斷食后以0.75g/kg體重投放葡萄糖。在預(yù)定時(shí)間測定血糖值。另外，為了進(jìn)行胰島素抗性實(shí)驗(yàn)，將胰島素(0.5單位/kg體重；EliLilly (禮來制藥)公司制)注射進(jìn)4小時(shí)斷食后的小鼠的腹腔內(nèi)。血楽中的中性脂肪(甘油三酯)的濃度，通過Triglyceride E-test Wako (甘油三酯E試驗(yàn))來確定。
[0087](組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、炎癥的評價(jià))
從小鼠采取丘腦下部、胰島、腸間膜的脂肪組織、肝臟、附睪的脂肪組織及皮下脂肪組織，利用定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)來定量內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)記基因(Chop、ERdj4及Xbpls)、炎癥標(biāo)記基因(TNFa及MCP — I)的表達(dá)量。通過膠原酶消化(Liberase TL ；RocheDiagnostics (羅氏診斷產(chǎn)品)制)從小鼠中分離胰島，以Histopaque (商標(biāo))梯度(Histopaque 1077 ;西格瑪_奧爾德里奇公司制)進(jìn)行精制。
[0088]使用TRIzol (注冊商標(biāo))RNA提取試劑(Life Technologies (生命科學(xué))公司制)從各組織提取全RNA，利用iScript (商標(biāo))cDNA合成試劑盒(B1-Rad公司制)來合成 cDNA。接著，利用 StepOnePlus (商標(biāo))實(shí)時(shí) PCR 體系、Fast TaqMan Universal MasterMix、及 Fast SYBR Green Master Mix (Applied B1systems 應(yīng)用生物系統(tǒng)公司制)定量實(shí)時(shí)PCR。mRNA水平通過18S rRNA進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。
[0089](統(tǒng)計(jì)分析)
數(shù)據(jù)通過平均土標(biāo)準(zhǔn)誤差(s.e.m)來表示。適當(dāng)采用單因素方差分析、重復(fù)測定方差分析、以及繼重復(fù)測定方差分析的多重比較測定(Bonferroni/Dunn法)。對于2組之間的差的分析，采用學(xué)生t檢驗(yàn)(Student’s t_test)。P < 0.05時(shí)則視作差異是有意義的。
[0090](結(jié)果) 以下，示出本實(shí)施例的結(jié)果。圖9表示遺傳性肥胖小鼠的體重的經(jīng)時(shí)變化(η = 14)。根據(jù)圖9(A)，在投藥封入PLGA粒子中的Nano Orz的遺傳性肥胖小鼠中，即使非常低的投放量也有效地抑制了體重増加。另一方面，根據(jù)圖9 (B)，在投藥未封入PLGA粒子的Orz的遺傳性肥胖小鼠中，即使投藥320 μ g/g體重/日，也未能有效地抑制體重増加。
[0091]圖10示出了遺傳性肥胖小鼠的血糖值得經(jīng)時(shí)變化(η = 14) ο根據(jù)圖10(A)，投藥Nano Orz的遺傳性肥胖小鼠，即使是Orz的最大投放量的大致1/100也確實(shí)地改善了高血糖。另一方面，根據(jù)圖10(B)，投藥Orz的遺傳性肥胖小鼠，即使以320 μ g/g體重/日進(jìn)行投藥也未發(fā)現(xiàn)血糖值的有效變化。由此表明，遺傳性肥胖小鼠中的高血糖，相比于Orz通過Nano Orz而被顯著改善。
[0092]葡萄糖耐受性試驗(yàn)的結(jié)果示于圖11 (n = 14)。根據(jù)圖11㈧及圖11 (B)，投藥NanoOrz的遺傳性肥胖小鼠，即使較低投放量耐糖能的急劇降低也得到了顯著改善。另一方面，根據(jù)圖11 (C)和圖11 (D)，投藥Orz的遺傳性肥胖小鼠，即使以320 μ g/g體重/日進(jìn)行投藥，也未發(fā)現(xiàn)耐糖能的急劇降低得到改善。
[0093]胰島素抗性試驗(yàn)的結(jié)果示于圖12 (η = 14)。根據(jù)圖12⑷及圖12⑶，投藥NanoOrz的遺傳性肥胖小鼠，即使較低投放量也有效改善了胰島素抗性。另一方面，根據(jù)圖12(C)及圖12(D)，投藥Orz的遺傳性肥胖小鼠，即使以320 yg/g體重/日進(jìn)行投藥也未發(fā)現(xiàn)胰島素抗性的改善。
[0094]圖13表示遺傳性肥胖小鼠的血漿中的中性脂肪濃度(η = 6)。中性脂肪濃度在投藥Nano Orz的情況下，即使較低投放量也得到有效抑制，但在相同投放量的Orz的情況下，中性脂肪濃度未得到抑制。
[0095]圖14⑷及圖14⑶，分別表示在丘腦下部中的Chop及ERdj4的表達(dá)量(N = 8)。Nano Orz的情況下以1.3及5 μ g/g體重的投放量有效地抑制了 Chop的表達(dá)量，但是Orz的情況下即使以320 μ g/g體重/日進(jìn)行投藥也未能抑制Chop的表達(dá)量。另夕卜，Nano Orz的情況下以0.3、1.3及5 μ g/g體重的投放量有效地抑制了 ERdj4的表達(dá)量，但是Orz的情況下即使以320 μ g/g體重/日進(jìn)行投藥也未能抑制Chop的表達(dá)量。
[0096]圖14(C)及圖14(D)分別表示了胰島中ERdj4及Xbpls的表達(dá)量(N = 8)。NanoOrz以0.3、1.3及5yg/g體重的投放量有效地抑制了 ERdj4的表達(dá)量，但是Orz即使以320 μ g/g體重/日進(jìn)行投藥也未能抑制ERdj4的表達(dá)量。另外，Nano Orz以0.3及1.3 μ g/g體重的投放量有效地抑制了 Xbpls的表達(dá)量，但是Orz即使以320 μ g/g體重/日進(jìn)行投藥也未能抑制Xbpls的表達(dá)量。
[0097]圖15㈧及圖15⑶分別表示腸間膜的脂肪組織中的Chop及Xbpls的表達(dá)量(N=8)。Orz的情況下在320 μ g/g體重/日的情況下有效地抑制了 Chop的表達(dá)。另一方面，Nano Orz的情況下以5 μ g/g體重的投放量有效地抑制了 Chop的表達(dá)量。另外，Nano Orz的情況下以5 μ g/g體重的投放量有效地抑制了 Xbpls的表達(dá)量，但是Orz的情況下即使以320 μ g/g體重/日進(jìn)行投藥也未能有效地抑制Xbpls的表達(dá)量。
[0098]圖15(C)及圖15 0))分別示出肝臟中的Chop及Xbpls的表達(dá)量(N = 8)。NanoOrz的情況下以1.3及5 μ g/g體重的投放量有效地抑制了 Chop的表達(dá)量，但是Orz的情況下即使以320 μ g/g體重/日進(jìn)行投藥也未能抑制ERdj4的表達(dá)量。另外，Nano Orz的情況下以0.3及1.3 μ g/g體重的投放量有效地抑制了 Xbpls的表達(dá)量，但是Orz的情況下即使以320 μ g/g體重/日進(jìn)行投藥也未能有效地抑制Xbpls的表達(dá)量。
[0099]圖16㈧及圖16⑶分別示出了附睪的脂肪組織中的TNFa及MCP — I的表達(dá)量(N = 8)。Nano Orz的情況下以0.3、1.3及5 μ g/g體重的投放量有效地抑制了 TNF α的表達(dá)量，但是Orz的情況下即使以320 μ g/g體重/日進(jìn)行投藥也未能抑制TNF α的表達(dá)量。另外，Nano Orz的情況下以0.3及1.3 μ g/g體重的投放量有效地抑制了 MCP — I的，但是Orz的情況下即使以320 μ g/g體重/日進(jìn)行投藥也未能有效地抑制MCP — I的表達(dá)量。
[0100]圖16(C)及圖16⑶分別示出了皮下脂肪組織中的TNFa及MCP — I的表達(dá)量。Nano Orz的情況下以0.3、1.3及5 μ g/g體重的投放量有效地抑制了 TNF α的表達(dá)量，但是Orz的情況下即使以320 μ g/g體重/日進(jìn)行投藥也未能抑制TNF α的表達(dá)量。另外，NanoOrz的情況下以0.3、1.3及5 μ g/g體重的投放量有效地抑制了 MCP — I的表達(dá)量，但是Orz的情況下即使以320 μ g/g體重/日進(jìn)行投藥也未能有效地抑制MCP -1的表達(dá)量。
[0101]圖14及圖15的結(jié)果表明，γ-谷維素即使以過剩量的320 μ g/g體重/日進(jìn)行投藥，也未能抑制丘腦下部、胰島及肝臟中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，但封入PLGA粒子中的γ-谷維素，以非常低的投放量即抑制了丘腦下部、胰島、腸間膜的脂肪組織及肝臟中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。另夕卜，圖16的結(jié)果表明，γ-谷維素即使以過剩量的320 μ g/g體重/日進(jìn)行投藥，也未能抑制附睪的脂肪組織及皮下脂肪組織中的炎癥，但是封入PLGA粒子的γ-谷維素，以非常低的投放量即抑制了附睪的脂肪組織及皮下脂肪組織中的炎癥。
[0102]本發(fā)明，在不脫離本發(fā)明得廣義精神和范圍的情況下，可以進(jìn)行各種實(shí)施方式及變形。另外，上述實(shí)施方式只是用于說明本發(fā)明，而不是用于限定本發(fā)明的范圍。即，本發(fā)明的范圍，不是通過實(shí)施方式，而是通過權(quán)利要求來表示的。并且，在權(quán)利要求以及其通過的發(fā)明范圍內(nèi)所實(shí)施的各種變形，視作本發(fā)明范圍內(nèi)。
[0102]本申請基于2012年12月21日申請的日本國專利申請2012 — 280303號公報(bào)。本說明書中，通過參考引入日本國專利申請2012 — 280303號公報(bào)的說明書、權(quán)利要求書、附圖的整體。
【工業(yè)上的可利用性】
[0103]本發(fā)明適于胰島素抗性的改善、或肥胖、血脂異常、糖耐量受損、糖尿病、動(dòng)脈硬化癥、以及包括潰瘍性大腸炎、克羅恩病等腸道炎癥性疾病在內(nèi)的炎癥性疾病等疾病的治療或預(yù)防。通過適用本發(fā)明，能夠提高該疾病的治療或預(yù)防的成績，確保患者的生活品質(zhì)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種組合物，含有: γ-谷維素； 生物相容性顆粒，將所述γ -谷維素封入其內(nèi)部。2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于， 所述生物相容性顆粒含有數(shù)均粒徑為2.5?100nm的聚乳酸-乙醇酸共聚物或其聚乙二醇修飾物。3.如權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于，用于改善胰島素抗性。4.如權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于，用于抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。5.如權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于，用于抑制源于腸上皮細(xì)胞的IL - 8的分泌。6.如權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于， 用于治療或預(yù)防選自由肥胖、血脂異常、糖耐量受損、糖尿病、動(dòng)脈硬化癥及炎癥性疾病所形成的組的疾病。7.如權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于，對于患者以I日以上的投放間隔進(jìn)行投放。8.如權(quán)利要求7所述的組合物，其特征在于，所述投放間隔為7日以上14日以下。9.一種飲食，含有權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的組合物。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種組合物，所述組合物含有γ‐谷維素和將γ‐谷維素封入其內(nèi)部的生物相容性顆粒。生物相容性顆粒可以含有數(shù)均粒徑為2.5～1000nm的聚乳酸-乙醇酸共聚物或其聚乙二醇修飾物。該組合物可用于改善胰島素抗性。另外，該組合物可以用于治療或預(yù)防選自由肥胖、血脂異常、糖耐量受損、糖尿病、動(dòng)脈硬化癥及炎癥性疾病所形成的組的疾病。
【IPC分類】A61P29/00, A61K47/34, A61P1/04, A61P9/10, A61P3/10, A23L1/30, A61P3/06, A61P43/00, A61P3/04, A61K31/575, A61K9/14
【公開號】CN105163739
【申請?zhí)枴緾N201380067472
【發(fā)明人】益崎裕章, 小塚智沙代
【申請人】株式會(huì)社先端醫(yī)療開發(fā)
【公開日】2015年12月16日
【申請日】2013年12月19日
【公告號】EP2937087A1, US20150342898, WO2014098190A1