飲食的影 響（即相比于野生型小鼠的受損的胰島素耐受性）。他們也沒有觀察到ERK1/2磷酸化中 HF飲食誘導(dǎo)的增加，這駁斥了 Tpl2激酶在體內(nèi)調(diào)節(jié)對(duì)飲食反應(yīng)的ERK激活中的突出作用。 更令人感興趣的是，他們公開在wt和Τρ12 /小鼠中一般胰島形態(tài)是相似的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 發(fā)明簡(jiǎn)述
[0014] 如在下面實(shí)施例中所述，本發(fā)明人已證明ΜΑΡ3激酶Τρ12特異性介導(dǎo)通過β細(xì) 胞中炎性細(xì)胞因子誘導(dǎo)的信號(hào)通路，并在觸發(fā)β細(xì)胞功能障礙和破壞中起到重要作用，而 且Τρ12激酶抑制劑保護(hù)胰腺β細(xì)胞免于凋亡。因此，Τρ12激酶抑制劑有用于預(yù)防和治 療糖尿病并促進(jìn)許多應(yīng)用中的β細(xì)胞存活。更特別地，本發(fā)明人已表明，出乎意料的是， Τρ12激酶在小鼠和人胰島中的β細(xì)胞中表達(dá)，并且通過IL-I β單獨(dú)或細(xì)胞因子混合物 (IL-1 β +TNF a +IFN γ )特別參與ERK1/2的活化，并且已證明Τρ12激酶的藥理學(xué)抑制防止 ERK1/2的活化和IL-I β單獨(dú)或細(xì)胞因子混合物的慢性暴露對(duì)β細(xì)胞和人胰島的不利影 響。重要的是，在葡萄糖介導(dǎo)的β細(xì)胞存活中被描述起關(guān)鍵作用的葡萄糖誘導(dǎo)的ERK1/2 和P90RSK磷酸化（Costes等人，2006)均沒有被Τρ12抑制劑治療修飾。
[0015] 在本公開之前，Τρ12激酶尚未被證明是表達(dá)于β細(xì)胞中，以及其調(diào)節(jié)信號(hào)通路如 ERK1/2通路的作用是未知的，所述通路對(duì)導(dǎo)致T2DM的β細(xì)胞功能障礙和凋亡中所涉及的 所述三大促炎性細(xì)胞因子反應(yīng)中。
[0016] 這些新的發(fā)現(xiàn)支持Τρ12激酶抑制劑的新型藥物干預(yù)手段，例如通過抑制β細(xì)胞 凋亡促進(jìn)β細(xì)胞存活和功能。此外，本發(fā)明可用于通過促進(jìn)移植物存活來增加胰島細(xì)胞移 植的效率，而不是通過目前的免疫抑制治療來獲得該增加的效率。
[0017] 因此，本發(fā)明的這些和其他方面的非限制性技術(shù)方案如下：
[0018] 在第一方面，本發(fā)明涉及一種Tpl2 (Tumor Progression Locus-2腫瘤進(jìn)展位 點(diǎn)-2)激酶抑制劑，其用于在需要其的患者中預(yù)防或治療糖尿病的用途。
[0019] 在第二方面，本發(fā)明涉及一種Tpl2激酶基因表達(dá)抑制劑，其用于在需要其的患者 中預(yù)防或治療糖尿病的用途。
[0020] 在第三方面，本發(fā)明涉及一種Τρ12激酶抑制劑或一種Τρ12激酶基因表達(dá)抑制劑， 其用于在需要其的患者中改善胰腺β細(xì)胞的存活或功能的用途。
[0021] 在第四方面，本發(fā)明涉及一種藥物組合物或一種組分試劑盒（kit-of-part)，其包 含Tpl2激酶抑制劑或Tpl2激酶基因表達(dá)抑制劑和抗糖尿病藥物。
[0022] 在第五方面，本發(fā)明涉及一種Τρ12激酶抑制劑或一種Τρ12激酶基因表達(dá)抑制劑， 其用于增強(qiáng)抗糖尿病藥物的臨床療效的用途。
[0023] 在第六方面，本發(fā)明涉及一種Τρ12激酶抑制劑或一種Τρ12激酶基因表達(dá)抑制劑， 其用于增強(qiáng)抗糖尿病藥物的抗炎作用和/或保存抗糖尿病藥物的胰腺β細(xì)胞活力和/或 功能的用途。
[0024] 在第七方面，本發(fā)明涉及一種適用于哺乳動(dòng)物胰腺β細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基，其包含 Τρ12激酶抑制劑或Τρ12激酶基因表達(dá)抑制劑。
[0025] 在第八方面，本發(fā)明涉及一種體外或離體改善胰腺β細(xì)胞群的存活和/或功能的 方法，所述方法包括使所述群接觸培養(yǎng)基的步驟，所述培養(yǎng)基包含有效量的Τρ12激酶抑制 劑或Τρ12激酶基因表達(dá)抑制劑。
[0026] 在第九方面，本發(fā)明涉及一種用于改善胰腺β細(xì)胞移植物的存活和/或功能的方 法，所述方法包括向具有胰腺β細(xì)胞移植物的患者施用有效量的Τρ12激酶抑制劑或Τρ12 激酶基因表達(dá)抑制劑的步驟。
[0027] 在又一個(gè)方面，本發(fā)明還涉及一種Τρ12激酶抑制劑或一種Τρ12激酶基因表達(dá) 抑制劑，其用于在具有胰腺β細(xì)胞移植物的患者中預(yù)防或治療即刻血液介導(dǎo)的炎癥反應(yīng) (IBMIR)的用途。
[0028] 本發(fā)明因此包含：
[0029] -種通過將所述細(xì)胞暴露于Τρ12激酶抑制劑，來抑制在胰腺β細(xì)胞中對(duì)兩種或 多種促炎性細(xì)胞因子反應(yīng)的ERK1/2和p90RSK活化（激酶活性）的方法。所述方法可以在 體外、離體或體內(nèi)進(jìn)行。例如，β細(xì)胞可能存在于用于移植的胰島細(xì)胞的制備中。
[0030] 優(yōu)選地，所述兩種或多種促炎性細(xì)胞因子選自：IL-I β、TNF- α和IFN- γ。優(yōu)選 地，所述促炎性細(xì)胞因子至少包括IL-I β和TNF-α。優(yōu)選地，Τρ12激酶抑制劑不是用來 完全抑制Τρ12激酶（例如通過完整的基因敲除）。優(yōu)選，例如足以達(dá)到50或60%的體內(nèi) Τρ12激酶活性抑制的部分抑制。此外，所述抑制"特異性"對(duì)兩種或多種促炎性細(xì)胞因子 (例如由炎性巨噬細(xì)胞分泌的生理細(xì)胞因子和趨化因子）反應(yīng)，但不抑制對(duì)葡萄糖反應(yīng)的 ERK 1/2和p90RSK活化（激酶活性）。因此，所述的特異性特別有用于提供一個(gè)可行的藥 物干預(yù)，因?yàn)樗桓蓴_葡萄糖介導(dǎo)的β細(xì)胞存活中的ERK1/2的作用。
[0031] 因此，在本發(fā)明的實(shí)施方案中，在胰腺β細(xì)胞中對(duì)兩種或多種促炎性細(xì)胞因子反 應(yīng)的ERK1/2和p90RSK活化（激酶活性）的抑制不損害葡萄糖介導(dǎo)的所述β細(xì)胞的存活。
[0032] 此外，在本發(fā)明的實(shí)施方案中，在胰腺β細(xì)胞中對(duì)兩種或多種促炎性細(xì)胞因子反 應(yīng)的ERK1/2和p90RSK活化（激酶活性）的抑制具有抑制所述胰腺β細(xì)胞的凋亡的作用， 這可以例如通過分析所調(diào)用的裂解的半胱天冬酶-3和裂解的PARP的水平進(jìn)行驗(yàn)證。
[0033] 在這些和其他方面中，Τρ12激酶抑制劑任選與抗糖尿病藥物聯(lián)用如胰高血糖素樣 肽-I (GLP-I)受體激動(dòng)劑，如二肽基肽酶-4 (DPP-4)(導(dǎo)致GLP-I降解的酶）的抑制劑，例 如以保護(hù)由于細(xì)胞因子誘導(dǎo)的胰島素分泌失敗而患有T2DM或存在患有T2DM風(fēng)險(xiǎn)的患者中 的所述胰腺β細(xì)胞。如本文的實(shí)驗(yàn)結(jié)果所證明的，對(duì)具有確定發(fā)展為T2DM高風(fēng)險(xiǎn)的受試 者應(yīng)用所述抑制劑可以在受試者中顯示進(jìn)展，或者甚至防止T2DM。
[0034] 此外，在這些和其他方面中，Τρ12激酶抑制劑任選用于抗糖尿病藥物中如胰高 血糖素樣肽-I(GLP-I)受體激動(dòng)劑，例如施用至胰腺β細(xì)胞移植物以防止接受患者中的 IBMIR0
[0035] 因此，抑制劑和任選的藥物可以體內(nèi)使用以最終改善葡萄糖耐量，同時(shí)降低空腹 血糖（即抑制高血糖）和血清胰島素水平和\或改善或增加所述細(xì)胞的胰島素敏感性。優(yōu) 選地，這不會(huì)影響體重。
[0036] 在本發(fā)明的其他方面，提供一種用于如上所述的方法中的腫瘤進(jìn)展位點(diǎn)-2 (Τρ12) 激酶抑制劑，或者提供一種用于如上所述的方法中的Τρ12激酶抑制劑和一種抗糖尿病藥 物。
[0037] 在本發(fā)明的其他方面，提供腫瘤進(jìn)展位點(diǎn)_2(Τρ12)激酶抑制劑在制備用于如上 所述的方法中的藥物中的用途，或者提供Τρ12激酶抑制劑和抗糖尿病藥物二者在制備這 種藥物中的用途。
[0038] 下文中討論本發(fā)明的這些和其他方面。
[0039] 發(fā)明詳述
[0040] 如上所述，本發(fā)明基于以下發(fā)現(xiàn):ΜΑΡ3激酶Τρ12特異性介導(dǎo)由β細(xì)胞中的炎性 細(xì)胞因子誘導(dǎo)的信號(hào)通路，并且在觸發(fā)β細(xì)胞功能障礙和破壞中起到重要作用，Τρ12激酶 抑制劑保護(hù)胰腺β細(xì)胞免于凋亡。因此，Τρ12激酶抑制劑有用于預(yù)防和治療糖尿病并在 許多應(yīng)用中促進(jìn)β細(xì)胞存活。
[0041] 本發(fā)明人已經(jīng)表明，Τρ12激酶表達(dá)于小鼠和人胰島中的β細(xì)胞，并且通過IL-I β 單獨(dú)或細(xì)胞因子混合物（IL-1 β +TNFa +IFNy)特別參與ERK1/2的活化，并且已經(jīng)證明 Τρ12激酶的藥理學(xué)抑制可防止ERK1/2的活化和IL-I β單獨(dú)或細(xì)胞因子混合物的慢性暴露 對(duì)β細(xì)胞和人胰島的不利影響。
[0042] 并且，本發(fā)明人已經(jīng)表明，Τρ12激酶抑制劑通過增強(qiáng)例如其對(duì)胰腺β細(xì)胞 活力和功能對(duì)抗促炎性細(xì)胞因子的的有益作用，也有用于改善DPP-4抑制劑（例如西 他列?。⊿itagliptin))的GLP-I激動(dòng)劑（例如毒蜥外泌肽-4 (Exendin-4)、利拉魯肽 (Iiraglutide))的抗糖尿病功效。他們已經(jīng)表明毒蜥外泌肽-4、利拉魯肽、西他列汀和 Tpl2激酶抑制劑的組合與單獨(dú)的各個(gè)化合物相比，能更有效地保護(hù)β細(xì)胞對(duì)抗炎性細(xì)胞 因子的不利作用。
[0043] 基于Τρ12激酶失活的顯著保護(hù)作用，他們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，抑制Τρ12激酶顯著地降低人 胰島中細(xì)胞因子誘導(dǎo)的胰島素分泌失敗。特別地，已發(fā)現(xiàn)使用Τρ12激酶抑制劑和毒蜥外泌 肽-4的組合治療人胰島是可行的和功能性的，并且完全保護(hù)人胰島免受細(xì)胞因子的不利 影響。重要地，使用Τρ12激酶抑制劑增強(qiáng)毒蜥外泌肽-4在β細(xì)胞和人胰島中對(duì)抗炎癥的 保護(hù)作用。
[0044] 治療方法和用涂
[0045] 本發(fā)明提供用于預(yù)防（例如預(yù)防性治療）或治療糖尿病的方法和組合物（例如藥 物組合物）。
[0046] 在第一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種Τρ12激酶抑制劑，其用于在需要其的患者中預(yù)防 或治療糖尿病的用途。
[0047] 如本文所使用，術(shù)語"腫瘤進(jìn)展位點(diǎn)-2 (Τρ12)激酶"指ΜΑΡ3Κ家族中的絲氨酸/ 蘇氨酸激酶（也稱為COT和ΜΑΡ3Κ8)，其是ERK1/2通路中ΜΕΚ1/2的上游，已經(jīng)表明其涉及 TNF- α的產(chǎn)生和信號(hào)傳導(dǎo)。示例性天然多核苷酸序列編碼的人類Tpl2激酶由GenBank數(shù) 據(jù)庫以登錄號(hào)ΝΜ_〇〇5204提供。
[0048] 如本文所使用，術(shù)語"抑制劑"是指任何天然或合成的化合物，其能夠降低基因產(chǎn) 物的活性。因此，抑制劑可以抑制由基因直接或間接編碼的蛋白的活性。例如可以通過結(jié)合 于蛋白獲得直接抑制，并由此防止蛋白結(jié)合于靶點(diǎn)（例如結(jié)合伴侶）或防止蛋白活性（如 酶活性）。例如可以通過結(jié)合于蛋白的預(yù)定靶點(diǎn)例如結(jié)合伴侶獲得間接抑制，由此阻斷或降 低蛋白的活性。
[0049] 如本文所使用，術(shù)語"Τρ12激酶抑制劑"是指任何天然或合成的化合物，其導(dǎo)致 Τρ12激酶的活性降低。典型地，Τρ12激酶抑制劑引起蛋白MEK的磷酸化水平的降低，并且 還抑制對(duì)脂多糖（LPS)反應(yīng)的TNF-α的產(chǎn)生，正如Kaila等人，2007中所描述。
[0050] 本領(lǐng)域技術(shù)人員無需過度負(fù)擔(dān)即可評(píng)估給定化合物是否是Τρ12激酶抑制劑。典 型地，如果使用MEK作為底物在所述化合物的存在下進(jìn)行Τρ12激酶酶法測(cè)定之后，與不存 在所述化合物所培養(yǎng)的MEK相比，磷酸化的MEK水平降低，則該化合物被視為是Τρ12激酶 抑制劑。磷酸化的MEKl蛋白的水平可以通過使用特異于所述MEKl蛋白的磷酸化形式的抗 體的蛋白印跡（Western blot)或ELISA進(jìn)行測(cè)定。例如，可以使用GST-MEKl作為底物直 接測(cè)定Tpl2/Cot激酶活性，并且可以通過ELISA來檢測(cè)GST-MEKl的絲氨酸殘基217和221 的磷酸化，正如Kaila等人，2007中所描述。
[0051] 此外，可以如Kaila等人，2007中所描述，體外（例如，在原代人單核細(xì)胞或人血 液中）或體內(nèi)（例如，LPS誘導(dǎo)的TNF-α產(chǎn)生的大鼠模型）測(cè)定給定化合物導(dǎo)致的TNF-α 的抑制。
[0052] 如本文所使用，"糖尿病"指廣義類的代謝性疾病，其特征在于受損的胰島素產(chǎn)生 和葡萄糖耐受。糖尿病包括1型和2型糖尿病、妊娠糖尿病、糖尿病前期、胰島素抵抗、代謝 綜合征、空腹血糖受損和糖耐量受損。1型糖尿病也稱為胰島素依賴型糖尿病（IDDM)。所 述術(shù)語在本文中可互換使用。2型也被稱為非胰島素依賴型糖尿?。∟IDDM)。
[0053] 如本文所使用，術(shù)語"需要其的患者"是指已被診斷為1型糖尿病、2型糖尿病、妊 娠糖尿病、糖尿病前期、胰島素抵抗、代謝綜合征、空腹血糖受損或糖耐量受損的受試者，或 者指存在發(fā)展為任何這些疾病的風(fēng)險(xiǎn)的受試者。需要治療的患者還包括那些遭受傷害、疾 病或外科手術(shù)影響胰腺的患者，或者他們產(chǎn)生胰島素的能力受損的個(gè)體。此類患者可以是 任何哺乳動(dòng)物，例如，人、狗、貓、馬、豬、羊、牛、小鼠、大鼠或兔（優(yōu)選人）。
[0054] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述需要其的患者是肥胖患者。
[0055] 如本文所用的術(shù)語"肥胖"是其中存在過量的身體脂肪的狀態(tài)。肥胖的實(shí)用性定 義是基于身體質(zhì)量指數(shù)（BMI)，其計(jì)算為體重/身高米數(shù)的平方（kg/m2)。"肥胖"是指一種 狀態(tài)，其中一個(gè)其他方面健康的受試者具有大于或等于30kg/m2的BMI。"肥胖患者"是指具 有大于或等于30kg/m2的BMI的其他方面健康的受試者。超重受試者是處于肥胖風(fēng)險(xiǎn)的受 試者。
[0056] 在另一實(shí)施方案中，所述需要其的患者為消瘦型患者。
[0057] 因此，消瘦型患者是具有小于或等于25kg/m2或者甚至小于或等于20kg/m 2的BMI 的其他方面健康的受試者。
[0058] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述需要其的患者為非胰島素抵抗的患者。
[0059] 如本文所使用的術(shù)語"預(yù)防疾病"并不是指絕對(duì)術(shù)語。相反，例如2型糖尿病的預(yù) 防是指與疾病有關(guān)的發(fā)作的延遲、癥狀的頻率減少、或癥狀的嚴(yán)重度減輕。因此，預(yù)防是指 預(yù)防措施的寬泛概念，其將被本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解。在一些情況下，癥狀的頻率和嚴(yán)重度 被降低至非病理學(xué)水平，例如使得個(gè)體不需要傳統(tǒng)的胰島素替代治療。在一些情況中，接受 根據(jù)本發(fā)明的Tpl2激酶抑制劑的患者的癥狀頻率或嚴(yán)重度僅為未治療的患有該疾病的個(gè) 體所經(jīng)歷的癥狀頻率或嚴(yán)重度的90、80、70、60、50、40、30、20、10、5或1%。
[0060] 相似地，術(shù)語"治療疾病"不是是指絕對(duì)術(shù)語。在一些情況中，根據(jù)本發(fā)明的Τρ12 激酶抑制劑尋求降低導(dǎo)致糖尿病癥狀的胰島素產(chǎn)生細(xì)胞的損失。在一些情況中，用本發(fā)明 的抑制劑的治療導(dǎo)致改善的預(yù)后或癥狀頻率或嚴(yán)重度的降低。
[0061] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述Τρ12激酶可以是低分子量拮抗劑，例如小的有機(jī)分子。
[0062] 在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，所述Τρ12激酶抑制劑及其制備方法描述于國際專利 申請(qǐng)WO 2006/124944,并具有下式（I)或其藥學(xué)上可接受的鹽：
[0064] (I)
[0065] 其中：
[0066] R1選自C31。環(huán)烷基、芳基、3-10元雜環(huán)烷基、和雜芳基，其各自任選被選自以下的 1-4個(gè)基團(tuán)取代：
[0067] a)鹵素，b) CN，c) NO2, d) N3, e) OR7, f) NRSR9, g)氧代，h)硫代，i) S (0) PR7, j) SO2NR8R9, k) C (0) R7, I) C (0) OR7, m) C (0) NRSR9, n) Si (C1 6烷基）3, o) C1 6烷基，p) C 2 6烯基，q) C 2 6炔基， r) C1 6烷氧基，s) C i 6烷基硫基，t) C i 6鹵代烷基，u) C 3 i。環(huán)烷基，V)芳基，w) 3-10兀環(huán)雜燒 基，和X)雜芳基，
[0068] 其中ο) -X)中的任何一個(gè)任選被1-4個(gè)Rw基團(tuán)取代；
[0069] R2選自C31。環(huán)烷基、芳基、3-10元雜環(huán)烷基、和雜芳基，其各自任選被選自以下的 1-4個(gè)基團(tuán)取代：
[0070] a)鹵素，b) CN，c) N02, d) N3, e) OR7, f) NRSR9, g)氧代，h)硫代，i) S (0) PR7, j) SO2NR8R9, k) C (0) R7, I) C (0) OR7, m) C (0) NRSR9, n) Si (C1 6烷