PN經(jīng)IV共同投予給患有乳癌的皮下異種移植裸鼠。每只小鼠的腫瘤生長至 150mm 3,以促進(jìn)DCPN傳遞。此外，將DCPN及對(duì)照組的一（G2NH2涂布PEG冠）預(yù)先與NIR染劑 (cy5.5)接觸，以利于在投予藥物后進(jìn)行實(shí)時(shí)追蹤。為利于比較，所有群組包括PBS、G 2NH2、 DCPN及順鉑均共同給予iRGD，以靜脈注射方式給予小鼠達(dá)四周。圖5D例示治療后腫瘤有一 明顯cy5.5訊號(hào)，顯示DCPN腫瘤標(biāo)靶性。該訊號(hào)在第1天注射后4小時(shí)后達(dá)到平線區(qū)，顯示CPN 的聚乙烯二醇化會(huì)促進(jìn)血液循環(huán)增加腫瘤吸收。相較于肺臟及心臟，cy5.5訊號(hào)在肝臟及脾 臟相當(dāng)?shù)匚⑷?，顯示PEG外套膜也會(huì)降低DCPN在肝臟中的累積。已知低代數(shù)的樹枝狀聚合物 (G2NH 2, n<5)可輕易地由排尿所排出。在此，在腫瘤及其他器官中的訊號(hào)會(huì)在第14天逐漸減 少，并集中在腎臟。直到第31天，腎臟中的訊號(hào)明顯地減少，顯示已被尿液排出。圖13例示不 同器官中（腦、心臟、肺臟、肝臟、胰臟及腎臟)殘余Pt的量少于15% (表二），顯示DCPN被排 出。在7天間隔/周經(jīng)由IV注射給予相同的劑量（16.6ymol/kg)，圖5E顯示相較于兩組對(duì)照組 (PBS&G 2NH2 )，DCPN及順鉑確實(shí)可以導(dǎo)致腫瘤委縮。而G2NH2單獨(dú)存在者涂布可裂解PEG冠亦 表現(xiàn)顯著的腫瘤標(biāo)靶功效（圖14)。不同于給予小鼠投以DCPN，在PN不存在的情形下，腫瘤的 生長不會(huì)被抑制。再者，我們也觀察在小鼠的副作用，相較于投予順鉑，投予DCPN并未顯著 減少小鼠的體重（圖5F)，亦未減少食物的攝?。▓D15)。四組連續(xù)的組織切片，包括對(duì)照組、 順鉑、G 2NH2及DCPN以蘇木紫及曙紅染劑(H&E)于終點(diǎn)染色，進(jìn)行組織學(xué)檢查，將切片進(jìn)行獨(dú) 立病理學(xué)檢查（圖16)。經(jīng)治療后，DCPN也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞壞死，其效應(yīng)類似順鉑。
[0134]表一及二分別例示活體內(nèi)實(shí)驗(yàn)所用Pt劑量及預(yù)估DCPN排出量:表一
[0136] 3順鉬分子量為301
[0137] b CPN分子量= G2NH2+lnm納米團(tuán)簇（35原子Pt)=3256+195X35 = 10,081
[0138] cDCPN分子量 = 8(PEG2KD)+G2NH2+l毫米納米團(tuán)簇（35原子Pt)=8X2000+3256+ 195X35 = 26,081
[0139] **CPN中游離Pt量=14.4ymol/kg X 35原子/lnm。因此，經(jīng)IT投藥的游離Pt量為504μ mol/kg〇
[0140] **DCPN中游離Pt量=16.6ymol/kg X 35原子/lnm。因此，經(jīng)IV投藥的游離Pt量為581 ymol/kg〇
[0141] 表二
[0143] 在器官中的累積量=A1+A2+A3+A4+A5+A 6 = 1029 · 8(yg) = 1 · 0928mg
[0144] ·_·〇〇ΡΝ=16·6μπιο1/1^;1ηπι = 35Ρ?原子;Pt MW=195;小鼠體重~20克；
[0145] ···游離 Ptb= 16.6ymol/kg X 35 = 581ymol/kg。
[0146] 581ymol/kgX 195 = 113.3mg/kg。
[0147] 113.3mg/kgX0.02kg = 2.27mg。
[0148] ·_·注射次數(shù)= 4··· 2 · 27mg X 4 = 9 · 06mg
[0149] 因此，殘余Pt = (I · 0928/9 · 06) X 100 % = 11 · 4%
[0150] ---------------------------
[0151] ND:未偵測到
[0152] 3以ICP-Mass測得該數(shù)值，如圖13所示。
[0153] |3在0?~及DCPN中游離Pt像相同，如表一所示。
[0154] ----------------------------------
[0155] 總之，以上所揭示的為特定設(shè)計(jì)的PN(即CPN)，其具有腫瘤內(nèi)活化特性，可將系統(tǒng) 性毒害最小化而用于抗癌化療。藉由限制Pt的大小至原子級(jí)（0.93±0.22nm直徑），以賦予 其在于納米級(jí)醫(yī)藥應(yīng)用上作為前藥極具吸引力的特性。特定言之，PN易于被氧化，使得其失 去內(nèi)因性化學(xué)鈍性，并獲得表面腐蝕性以至于進(jìn)一步在弱酸性胞器中，例如內(nèi)體及溶酶體， 溶解以釋放毒性Pt離子造成DNA鉬金化(DNA platination)。此途徑的關(guān)鍵即在于控制PN的 大小。因此，本發(fā)明提供一種新穎合成策略，其是基于籠住一特定幾何胺基至G 2NH2內(nèi)部。本 發(fā)明已證實(shí)CPN在活體內(nèi)顯著地抑制腫瘤生長，其將CPN以pH-可裂解PEG冠予以后修飾，并 混合腫瘤導(dǎo)向性肽，進(jìn)而在腫瘤內(nèi)進(jìn)行活化作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種雙重籠狀鉑金納米團(tuán)簇復(fù)合物，其包含： (a) 樹枝狀聚合物(dendrimer); (b) 包含鉑氧化物的鉑納米團(tuán)簇，該鉑納米團(tuán)簇被限制在該樹枝狀聚合物之內(nèi)；及 (c) 聚乙二醇(PEG)，其涂布于該樹枝狀聚合物的表面。2. 如權(quán)利要求1的復(fù)合物，其中該鉑氧化物選自由？切、？切!1、？切2、？1(^及其任何組合 的群組，其中X及y各自獨(dú)立為一大于0的整數(shù)。3. 如權(quán)利要求1的復(fù)合物，其中該樹枝狀聚合物是胺基終端樹枝狀聚合物。4. 如權(quán)利要求3的復(fù)合物，其中PEG透過希夫堿(Shiffbase)與該樹枝狀聚合物的一級(jí) 胺共輒。5. 如權(quán)利要求1的復(fù)合物，其中該復(fù)合物的表面包含對(duì)pH反應(yīng)的鍵結(jié)。6. 如權(quán)利要求1的復(fù)合物，其進(jìn)一步包含吸附在樹枝狀聚合物的表面上的腫瘤穿透肽。7. 如權(quán)利要求1的復(fù)合物，其中在pH小于5.0的條件下，該復(fù)合物表現(xiàn)釋放Pt2+、PtCl42_ 及/或PtClf離子的特征。8. 如權(quán)利要求3的復(fù)合物，其中在pH小于5.0的條件下，該鉑納米團(tuán)簇呈現(xiàn)溶解力。9. 如權(quán)利要求1的復(fù)合物，其中該納米團(tuán)簇具有小于1.3nm的平均大小。10. 如權(quán)利要求1的復(fù)合物，其中該樹枝狀聚合物選自由零代(G-0)、一代(G-1)、二代 (G-2)及三代(G-3)樹枝狀聚合物所組成的群組。11. 一種如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的雙重籠狀鉑納米團(tuán)簇復(fù)合物在制備抑制腫瘤細(xì) 胞生長的藥物中的用途。12. -種合成如權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的雙重籠狀鉑納米團(tuán)簇復(fù)合物的方法，其包 括： (a) 混合包含八面體六氯鉑酸鹽陰離子的第一溶液與包含胺基終端樹枝狀聚合物或羥 基終端樹枝狀聚合物的第二溶液，以形成包含PtCl621月離子/樹枝狀聚合物復(fù)合物的混合 物； (b) 培養(yǎng)該包含PtClf陰離子/樹枝狀聚合物復(fù)合物的混合物達(dá)一段足夠的時(shí)間； (C)還原該P(yáng)tcif陰離子/樹枝狀聚合物復(fù)合物中的PtCl，陰離子，以形成包含樹枝狀 聚合物籠狀鉑的納米團(tuán)簇復(fù)合物的混合物； (d) 將包含該樹枝狀聚合物籠狀鉑的納米團(tuán)簇復(fù)合物的混合物通過過濾器，以得到包 含該樹枝狀聚合物籠狀鉑的納米團(tuán)簇復(fù)合物的濾液； (e) 冷凍干燥該濾液以得到樹枝狀聚合物籠狀鉑的納米團(tuán)簇復(fù)合物； (f) 溶解該樹枝狀聚合物籠狀鉑的納米團(tuán)簇復(fù)合物于溶劑中以形成溶液； (g) 當(dāng)該樹枝狀聚合物為胺基終端，加入PEG-醛至該溶液中；或當(dāng)該樹枝狀聚合物為羥 基終端，加入PEG-NH2至該溶液中；及 (h) 使PEG-醛與該胺基終端樹枝狀聚合物的一級(jí)胺進(jìn)行反應(yīng);或使PEG-NH2與羥基終端 樹枝狀聚合物進(jìn)行反應(yīng)，并由此獲得該雙重籠狀鉑納米團(tuán)簇復(fù)合物。13. -種籠狀鉑納米團(tuán)簇復(fù)合物，其包含： (a) 胺基終端樹枝狀聚合物;及 (b) 包含鉑氧化物及具有平均直徑為0.93nm而標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.22nm的鉑納米團(tuán)簇，該鉑 納米團(tuán)簇被限制在該胺基端樹枝狀聚合物之內(nèi)。14. 一種合成如權(quán)利要求13的復(fù)合物的方法，其包括： (a) 混合包含八面體六氯鉑酸鹽陰離子的第一溶液與包含胺基終端樹枝狀聚合物或羥 基終端樹枝狀聚合物的第二溶液，以形成包含PtCl621月離子/樹枝狀聚合物復(fù)合物的混合 物； (b) 培養(yǎng)該包含PtClf陰離子/樹枝狀聚合物復(fù)合物的混合物達(dá)一段足夠的時(shí)間； (c) 還原該P(yáng)tClf陰離子/樹枝狀聚合物的復(fù)合物中的PtClf陰離子，以形成包含樹枝 狀聚合物籠狀鉑的納米團(tuán)簇復(fù)合物的混合物； (d) 將包含該樹枝狀聚合物籠狀鉑的納米團(tuán)簇復(fù)合物的混合物通過過濾器，以得到包 含該樹枝狀聚合物籠狀鉑的納米團(tuán)簇復(fù)合物的濾液;及 (e) 冷凍干燥該濾液以得到樹枝狀聚合物籠狀鉑的納米團(tuán)簇復(fù)合物。15.如權(quán)利要求12或14的方法，其中該還原步驟藉由微波輻射進(jìn)行。16. 如權(quán)利要求12或14的方法，其中該培養(yǎng)步驟在室溫下過夜培養(yǎng)進(jìn)行。17.如權(quán)利要求12或14的方法，其中步驟(e)進(jìn)一步包括純化樹枝狀聚合物籠狀鉑納米 團(tuán)簇復(fù)合物，其藉由自其中移除多余的PtClf而進(jìn)行。18.如權(quán)利要求1至10及13中任一項(xiàng)的復(fù)合物，其中該樹枝狀聚合物是聚酰胺-胺 (PAMAM)樹枝狀聚合物。19.如權(quán)利要求1至10及13中任一項(xiàng)的復(fù)合物，其不含六氯鉑酸鹽和/或四氯鉑酸鹽陰 離子。20. 如權(quán)利要求1至10及13中任一項(xiàng)的復(fù)合物，其中該復(fù)合物對(duì)癌細(xì)胞呈現(xiàn)細(xì)胞毒性。
【專利摘要】本發(fā)明揭示一種籠狀鉑金納米團(tuán)簇復(fù)合物。該復(fù)合物包含(a)胺基終端樹枝狀聚合物；及(b)包含鉑氧化物的鉑納米團(tuán)簇，該鉑納米團(tuán)簇限制在該胺基終端樹枝狀聚合物之內(nèi)。本發(fā)明復(fù)合物對(duì)癌細(xì)胞表現(xiàn)細(xì)胞毒性。本發(fā)明另揭示一種雙重籠狀鉑金納米團(tuán)簇復(fù)合物，其包含在樹枝狀聚合物的籠狀鉑納米團(tuán)簇復(fù)合物的表面涂布的聚乙二醇(PEG)。該雙重籠狀鉑納米團(tuán)簇復(fù)合物在其表面具有pH-敏感鍵結(jié)。本發(fā)明亦揭示這些復(fù)合物的制備方法及其用途。
【IPC分類】A61K33/24, A61K9/16
【公開號(hào)】CN105451721
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480012173
【發(fā)明人】林淑宜
【申請(qǐng)人】財(cái)團(tuán)法人衛(wèi)生研究院
【公開日】2016年3月30日
【申請(qǐng)日】2014年2月18日
【公告號(hào)】CA2901050A1, EP2958553A2, US9095616, US20140234413, WO2014130429A2, WO2014130429A3