EM)和透射電鏡(TEM)的觀察，另一半不作脫水處理，直接進(jìn)行納米壓痕檢測。
[0017]實施例2:
配備0.25 Μ氯化鈣(CaCl2)水溶液，0.15Μ磷酸氫二鈉(Na2HP04)水溶液，10 g/L聚丙烯酸(PAA)水溶液做合成實驗的母液。取2.4 mL Na2HP04母液和1.2 mL的PAA母液混合，二次蒸餾水稀釋，用1M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH至9.5±0.1，常溫攪拌0.5 h，總體積為30 mL。取2.4 mL 0&(:12母液加水稀釋至30 mL。用滴定管將30 mL鈣液30加入30 mL磷溶液，滴加過程中磁力攪拌器攪拌，0.1M NaOH溶液調(diào)控pH保持在9.5±0.5區(qū)間。最終，鈣離子濃度為10.0 mM，磷離子濃度為6.0 mM, PAA濃度為200 ug/mL。保證整個滴加過程持續(xù)25?30分鐘。收集無齲的離體牙，用慢速ISOMET鉆石切片機(jī)垂直于牙長軸先切除牙釉質(zhì)，再切取厚度為0.5?1mm的牙本質(zhì)片；然后用500 # -2000 #砂紙逐一打磨，大量二次蒸餾水清洗；將上述牙片放入質(zhì)量濃度為35%的磷酸中，10秒后取出，再次用大量的二次蒸餾水沖洗，得到脫礦層厚度在2?3微米范圍內(nèi)的脫礦牙本質(zhì)模型；取15 ml上述合成的無定形磷酸鈣顆粒溶液置于培養(yǎng)瓶中，將脫礦牙本質(zhì)模型置于無定形磷酸鈣顆粒溶液中；將上述培養(yǎng)瓶放在37.5 °(:恒溫箱中，分別于2、4天后取出。將再礦化的牙本質(zhì)樣本一分為二，一半用酒精梯度脫水的方式進(jìn)行干燥，做掃描電鏡(SEM)和透射電鏡(TEM)的觀察，另一半不作脫水處理，直接進(jìn)行納米壓痕檢測。
[0018]實施例3:
配備0.25M氯化鈣(CaCl2)水溶液，0.15M磷酸氫二鈉(Na2HP04)水溶液，10g/L聚丙烯酸(PAA)水溶液做合成實驗的母液。取2.4 mL Na2HP04母液和2.1 mL的PAA母液混合，二次蒸餾水稀釋，用1M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH至9.5±0.1，常溫攪拌0.5 h，總體積為30 mL。取2.4 mL CaC12母液加水稀釋至30 mL。用滴定管將30 mL鈣液30加入30 mL磷溶液，滴加過程中磁力攪拌器攪拌，0.1M NaOH溶液調(diào)控pH保持在9.5±0.5區(qū)間。鈣離子、磷離子最終濃度分別為10.0 mM和6.0 mMo最終，鈣離子濃度為10.0 mM，磷離子濃度為6.0 mM，PAA濃度為350 ug/mL。保證整個滴加過程持續(xù)25?30分鐘。收集無齲的離體牙，用慢速IS0MET鉆石切片機(jī)垂直于牙長軸先切除牙釉質(zhì)，再切取厚度為0.5?1mm的牙本質(zhì)片；然后用500 # -2000 #砂紙逐一打磨，大量二次蒸餾水清洗；將上述牙片放入質(zhì)量濃度為35%的磷酸中，10秒后取出，再次用大量的二次蒸餾水沖洗，得到脫礦層厚度在2?3微米范圍內(nèi)的脫礦牙本質(zhì)模型；取15ml上述合成的無定形磷酸鈣顆粒溶液置于培養(yǎng)瓶中，將脫礦牙本質(zhì)模型置于無定形磷酸鈣顆粒溶液中；將上述培養(yǎng)瓶放在37.5°C恒溫箱中，于7天后取出。將再礦化的牙本質(zhì)樣本一分為二，一半用酒精梯度脫水的方式進(jìn)行干燥，做掃描電鏡(SEM)和透射電鏡(TEM)的觀察，另一半不作脫水處理，直接進(jìn)行納米壓痕檢測。
[0019]實施例4:
配備0.25M氯化鈣(CaCl2)水溶液，0.15M磷酸氫二鈉(Na2HP04)水溶液，10g/L聚丙烯酸(PAA)水溶液做合成實驗的母液。取2.4 mL Na2HP04母液和2.1 mL的PAA母液、0.75 ml 400 mM Glu母液混合，二次蒸餾水稀釋，用1M NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH至9.5±0.1，常溫攪拌0.5 h，總體積為30 mL。取2.4 mL CaCl2母液加水稀釋至30 mL。用滴定管將30 mL鈣液30加入30 mL磷溶液，滴加過程中磁力攪拌器攪拌，0.1M NaOH溶液調(diào)控pH保持在9.5±0.5區(qū)間。鈣離子、磷離子最終濃度分別為10.0 mM和6.0禮。最終，鈣離子濃度為10.0 mM，磷離子濃度為6.0 mM，PAA濃度為350 ug/mL，Glu濃度為10mM。保證整個滴加過程持續(xù)25?30分鐘。收集無齲的離體牙，用慢速ISOMET鉆石切片機(jī)垂直于牙長軸先切除牙釉質(zhì)，再切取厚度為0.5?1mm的牙本質(zhì)片；然后用500 # -2000#砂紙逐一打磨，大量二次蒸餾水清洗；將上述牙片放入質(zhì)量濃度為35%的磷酸中，10秒后取出，再次用大量的二次蒸餾水沖洗，得到脫礦層厚度在2?3微米范圍內(nèi)的脫礦牙本質(zhì)模型；取15ml上述合成的無定形磷酸鈣顆粒溶液置于培養(yǎng)瓶中，將脫礦牙本質(zhì)模型置于無定形磷酸鈣顆粒溶液中；將上述培養(yǎng)瓶放在37.5°C恒溫箱中，于7天后取出。將再礦化的牙本質(zhì)樣本一分為二，一半用酒精梯度脫水的方式進(jìn)行干燥，做掃描電鏡(SEM)和透射電鏡(TEM)的觀察，另一半不作脫水處理，直接進(jìn)行納米壓痕檢測。
[0020]圖1為實施例1，2，3，4中脫礦牙本質(zhì)膠原的掃描電鏡(SEM)和透射電鏡(TEM)圖片。可以看出脫礦之后剩下膠原纖維網(wǎng)架，在透射電鏡成像中襯度低。
[0021]圖2及圖3 (a, b，c)為實施例1，2，3，中不同濃度聚丙烯酸調(diào)控下的不同無定形磷酸鈣修復(fù)脫礦牙本質(zhì)的掃描電鏡(SEM)圖片?？梢钥闯鲅辣举|(zhì)膠原基質(zhì)表面形成礦物層，單根膠原纖維得到礦化，膠原纖維仍然裸露。
[0022]圖3 (d, e, f)為350 ug/mL的聚丙稀酸與10 Mm Glu協(xié)同調(diào)控的無定形磷酸I丐修復(fù)脫礦牙本質(zhì)的掃描電鏡圖，可見脫礦牙本質(zhì)全層在兩天內(nèi)已完成了纖維內(nèi)礦化?？梢钥闯龅V化層礦物密度和礦物有序性與基底天然牙本質(zhì)相當(dāng)，脫礦牙本質(zhì)得到了良好的修復(fù)。
[0023]圖4為實施例3、4中350 ug/mL的聚丙烯酸、350 ug/mL的聚丙烯酸與10 Mm Glu調(diào)控合成的無定形磷酸鈣顆粒紅外(FTIR)及劈裂峰值譜圖。透射電鏡(TEM)圖片。350 ug/mL的聚丙烯酸與10 Mm Glu調(diào)控合成的無定形磷酸鈣顆粒在第二天時相變?yōu)榱u基磷灰石，而350 ug/mL的聚丙烯酸控合成的無定形磷酸鈣顆粒在第四天相變?yōu)榱u基磷灰石。
[0024]圖5為實施例1、2中50、200 ug/mL的聚丙烯酸調(diào)控合成的無定形磷酸鈣顆粒紅夕KFTIR)圖譜，和透射電鏡(TEM)圖片。可以看出無定形磷酸鈣顆粒在24小時已相變?yōu)榱u基磷灰石。
[0025]圖6為實施例3，4中350 ug/mL的聚丙稀酸調(diào)控合成的無定形磷酸I丐及350 ug/mL的聚丙烯酸與10 Mm Glu調(diào)控合成的無定形磷酸鈣顆粒修復(fù)脫礦牙本質(zhì)的納米壓痕圖片。350 ug/mL的聚丙稀酸與10 Mm Glu調(diào)控合成的無定形磷酸|丐顆粒礦化的脫礦牙本質(zhì)力學(xué)性能表現(xiàn)比脫礦牙本質(zhì)大幅加強(qiáng)，接近天然牙本質(zhì)。
【主權(quán)項】
1.一種快速修復(fù)脫礦牙本質(zhì)的方法，該方法首先合成無定形磷酸鈣顆粒，然后利用促礦化劑再礦化脫礦牙本質(zhì)，其特征在于: 所述的合成無定形磷酸鈣顆粒具體是: 用8?10 g/L聚丙稀酸作為無定形磷酸|丐的穩(wěn)定劑，400 mM谷氨酸溶液作為再礦化促進(jìn)劑；在36?38°C下，使用0.1?0.2 M、PH為9.5±0.1的磷酸氫二鈉水溶液和0.2?.0.3 Μ氯化鈣水溶液配成母液；采用50 ml注射器在30?40分鐘內(nèi)將氯化鈣水溶液按體積比1:1加入至磷酸氫二鈉水溶液中，反應(yīng)過程中采用磁力攪拌器攪拌，并使用0.1 Μ氫氧化鈉溶液調(diào)控pH保持在9.5±0.5區(qū)間；使得鈣離子最終濃度為9.0?11.0 mM，磷離子的最終濃度為5.0?7.0 mM，谷氨酸的最終濃度為10?100 Mm ;聚丙烯酸的最終濃度為.300?1000 Pg/mL ;最終合成直徑為15?20 nm的無定形磷酸I丐顆粒，該顆粒合成后以溶液形式貯存； 所述的再礦化脫礦牙本質(zhì)具體是: 步驟1.收集無齲的離體牙，采用渦輪機(jī)將牙釉質(zhì)磨除并在體式顯微鏡下檢查；慢速ISOMET鉆石切片機(jī)垂直于牙長軸，取厚度為0.45?1_的牙本質(zhì)片； 步驟2.將上述牙片放入質(zhì)量濃度為30?35%的磷酸中，酸蝕過程中磷酸用磁力攪拌子攪拌，10秒后取出，用大量的二次蒸餾水沖洗，得到脫礦層厚度在2?5微米范圍內(nèi)的脫礦牙本質(zhì)層； 步驟3.取20?50 ml上述合成的無定形磷酸鈣顆粒溶液置于樣品瓶中，將脫礦牙本質(zhì)置于含有無定形磷酸鈣顆粒溶液中，將培養(yǎng)瓶密封； 步驟4.將上述樣品瓶放在35?38 °(:恒溫箱中，于2天后取出。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種快速修復(fù)脫礦牙本質(zhì)的方法。現(xiàn)有修復(fù)脫礦牙本質(zhì)的方法是采用兩種牙本質(zhì)非膠原蛋白類似物，借助于波特蘭水門汀緩釋體系來實現(xiàn)的，但是這種方法裝置過于復(fù)雜，達(dá)到全層礦化所需的時間需4個月之久。本發(fā)明方法先用簡便易得的聚丙烯酸作為調(diào)節(jié)劑，以鈣離子和磷離子作為原料，合成15-20nm尺寸具有流動性的無定形磷酸鈣顆粒；然后利用谷氨酸作為礦化促進(jìn)劑于2天之內(nèi)再礦化脫礦的牙本質(zhì)，恢復(fù)了脫礦牙本質(zhì)天然的等級結(jié)構(gòu)，而再礦化后的牙本質(zhì)的力學(xué)性能也達(dá)到了與天然牙本質(zhì)相近的水平。本發(fā)明與現(xiàn)有再礦化技術(shù)相比，在達(dá)到同樣恢復(fù)等級結(jié)構(gòu)和力學(xué)性能的基礎(chǔ)上，裝置簡單，耗時短，更為有效的解決了再礦化脫礦牙本質(zhì)這一問題。
【IPC分類】A61K6/033
【公開號】CN105267046
【申請?zhí)枴緾N201510730463
【發(fā)明人】顧新華, 孫健, 陳怡 , 陳超群, 茅彩云, 王偉, 朱欣欣, 王晶, 王建明
【申請人】浙江大學(xué)
【公開日】2016年1月27日
【申請日】2015年11月2日