沒有其他明顯雜峰，各峰之間峰面積之比與H原子數(shù)比 例基本相等，說明該分子結(jié)構(gòu)式與實驗設(shè)計的產(chǎn)物分子式相吻合。對比1^￡6 5_-64和 mPEG5_-G4-OH的核磁共振氫譜圖發(fā)現(xiàn)，原來位于I. 32ppm和I. 35ppm附近的甲基峰（l，m) 經(jīng)脫保護(hù)后完全消失，這說明mPEG5_-G4樹枝狀脫保護(hù)成功，得到產(chǎn)物mPEG 5_-G4-OH。
[0051] 圖2為mPEG_-G4-PLLA5_與mPEG 5_-G4-OH的核磁共振譜圖對比。從共聚物的核 磁圖中可以明顯地觀察到聚L-乳酸的特征峰，即5. 25ppm以及I. 75ppm附近兩組特征峰。 且根據(jù)積分計算可知，該聚合物的結(jié)構(gòu)為mPEG5_-G4-PLLA 5_。
[0052] 使用與上述制備例類似的方法，通過控制步驟（3)的重復(fù)次數(shù)和步驟（4) 中L-丙交酯的投加量，可分別得到下面實施例中所用到的IiiPEGmiw-G1-PLLA 5mi^ mPEG5CICICI_G3 _PLLA5。。。、和 mPEGioooQ-Gz-PLLAi。。。。、mPEGsooQ-Gi _PLLA25。。、mPEG5__G3 _PLLA2500 〇
[0053] 本發(fā)明實驗所用的雷帕霉素由藥廠提供，規(guī)格符合藥典規(guī)定即可。
[0054] 從目前的研究結(jié)果來看，透析材料的種類和截留分子量的大小，對載藥納米微球 的性能并沒有顯著影響，所以透析袋可依據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員的需要選擇，而本發(fā)明所使用 的透析袋材質(zhì)為再生纖維素（RC)，截留分子量為2000~7000。實施例中，高速離心分離， 離心機轉(zhuǎn)速8000~16000r/min，時間為10~20min ;冷凍干燥的溫度-65~-20°C。
[0055] 雷帕霉素納米緩釋微球（以下簡稱微膠囊）載藥量與包封率的測定：
[0056] 稱取3mg的載藥微球干粉，用IOml的二氯甲烷將其完全溶解后，采用紫外分光光 度計在278nm下測定溶液的吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得到雷帕霉素的含量。并計算載藥量 和包封率。
[0057] 載藥量=載藥微球中藥物的量/載藥微球的總質(zhì)量X 100% ;
[0058] 包封率=載藥微球中藥物的量/實驗加入藥物的量X 100%。
[0059] 實施例1
[0060] 一種雷帕霉素載藥納米緩釋微球的制備方法，其包含有以下步驟：（1)稱 取四種結(jié)構(gòu)分別為 mPEG.-GfPLIA。。。、mPEG5_-G3-PLLA5。。。、mPEG_-G 4-PLLA_ 和 mPEG5_-G2-PLLA1Q_的聚乙二醇單甲醚-樹枝狀-聚L-乳酸聚合物各5. Omg，分別溶解于 8mL的四氫呋喃后，各加入4. Omg的雷帕霉素，在400W的超聲條件下超聲15min使雷帕霉素 完全溶解后作為油相；（2)將四個油相分別轉(zhuǎn)移至截留分子量為7000的透析袋內(nèi)，將透析 袋分別置于盛有60ml去離子重蒸水的燒杯中，燒杯置于35°C的恒溫水浴中進(jìn)行透析，并隔 8小時更換燒杯中的外相溶液；(3)當(dāng)透析時間達(dá)到24小時，待溶劑四氫呋喃揮發(fā)完畢，透 析袋內(nèi)得到載藥膠束溶液；(4)將四個不同結(jié)構(gòu)的聚乙二醇單甲醚-樹枝狀-聚L-丙交酯 聚合物制備的載藥膠束溶液分別經(jīng)高速離心分離，并用15mL超濾水洗滌三次，離心分離得 到白色粉末沉淀物，冷凍干燥后得到平均粒徑分別為230、300. 2、311. 5和328. 4nm的雷帕 霉素載藥納米微球，其粒徑分布的分散系數(shù)分別為〇. 247、0. 181、0. 165和0. 185,載藥量分 別為 42. 1%、41. 5%、33. 5%和 38. 5%。
[0061] 實施例2
[0062] 一種雷帕霉素載藥納米緩釋微球的制備方法，其包含有以下步驟：（1)稱取三種 結(jié)構(gòu)分別為 1^￡65。。。-61^^1^25。。、1^￡6 5。。。-心^^1^25。。和1^￡65。。。-6 4^^1^25。。的聚乙二醇單甲 醚-樹枝狀-聚L-乳酸聚合物各5. Omg，分別溶解于8mL的四氫呋喃后，各加入3. Omg的雷 帕霉素，在400W的超聲條件下超聲15min使雷帕霉素完全溶解后作為油相；（2)將三個油 相分別轉(zhuǎn)移至截留分子量為7000的透析袋內(nèi)，將透析袋分別置于盛有60ml去離子重蒸水 的燒杯中，燒杯置于35°C的恒溫水浴中進(jìn)行透析，并隔4小時更換燒杯中的外相溶液；(3) 當(dāng)透析時間達(dá)到24小時，待溶劑四氫呋喃揮發(fā)完畢，透析袋內(nèi)得到載藥膠束溶液；(4)將三 個不同結(jié)構(gòu)的聚乙二醇單甲醚-樹枝狀-聚L-乳酸聚合物制備的載藥膠束溶液分別經(jīng)高 速離心分離，并用15mL超濾水洗滌三次，離心分離得到白色粉末沉淀物，冷凍干燥后得到 平均粒徑分別為211. 1、281. 9和296. 7nm的雷帕霉素載藥納米微球，其粒徑分布的分散系 數(shù)分別為〇? 213、0. 155和0? 134,載藥量分別為30. 7%、32. 6%和33. 29%。
[0063] 實施例3
[0064] 一種雷帕霉素載藥納米緩釋微球的制備方法，其包含有以下步驟：（1)將分子結(jié) 構(gòu)為mPEG5QQQ-G 4-PLLA5。。。的聚乙二醇單甲醚-樹枝狀-聚L-乳酸聚合物5. Omg溶解于四 氫呋喃8mL形成的油相，分別稱取5. 0mg、4. 0mg、3. Omg和1.0 mg的雷帕霉素置于透析袋中； (2)將透析袋置于60ml的去離子重蒸水的燒杯中，燒杯置于35°C的恒溫水浴中進(jìn)行透析24 小時，待溶劑四氫呋喃擴散完畢，透析袋內(nèi)得到載藥膠束溶液；離心分離得到白色粉末沉淀 物，冷凍干燥后得到平均粒徑分別為343. 7nm、311. 5nm、287. 4nm以及347. Onm，分布系數(shù)分 別為0. 290、0. 165、0. 185以及0.231的雷帕霉素載藥納米微球，其載藥量分別為47. 8%、 42. 1%、34. 8% 以及 13. 9%，包封率分別為 95. 4%、94. 7%、93. 0% 以及 83. 6%。
[0065] 實施例4
[0066] 一種雷帕霉素載藥納米緩釋微球的制備方法，其包含有以下步驟：（1)將分子結(jié) 構(gòu)為mPEG_-G4-PLLA25。。的聚乙二醇單甲醚-樹枝狀-聚L-乳酸聚合物5. Omg溶解于四 氫呋喃8mL形成的油相，分別稱取5. 0mg、4. 0mg、3. Omg和1.0 mg的雷帕霉素置于透析袋中； (2)將透析袋置于60ml的去離子重蒸水的燒杯中，燒杯置于35°C的恒溫水浴中進(jìn)行透析24 小時，待溶劑四氫呋喃擴散完畢，透析袋內(nèi)得到載藥膠束溶液；離心分離得到白色粉末沉淀 物，冷凍干燥后得到平均粒徑分別為316. 5nm、282. lnm、249. 6nm以及300. 4nm，分布系數(shù)分 別為0.238、0.216、0.134以及0.316的雷帕霉素載藥納米微球，其載藥量分別為44.6%、 40. 6%、33. 3% 以及 10. 3%，包封率分別為 89. 2%、91. 4%、88. 9% 以及 82. 4%。
[0067] 實施例5
[0068] 一種雷帕霉素載藥納米緩釋微球的制備方法，其包含有以下步驟：（1)稱取分子 結(jié)構(gòu)為mPEG5QQQ-G 4-PLLA5。。。的聚乙二醇單甲醚-樹枝狀-聚L-乳酸聚合物5. Omg，溶解 于8mL的丙酮后，加入4. Omg的雷帕霉素，在400W的超聲條件下超聲15min使雷帕霉素完 全溶解后作為油相；（2)將油相轉(zhuǎn)移至截留分子量為7000的透析袋內(nèi)，將透析袋置于盛有 60ml去離子重蒸水的燒杯中，燒杯置于35°C的恒溫水浴中進(jìn)行透析，并隔8小時更換燒杯 中的外相溶液；（3)當(dāng)透析時間達(dá)到24小時，待溶劑丙酮揮發(fā)完畢，透析袋內(nèi)得到載藥膠束 溶液；冷凍干燥后得到平均粒徑為198. Onm的雷帕霉素載藥納米微球，其粒徑分布系數(shù)為 0. 116,載藥量為35. 7%，包封率為95. 1%。
[0069] 實施例6
[0070] -種雷帕霉素載藥納米緩釋微球的制備方法，其包含有以下步驟：（1)稱取分子 結(jié)構(gòu)為mPEG 5_-G4-PLLA5_的聚乙二醇單甲醚-樹枝狀-聚L-乳酸聚合