型，上海第三分析儀器廠）；勻漿機(jī)，Glas-Col，USA ;低 溫高速離心機(jī)（Hettich Zentrifugen，Universal 16R，德國(guó)）。
[0045] 1. 2受試物：刺五加提取物，自制，制備方法見(jiàn)實(shí)施例1。
[0046] 1. 3動(dòng)物及處理：
[0047] 清潔級(jí)雄性10月齡老年昆明種小鼠40只，由中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重 47 ±3g，喂養(yǎng)7d以適應(yīng)環(huán)境，禁食12h，后眼眶靜脈叢采血，按血清中MDA水平和體重隨機(jī) 分成4組：對(duì)照組和刺五加提取物10g/L、30g/L、50g/L組，每組10只，均飼以普通嚙齒類動(dòng) 物飼料，自由攝食飲水，記錄每日進(jìn)食量，每周稱體重1次。各組按〇. 2mV (10g bw ?(!)分別 灌胃給予生理鹽水及l(fā)〇g/L、30g/L、50g/L刺五加提取物水溶液。6w后結(jié)束實(shí)驗(yàn)，禁食12h， 摘除眼球取血分離血清；頸椎脫白法處死動(dòng)物，快速分離肝臟和腦組織；硫化鈉脫去被毛， 剪取背部皮膚。所有樣品均在一 20°C凍存?zhèn)溆谩?br>[0048] 1. 4檢測(cè)指標(biāo)及方法
[0049] I. 4. 1皮膚Hyp含量測(cè)定
[0050] 二甲氨基苯甲醛比色法。取凍存的背部皮膚組織，用預(yù)冷生理鹽水漂洗，除去皮 下脂肪和其它結(jié)締組織，濾紙拭干，稱重，用剪刀剪碎，按1:9 (w/v)加入預(yù)冷生理鹽水制得 10%組織勾衆(zhòng)，3500g離心10min，分離上清，用于Hyp測(cè)定。Bradford法測(cè)定蛋白濃度。
[0051] 1 ? 4. 2肝臟和腦組織MAO-B活性測(cè)定
[0052] 取凍存組織用預(yù)冷的生理鹽水漂洗，制得10 %組織勻漿后測(cè)定MAO-B活性， Bradford法測(cè)定上清液蛋白。
[0053] 1 ? 4. 3血清抗氧化酶活性和MDA含量測(cè)定
[0054] SOD活性用黃嘌呤氧化酶法、GSH-Px活性用DTNB法，MDA用硫代巴比妥酸比色法。
[0055] 1. 5統(tǒng)計(jì)分析
[0056] 采用SPSS10. 0軟件包，多組均數(shù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)和單因素方差分析（ANOVA)， 各組間差異比較采用LSD法。
[0057] 二、結(jié)果
[0058] 2. 1 -般情況
[0059] 6w喂養(yǎng)后，各組間體重和進(jìn)食量均無(wú)顯著性差異，說(shuō)明給予刺五加提取物沒(méi)有影 響進(jìn)食。
[0060] 2. 2血清抗氧化酶活性及MDA含量（表1)
[0061] 刺五加提取物50g/L組血清SOD活性顯著增高，而MDA含量顯著低于對(duì)照組，刺五 加提取物l〇g/L、30g/L組顯示相似的變化趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各組間血清GSH-Px 活性無(wú)顯著性差異。
[0062] 表1刺五加提取物對(duì)老年小鼠血清中抗氧化酶活性及MDA含量的影響（X土s)
[0065] 與正常對(duì)照組比較aP〈0. 05。
[0066] 2. 3肝、腦組織中MAO-B活性和皮膚Hyp含量
[0067] 由表2可見(jiàn)，刺五加提取物50g/L可顯著降低老齡小鼠腦組織MAO-B活性，刺五加 提取物10, 30g/L作用不明顯。刺五加提取物對(duì)肝臟MAO-B活性影響不明顯。
[0068] 表2刺五加提取物對(duì)老年小鼠肝、腦組織中MAO-B活性和皮膚Hyp含量影響 (x±s)
[0069]
[0070] 與正常對(duì)照組比較aP〈0. 05。
[0071 ] Hyp含量可反應(yīng)膠原蛋白的合成情況，對(duì)維持皮膚彈性有重要作用。而攝入刺五加 提取物50g/L 6w后，老齡小鼠皮膚中Hyp含量較對(duì)照組明顯增加，接近2倍（1.04±0. 17vs 0. 58±0. 14)。
[0072] 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，50g/L刺五加提取物可增加老齡小鼠血清SOD活性，同時(shí)減少 MDA的生成，提示具有抗氧化生物活性。根據(jù)Harman的衰老自由基理論，氧化應(yīng)激是促進(jìn)機(jī) 體衰老的重要因素。MAO-B是催化單胺類神經(jīng)遞質(zhì)氧化脫氨基，同時(shí)生成H2O2的一種黃素 酶。研究表明：MAO-B催化生成的H2O2是腦內(nèi)氧化應(yīng)激的一個(gè)特異性來(lái)源。隨著年齡的增 長(zhǎng)，體內(nèi)MAO-B活性逐漸增強(qiáng)，繼而氧自由基生成增多，促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)老化。本研究中50g/ L刺五加提取物可降低腦中MO-B活性，而不影響肝臟中該酶活性，提示刺五加提取物可以 特異性的作用于腦組織MA0-B，對(duì)抑制神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)氧化應(yīng)激有一定作用。皮膚中Hyp含量反 映皮膚中膠原蛋白的生成情況，是衰老過(guò)程中敏感和特殊的生化指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)觀察到攝入 刺五加提取物的老齡小鼠皮膚Hyp含量明顯增加，提示刺五加提取物可能有助于增加皮膚 膠原蛋白合成，改善皮膚彈性。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果均提示刺五加提取物具有抗氧化延緩衰老的 作用。
[0073] 實(shí)施例4 :片劑的制備
[0074] 按實(shí)施例1方法先制得提取物，按其與賦形劑重量比為1:8的比例加入賦形劑，制 粒壓片。
[0075] 實(shí)施例5 : 口服液的制備
[0076] 按實(shí)施例1方法先制得提取物，按常規(guī)口服液制法制成口服液。
[0077] 實(shí)施例6 :膠囊劑或顆粒劑的制備
[0078] 按實(shí)施例1方法先制得提取物，按其與賦形劑重量比為1:9的比例加入賦形劑，制 成膠囊或顆粒劑。
[0079] 實(shí)施例7 :注射液的制備
[0080] 按實(shí)施例1方法制得提取物，加注射用水，精濾，灌封滅菌制成注射液。
[0081] 實(shí)施例8 :無(wú)菌粉針的制備
[0082] 按實(shí)施例1方法先制得提取物，溶于無(wú)菌注射用水中，攪拌使溶，用無(wú)菌抽濾漏斗 過(guò)濾，再無(wú)菌精濾，分裝于安瓿，低溫冷凍干燥后無(wú)菌熔封得粉針劑。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種刺五加提取物，其特征在于所述提取物由以下方法制備： 步驟一：將刺五加干燥根及根莖粉碎，水蒸汽蒸透，烘干； 步驟二：用75%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味； 步驟三：對(duì)步驟二濃縮液依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石 油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； 步驟四：正丁醇萃取物用AB-8大孔樹(shù)脂富集，先用10%乙醇沖洗10個(gè)柱體積除去多 糖，再用65%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，收集65%洗脫液，減壓濃縮，噴霧干燥。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于步驟一中蒸制方法為：高壓滅菌鍋105°C 蒸制2小時(shí)。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的刺五加提取物，其特征在于：所述提取物的液相分析方法 為： 色譜柱：Diamonsil C18 柱（4. 6mmX 250mm，5 y m); 流動(dòng)相：A為乙腈，B為0. 1%磷酸溶液(三乙胺調(diào)節(jié)pH值至6. 5); 梯度洗脫程序：〇.〇l~70min，A 20% - 80% ; 流動(dòng)相流速：1. OmL ? min S 檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm ;柱溫：30°C ;進(jìn)樣量10 y L04. 藥物制劑，其特征在于：所述制劑含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的刺五加提取 物和藥學(xué)上可接受的載體。5. 如權(quán)利要求1所述的刺五加提取物在制備抗氧化的藥物中的應(yīng)用。6. 如權(quán)利要求4所述的藥物制劑在制備抗氧化的藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種刺五加提取物及其抗氧化用途，屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及一種刺五加提取物及含有該提取物的藥物制劑，該刺五加提取物可以用來(lái)制備抗氧化的藥物。本發(fā)明通過(guò)對(duì)刺五加藥材蒸制處理，生成更多小極性的化合物，增強(qiáng)細(xì)胞膜通透性，具有抗氧化的作用。本發(fā)明提供的液相分析方法可以用于建立該提取物的指紋圖譜，用于控制不同產(chǎn)地、批次藥材制備的提取物的批間差異性。
【IPC分類】A61P39/06, A61K125/00, A61K36/254
【公開(kāi)號(hào)】CN105193887
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510571602
【發(fā)明人】劉高志
【申請(qǐng)人】劉高志
【公開(kāi)日】2015年12月30日
【申請(qǐng)日】2015年9月9日