一種刺五加提取物及其抗氧化用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體涉及一種刺五加提取物及含有該提取物的藥物制劑， 該刺五加提取物可以用來制備抗氧化的藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 刺五加 Acanthopanax senticosu (Rupr. Et Maxim) Harms 的干燥根及根莖入藥，其 莖、葉也可藥用。刺五加與人參同屬于五加科植物，是一種落葉植物，因小枝密生針刺而得 名。主產(chǎn)于中國東北部（黑龍江、吉林、遼寧、河北）、俄羅斯遠東地區(qū)及日本北海道等地，刺 五加是我國東北地區(qū)典型的藥用植物，味辛、微苦、性溫、無毒。刺五加具有益氣健脾、補腎 安神、益精壯骨之功效。本草綱目稱刺五加為"本經(jīng)上品"，能"補中益氣，堅筋骨強意志，久 服輕身耐老"。民間有"寧得一把五加，不用金玉滿車"的說法。以刺五加為原料的中成藥 種類繁多，如刺五加片、刺五加注射液、安神補腦膠囊、腦安片等；另外中醫(yī)處方對刺五加需 求量也較大，刺五加全國年需求量500萬公斤以上，使刺五加的市場供應(yīng)日趨緊張。
[0003] 刺五加化學(xué)成分復(fù)雜，根和根莖的主要成分為酚苷類化合物，實驗證明刺五 加總苷是其生物活性成分之一。已分離出七種刺五加苷（A、B、C、D、E、F、G)含量比例 8:30:10:12:4:2:1，分別為胡蘿卜苷（A)，紫丁香酚苷（B)，乙基半乳糖普（C)，紫丁香樹脂 酚二糖苷（D)，此外還有E、F和G，以及L。近些年對刺五加莖葉的研究不斷深入，從葉中分 離得到齊墩果酸為配基的五加葉苷I、K、L和M等。
[0004] 現(xiàn)代藥理研究表明刺五加可增強機體非特異性防御能力，除具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫 瘤、抗衰老、抗輻射、抗損傷及抗疲勞作用外，還可治療心腦血管疾病、糖尿病、神經(jīng)衰弱等 癥。近年來，經(jīng)過對刺五加生理活性和化學(xué)成分方面的研究，表明刺五加有效成分為苷類， 其中刺五加苷B、E是主要有效成分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種刺五加提取物，該提取物的制備方法和液相分析方 法，含有該提取物的藥物制劑及利用該提取物制備抗氧化藥物的用途。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0007] -種刺五加提取物，該提取物由以下方法制備：
[0008] 步驟一：將刺五加干燥根及根莖粉碎，水蒸汽蒸透，烘干；
[0009] 步驟二：用75%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味；
[0010] 步驟三：對步驟二濃縮液依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得 到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；
[0011] 步驟四：正丁醇萃取物用AB-8大孔樹脂富集，先用10%乙醇沖洗10個柱體積除 去多糖，再用65%乙醇洗脫6個柱體積，收集65%洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥。
[0012] 進一步地，步驟一中蒸制方法為：高壓滅菌鍋105°C蒸制2小時。
[0013] 為了能夠通過建立HPLC指紋圖譜的方法控制不同產(chǎn)地、批次藥材制備的刺五加 提取物批間差異，所述提取物的液相分析方法為：
[0014] 色譜柱：DiamonsilC18 柱（4. 6mmX 250mm，5 y m);
[0015] 流動相：A為乙腈，B為0? I %磷酸溶液（三乙胺調(diào)節(jié)pH值至6. 5);
[0016] 梯度洗脫程序：0? 01 ~70min，A20% - 80% ;
[0017] 流動相流速：1. OmL ? min S
[0018] 檢測波長：240nm ;柱溫：30°C ;進樣量10 U L。
[0019] 藥物制劑，含有治療有效量的所述刺五加提取物和藥學(xué)上可接受的載體。
[0020] 所述的刺五加提取物在制備抗氧化的藥物中的應(yīng)用。
[0021 ] 所述的藥物制劑在制備抗氧化的藥物中的應(yīng)用。
[0022] 本發(fā)明提取物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物制劑的形式使用。
[0023] 所述藥物制劑含有治療有效量的本發(fā)明刺五加提取物，其余為藥物學(xué)上可接受 的、對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0024] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物制劑以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明提取物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
[0025] 本發(fā)明的優(yōu)點：本發(fā)明通過對刺五加藥材蒸制處理，生成更多小極性的化合物，增 強細胞膜通透性，具有抗氧化的作用；本發(fā)明提供的液相分析方法可以用于建立該提取物 的指紋圖譜，用于控制不同產(chǎn)地、批次藥材制備的提取物的批間差異。
【附圖說明】
[0026] 圖1為刺五加提取物的HPLC液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0027] 下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和范圍。
[0028] 實施例1 :刺五加提取物制備
[0029] 主要試劑和材料：刺五加藥材購自安徽亳州中藥材市場；食品級乙醇購自上海凌 峰化學(xué)試劑有限公司；醫(yī)藥級AB-8大孔樹脂購自天津波鴻樹脂有限公司；乙腈為HPLC級， 購于TEDIA ;85%磷酸為HPLC級，購于TEDIA ;色譜用純凈水為哇哈哈純凈水。
[0030] 方法：取刺五加藥材5kg粉碎，用紗布包裹，置于高壓滅菌鍋中蒸制2小時，溫度 105°C，取出置烘干箱中烘干；烘干藥材用75%乙醇熱回流提取三次，每次提取2小時，每次 用75%乙醇15L，合并提取液，濃縮至無醇味（3L);濃縮液依次用石油醚（3LX 3次）、乙酸 乙酯（3LX3次）和水飽和的正丁醇（3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃 取物和正丁醇萃取物；正丁醇萃取物用AB-8大孔樹脂富集，先用10 %乙醇沖洗10個柱體 積出去多糖，再用65 %乙醇洗脫6個柱體積，收集65 %洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥（545g)。
[0031] 實施例2:液相色譜分析
[0032] 供試品溶液配制：取實施例1方法制得的提取物5mg至50ml棕色容量瓶中，加 30ml 20%乙腈水溶液超聲溶解，冷卻至室溫后，繼續(xù)加20%乙腈水溶液定容。
[0033] 分析方法：
[0034] 高效液相色譜儀：Agilent 1260,二元栗；
[0035] 色譜柱：Diamonsil C18 柱（4. 6mmX 250mm，5 y m);
[0036] 流動相：A為乙腈，B為0.1 %磷酸溶液（三乙胺調(diào)節(jié)pH值至6. 5);
[0037] 梯度洗脫程序：0? 01 ~70min，A20% - 80% ;流動相流速：1. OmL ? min S
[0038] 檢測波長：240nm ;柱溫：30°C ;進樣量10UL。
[0039] 對用10批不同產(chǎn)地、批次當歸制備的提取物進行分析，建立指紋圖譜進行匹配， 結(jié)果1~9號峰在10批樣品色譜圖中均出現(xiàn)。因此標定9個峰為共有指紋峰，據(jù)此建立該 提取物的HPLC指紋圖譜，結(jié)果見圖1。
[0040] 實施例3 :刺五加提取物藥理試驗
[0041] 一、材料與方法
[0042] I. 1試劑及儀器
[0043]超氧化物歧化酶（SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px)，丙二醛（MDA)、羥脯氨酸 (Hyp)含量測定試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。
[0044] 紫外可見分光光度計（752C