物兩份各5. Omg， 分別溶解于8mL的丙酮后，各加入4. Omg的雷帕霉素，在400W的超聲條件下超聲15min 使雷帕霉素完全溶解后作為油相；(2)將兩個油相分別轉(zhuǎn)移至截留分子量為7000的透 析袋內(nèi)，將透析袋分別置于盛有60ml去離子重蒸水的燒杯中，燒杯分別置于30°C、25°C 的恒溫水浴中進(jìn)行透析，并隔8小時更換燒杯中的外相溶液；（3)當(dāng)透析時間達(dá)到24小 時，待溶劑丙酮揮發(fā)完畢，透析袋內(nèi)得到載藥膠束溶液；冷凍干燥后得到平均粒徑分別為 212. lnm、235. 4nm的雷帕霉素載藥納米微球，其粒徑分布系數(shù)為0. 148、0. 176,載藥量分別 為 33. 4%、30. 8%，包封率為 89. 2%、82. 3%。
[0071] 實(shí)施例7
[0072] -種雷帕霉素載藥納米緩釋微球的制備方法，其包含有以下步驟：（1)分別稱取 結(jié)構(gòu)為mPEG_-G 4-PLLA_和mPEG_-G4-PLLA25。。的聚乙二醇單甲醚-樹枝狀-聚L-乳酸 聚合物各3mg分別溶于5mL的四氫呋喃后，分別加入2. 5mg雷帕霉素，在水浴中200W超聲 15分鐘使雷帕霉素完全溶解后作為油相；(2)在25°C、600r/min的磁力攪拌下，將5mL的有 機(jī)溶液以〇. 〇5ml/分鐘的速度分別滴加至IOml的去離子水中，得到各自的載藥膠束溶液； (3)將溶液轉(zhuǎn)移至33°C的恒溫水浴中透析8h，除去四氫呋喃有機(jī)溶劑；（4)冷凍干燥后得到 平均粒徑分別為85. lnm、73. 2nm的納米載藥微球，其粒徑分布系數(shù)為0. 187、0. 174,載藥量 分別為40. 0%和37. 50%，包封率分別為76. 9%和75. 4%。
[0073] 實(shí)施例8
[0074] -種雷帕霉素載藥納米緩釋微球的制備方法，其包含有以下步驟：（1)分別稱取 分子結(jié)構(gòu)為mPEG 5。。。-G4-PLLAm。。的聚乙二醇單甲醚-樹枝狀-聚L-乳酸聚合物三份各 5. Omg,分別溶解于四氫呋喃8mL形成的油相，各稱取4. Omg的雷帕霉素置于透析袋中；（2) 分別將透析袋置于60ml的去離子重蒸水的燒杯中，燒杯分別置于25°C、30°C和35°C的恒溫 水浴中進(jìn)行透析24小時，待溶劑四氫呋喃擴(kuò)散完畢，透析袋內(nèi)得到載藥膠束溶液；離心分 離得到白色粉末沉淀物，冷凍干燥后得到平均粒徑分別為250. 2、273. 5和311. 5nm，分布系 數(shù)分別為〇. 153、0. 198和0. 165的雷帕霉素載藥納米微球，其載藥量分別為26.9%、32.0% 和42. 1%，包封率分別為60. 6%、7L 9%和94. 7%。
[0075] 上述各實(shí)施例的雷帕霉素載藥納米微球的粒徑分布采用英國Malvern公司的 Zetasizer Nano激光粒度儀檢測。
[0076] 根據(jù)實(shí)施例，可以給出本發(fā)明所制備的雷帕霉素納米緩釋微球的特點(diǎn)：
[0077] (1)粒徑較小且分布均勻，粒徑在100~1000 nm之間，均屬于納米載藥微球的范 圍，因此可以通過血液輸送。而且可以通過不同分子結(jié)構(gòu)的聚合物得到不同粒徑的載藥微 球；
[0078] (2)載藥量高、包封率高，在一般情況下，載藥量在30%~40%之間，且包封率在 80%~95%之間；
[0079] (3)由于采用透析法及溶劑揮發(fā)法進(jìn)行自組裝的制備，因此，只要控制溫度和聚合 物與藥物的投料比等比較好控制的條件，即可得到重現(xiàn)性極好的載藥微球，較其它諸如乳 化或復(fù)乳等方法，膠束的規(guī)整性、重現(xiàn)性等更加穩(wěn)定，如附圖3~圖6所示，能保證醫(yī)療效果 等穩(wěn)定。
[0080] (4)體外釋放時間長，可達(dá)到10~40天，如附圖7所示，為按照優(yōu)選實(shí)施例1制備 的三種材料的雷帕霉素納米緩釋微球的緩釋曲線，可以看出雷帕霉素納米緩釋微球初始釋 放速度較快，在10小時內(nèi)藥物的累計釋放量在10%至50%之間，主要由于兩方面的原因造 成藥物突釋：一是吸附在微球表面的藥物的快速釋放，二是由于微球內(nèi)部與外水相的藥物 濃度差大，使得微球內(nèi)部的雷帕霉素的擴(kuò)散速度比較快。
[0081] 但在釋放時間大于1天后，隨著外水相藥物濃度的提高，載藥微球的藥物釋放速 度逐漸趨緩。當(dāng)釋放時間達(dá)到200小時（約17天），三種微球的累積釋放量也分別在40% 至90%之間。同時，由于三種聚合物的結(jié)構(gòu)不同，隨著代數(shù)的增加，聚乳酸的量增加，使得微 球更致密，使得載藥微球中的藥物擴(kuò)散速度減慢，造成了不同的釋放速度曲線。因此，可以 根據(jù)臨床藥物釋放速度的需求來設(shè)計藥物載體聚合物的分子結(jié)構(gòu)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種雷帕霉素納米緩釋微球，其特征在于，載藥體為線性-樹枝狀大分子聚己二醇 單甲離-樹枝狀-聚心乳酸。2. 如權(quán)利要求1所述的緩釋微球，其中所述載藥體聚己二醇單甲離-樹枝狀-聚k乳 酸由mPEGz-Gx-PLlA表示，其中mPEG表示線性主鏈聚己二醇單甲離，Z表示線性主鏈的相對 分子量，Gx中的G表示由二居甲基丙酸支化合成得到的樹枝狀結(jié)構(gòu)，X表示為樹狀結(jié)構(gòu)的合 成代數(shù)，PLLA表示接枝的聚乳酸支鏈，Y表示各聚乳酸支鏈的相對分子量，且其中X為1~ 6;Y為 5000 ~10000;z為 350 ~20000。3. 如權(quán)利要求1或2所述的緩釋微球，其平均粒徑為100~lOOOnm，載藥量為1~ 45%，包封率為75%W上。4. 如權(quán)利要求2所述的緩釋微球，其中所述載藥體聚己二醇單甲離-樹枝狀-聚k乳 酸的結(jié)構(gòu)中，X為1~6,相對分子量Z為5000~10000的mPEG線性主鏈接有2X個化LA接 枝鏈段，每個鏈段的相對分子量Y為2500~10000,當(dāng)合成代數(shù)X為4,即4代聚己二醇單 甲離-樹枝狀-聚k乳酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：其中R表示化LA,n為mPEG主鏈上聚氧己帰離的鏈節(jié)數(shù)，其取值使得mPEG主鏈的相對 分子量為5000~10000。5. -種制備權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的雷帕霉素納米緩釋微球的方法，其中所述緩釋 微球通過透析法自組裝形成，包括： (1) 將雷帕霉素與聚己二醇單甲離-樹枝狀-聚k乳酸溶于內(nèi)相溶劑中作為油相； (2) 將油相放入外相溶劑中進(jìn)行透析處理； (3) 透析至內(nèi)相溶劑揮發(fā)完畢，得到載藥膠束溶液；及 (4) 載藥膠束溶液經(jīng)分離得到載藥膠束沉淀物。6. -種制備權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的雷帕霉素納米緩釋微球的方法，其中所述緩釋 微球通過滴加法自組裝形成，包括： (1) 將雷帕霉素與聚己二醇單甲離-樹枝狀-聚k乳酸溶于內(nèi)相溶劑中作為油相； (2) 將油相滴加入外相溶劑中，當(dāng)溶液出現(xiàn)乳光，聚合物自組裝形成載藥膠束； (3) 減壓蒸發(fā)除去內(nèi)相溶劑，得到載藥膠束溶液；及 (4) 載藥膠束溶液經(jīng)離必分離得到載藥膠束沉淀物。7. 如權(quán)利要求5或6所述的方法，油相中雷帕霉素與聚己二醇單甲離-樹枝狀-聚 k乳酸的質(zhì)量比例為10~100:100 ;所述內(nèi)相溶劑選自四氨巧喃、丙麗、甲醇、二氯甲焼和 H氯甲焼中的一種或幾種；且所述外相溶劑選自水、甲醇、己醇、丙醇和異丙醇中的一種或 幾種。8. 如權(quán)利要求5或6所述的方法，步驟似中的操作在溫度10~40°C、p冊~8下進(jìn) 行。9. 如權(quán)利要求5或6所述的方法，步驟（2)中的操作在溫度15~35°C。10. 如權(quán)利要求5或6所述的方法，載藥膠束沉淀物經(jīng)洗涂、冷凍干燥制成得到雷帕霉 素載藥納米緩釋微球干粉。
【專利摘要】一種雷帕霉素納米緩釋微球，其載藥體為線性-樹枝狀大分子聚乙二醇單甲醚-樹枝狀-聚L-乳酸。緩釋采用自組裝的方式制備得到，該納米微球最高載藥量可達(dá)45％，包封率在75％以上。并且具有緩釋、緩釋靶向功能，在體內(nèi)具有長效緩釋特點(diǎn)，可以應(yīng)用于局部而有效地降低全身的毒副作用。
【IPC分類】A61P37/06, A61K31/436, A61K9/16, A61K47/34
【公開號】CN105193732
【申請?zhí)枴緾N201410245734
【發(fā)明人】戎宗明, 程樹軍, 郭睿, 楊李影, 惠志倩
【申請人】華東理工大學(xué)
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2014年6月5日