用于癌癥治療的激酶抑制劑的制作方法
【專(zhuān)利說(shuō)明】用于癌癥治療的激酶抑制劑 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明通常設(shè)及用于癌癥治療的激酶抑制劑。具體地，本發(fā)明設(shè)及氨基乙臘衍生 物(AAD)在癌癥治療中的用途。
[0002] 發(fā)明背景
[0003] 氨基乙臘衍生物(AAD)為一類(lèi)有效針對(duì)耐藥性線蟲(chóng)的腸驅(qū)蟲(chóng)劑。線蟲(chóng)、或咖蟲(chóng)，包 括大量人和家畜的病原體。胃腸道線蟲(chóng)，諸如搶轉(zhuǎn)血矛線蟲(chóng)化aemonchus contortus)為反 當(dāng)動(dòng)物的主要寄生蟲(chóng)，引起全世界牲畜生產(chǎn)大量的經(jīng)濟(jì)損失。
[0004] 莫奈太爾(Mon邱antel，MPL)(N-[ (IS)-I-氯基-2-(5-氯基-2-S氣甲基-苯氧基)-1-甲基-乙基]-4-S氣甲基硫烷基-苯甲酯胺)為此類(lèi)AAD的實(shí)例，并且已被認(rèn)可為用于羊胃 腸道寄生蟲(chóng)治療的殺線蟲(chóng)劑。
[0006] M化已顯示有效的抗各種種類(lèi)的牲畜病原性線蟲(chóng)。
[0007] 作為殺線蟲(chóng)劑，MI^L影響配體口控性離子通道，導(dǎo)致神經(jīng)肌肉突觸處的信號(hào)傳導(dǎo)干 擾。然后，受影響的寄生蟲(chóng)將經(jīng)受肌肉收縮失調(diào)，麻搏，壞死和蟻皮缺陷。已鑒定出=個(gè)煙堿 樣乙酷膽堿受體(nA化R)相關(guān)的基因?yàn)镸I^L的主要祀標(biāo)，并且所有運(yùn)S個(gè)基因編碼只存在于 線蟲(chóng)中的代表nA化R亞基的DEG-3亞族的蛋白。DEG-3基因編碼nA化Ra-亞基，其與第二跨膜 結(jié)構(gòu)域中的07-亞基相似。
[000引目前令人驚奇地發(fā)現(xiàn)AAD在癌癥治療中也有效。過(guò)去50年期間醫(yī)學(xué)中最大的挑戰(zhàn) 之一為鑒定有效地殺死腫瘤細(xì)胞而不傷害正常組織的藥物。幾乎所有已知種類(lèi)的抗癌藥物 的副作用譜實(shí)質(zhì)性限制了醫(yī)師治療癌癥患者的能力，特別是在經(jīng)常發(fā)展到藥物耐藥時(shí)的晚 期。盡管已知其他腸驅(qū)蟲(chóng)的藥物諸如苯并咪挫在控制癌癥細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)展中有效的，但 是通式（I)的化合物，諸如MPL，令人驚奇的抗癌活性和低毒性允許更為靈活的用于伴有有 限副作用的癌癥治療劑量方案。
[0009] 發(fā)明概述
[0010] 根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供了用于治療一種或多種癌癥的方法，所述方法包括 向有需要的患者給予治療有效量的通式(I)的化合物：
[0012]或其代謝物，藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥，其中 [001 ；3 ] Ri、R2、R哺R日各自獨(dú)立地選自H、烷基、面素、-肌或-CN;
[0014] R4和R6各自獨(dú)立地選自H、烷基、面素、烷氧基、-CF3、-0CF3、-SO2CF3、-S0CF3或-S- 肌；
[001引 X為雜原子，N(烷基)或NH; W及
[0016] n為1-20。
[0017] 優(yōu)選地，Ri為-CN、H或面素。更優(yōu)選地，Ri為-CN。優(yōu)選地，R2為H或面素。更優(yōu)選地，R 2 為H。優(yōu)選地，R3為-CF3或面素。更優(yōu)選地，R3為-CF3。優(yōu)選地，R4為-S-CF3、-S0CF3、-SO2CF3、-0CF3或-CF3。更優(yōu)選地，R 4為-S-CF3或-SO2CF3。優(yōu)選地，R5為H。優(yōu)選地，X為0。優(yōu)選地，n為1-15、1 -10、1 -5、1 -2或1。更優(yōu)選地，n為1。優(yōu)選地，R4被安排在酷胺部分的對(duì)位。
[0018] 通式（I)的化合物可為(R)-對(duì)映體或（S)-對(duì)映體或外消旋體。優(yōu)選地，通式（I)的 化合物為(S)-對(duì)映體。
[0019] 優(yōu)選地，通式(I)的化合物選自下列化合物中的任何一個(gè)：
[0022] 其中W上化合物的每一個(gè)為(R)-對(duì)映體或(S)-對(duì)映體，或外消旋體，或其代謝物、 藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
[0023] 優(yōu)選地，通式（I)的化合物為MPL(N-[ (IS)-I-氯基-2-(5-氯基-2-S氣甲基-苯氧 基)-1-甲基-乙基]-4-S氣甲基硫烷基-苯甲酯胺）：
[0025]或其代謝物、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
[00%] 優(yōu)選地，通式（1)的化合物為莫奈太爾諷(111〇]169日]11618111地〇]16，]\^心502):
[0028] 或其代謝物、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
[0029] 還優(yōu)選地，通式(I)的化合物選自下列化合物中的任何一個(gè)：
[0032] 或其代謝物、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥。
[0033] 優(yōu)選地，癌癥與激酶有關(guān)。
[0034] 優(yōu)選地，激酶為周期蛋白依賴(lài)性激酶，并且更優(yōu)選地，C化2或C化4。
[0035] 優(yōu)選地，與激酶有關(guān)的癌癥選自W下：惡性腫瘤，包括膀脫癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、間 皮瘤、腎癌、肝癌、包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌的肺癌、頭頸癌、食道癌、膽囊癌、卵巢 癌、膜腺癌、胃癌、子宮頸癌、甲狀腺癌、前列腺癌和包括鱗狀細(xì)胞癌的皮膚癌;淋己系的造 血腫瘤，包括白血病、急性淋己細(xì)胞性白血病、急性成淋己細(xì)胞性白血病、B細(xì)胞淋己瘤、T細(xì) 胞淋己瘤、霍奇金氏淋己瘤、非霍奇金氏淋己瘤、毛細(xì)胞淋己瘤、套細(xì)胞淋己瘤、骨髓瘤和伯 克特氏淋己瘤;骨髓系造血腫瘤，包括急性和慢性髓細(xì)胞性白血病，骨髓增生異常綜合征和 前髓細(xì)胞白血?。婚g葉細(xì)胞源的腫瘤，包括脂肪肉瘤、GIST、纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤；中樞和 周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)的腫瘤，包括星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、膠質(zhì)瘤和神經(jīng)銷(xiāo)瘤；W及其他腫瘤， 包括黑色素瘤、精原細(xì)胞瘤、崎胎瘤、成骨肉瘤、著色性干皮病、角化棘皮瘤、甲狀腺濾泡癌 和卡波濟(jì)氏肉瘤。
[0036] 優(yōu)選地，待被治療的癌癥選自卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌或間皮瘤，并且最優(yōu)選地， 待被治療的癌癥為卵巢癌。
[0037] 在本發(fā)明的第二方面，提供了通式（I)的化合物或其代謝物、藥學(xué)上可接受的鹽、 溶劑化物或前藥在制備用于治療一種或多種與激酶有關(guān)的癌癥的藥物中的用途：
[0039] 其中
[0040] Ri、R2、R哺R5各自獨(dú)立地選自H、烷基、面素、-肌或-CN;
[0041 ] R4和R6各自獨(dú)立地選自H、烷基、面素、烷氧基、-CF3、-0CF3、-S02-C的、-SO-C的或-S-?。?br>[00創(chuàng) X為雜原子、N(烷基)或NH; W及
[0043] n 為 1-20。
[0044] 在本發(fā)明的第=方面，提供了用于治療一種或多種與激酶有關(guān)的癌癥的通式（I) 的化合物或其代謝物，藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥：
[0046] 其中
[0047] Ri、R2、R哺R5各自獨(dú)立地選自H、烷基、面素、-肌或-CN;
[004引 R4和R6各自獨(dú)立地選自H、烷基、面素、烷氧基、-CF3、-0CF3、-S02-C的、-SO-C的或-S-肌；
[00例 X為雜原子、N(烷基)或NH; W及 [0050] n 為 1-20。
【附圖說(shuō)明】
[0化1] 圖1顯示了通過(guò)MI^L抑制細(xì)胞增殖。在1?1^0、1、5、10、25、50和100^11〇1/1)存在的情 況下，培養(yǎng)卵巢癌細(xì)胞系〇VCAR-3、A2780和SK0V-3W及正常的HUVEC(對(duì)照)72小時(shí)。使用SRB 測(cè)定評(píng)估MI^L對(duì)細(xì)胞增殖的影響。對(duì)照(媒介處理的）細(xì)胞呈現(xiàn)100%增殖而MI^L處理組表示 成對(duì)照的百分比。每一藥物濃度都W-式四份地測(cè)試并且每一試驗(yàn)重復(fù)至少兩次。數(shù)據(jù)(均 數(shù)±561)表示為對(duì)照的百分比。為了統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，使用學(xué)生的t檢驗(yàn)將每一藥物處理組與對(duì) 照組進(jìn)行比較。
[0化2] 圖2顯示了 MPL對(duì)0VCAR-3細(xì)胞的集落形成活性的影響。用MPL(0、5、10和25曲lol/L) 解育細(xì)胞72小時(shí)之后，洗涂細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到瓊脂平板，與它們的常規(guī)生長(zhǎng)介質(zhì)一起培養(yǎng)并且在 標(biāo)準(zhǔn)的條件下解育2周。然后用100%甲醇固定細(xì)胞并且用1%結(jié)晶紫染色。顯微鏡下(放大 率5倍)計(jì)數(shù)集落(大于50個(gè)的細(xì)胞簇）。不同試驗(yàn)組計(jì)數(shù)的集落數(shù)表示為對(duì)照的百分比。 [0化 3]圖3顯示了 MPL如何干擾卵巢癌細(xì)胞系的細(xì)胞周期分布。用MPL(0、5、10和25皿Ol/ L)處理0VCAR-3(圖3a)或A2780(圖3b)細(xì)胞48小時(shí)。使用流式細(xì)胞術(shù)分析艦化丙晚染色的細(xì) 胞的DNA含量。結(jié)果（見(jiàn)表)顯示為G1、S和G2/M期細(xì)胞的百分比。每一數(shù)值代表2個(gè)獨(dú)立的試 驗(yàn)的均數(shù)±561。
[0054]圖4顯示了 MPL如何干擾細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白C化2、(xlk4W及細(xì)胞周期蛋白E和A的表 達(dá)。用MPL(0、5、10和25WH01/L)處理細(xì)胞48小時(shí)。獲取全蛋白提取物并且通過(guò)電泳分離和用 指示的抗體探測(cè)免疫印跡。使用相關(guān)的抗體分析顯示了在每一提取物中運(yùn)些蛋白的水平的 蛋白質(zhì)印跡。圖像代表掃描的暴露的放射線照片。管家基因(GAPDH)用于確認(rèn)相似的蛋白上 樣和印跡轉(zhuǎn)移。
[0055] 圖5顯示了 M化處理的細(xì)胞中PARP和裂解的PARP的免疫印跡分析。用不同濃度的 MPL[0、5、10、25咖]解育在細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)下生長(zhǎng)的0VCAR-3與A2780細(xì)胞24、48或72小時(shí)。然 后制備細(xì)胞裂解物并且通過(guò)蛋白質(zhì)印跡分析用于測(cè)定PARP和裂解的PARP。
[0化6] 圖6顯示了用M化處理A2780卵巢癌細(xì)胞或用MPkS02處理U87膠質(zhì)瘤導(dǎo)致空泡的形 成，運(yùn)提示M化和MPkS02在運(yùn)些細(xì)胞中誘導(dǎo)自體吞隧。
[0化7] 圖7，與圖6中所示的一致，顯示了 M化處理降低了 ADP/ATP的細(xì)胞比率，運(yùn)是細(xì)胞自 體吞隧的另一指示。
[0化引圖8顯示了 MPL干擾細(xì)胞活力。A)暴露于MPL(0、5、10、25iiM)72小時(shí)的0VCAR-3細(xì)胞 的顯微鏡圖像。在MPL (0、5、10、2貼HO 1 /L)存在的情況下培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞系0VCAR-3、 A2780、SK0V-3、IGR0V-172小時(shí)。使用標(biāo)準(zhǔn)的臺(tái)吩藍(lán)測(cè)定評(píng)估M化對(duì)細(xì)胞活力的影響。對(duì)照 (媒介處理的）細(xì)胞呈現(xiàn)100%活力而M化處理組表示成對(duì)照的百分比。W-式四份地測(cè)試每 一藥物濃度并且每一試驗(yàn)重復(fù)至少兩次。數(shù)據(jù)(均數(shù)±SEM)表示為對(duì)照的％。為了統(tǒng)計(jì)學(xué)比 較，使用學(xué)生的t檢驗(yàn)將每一藥物處理組與對(duì)照組進(jìn)行比較并且0.5或更小的P值被認(rèn)為是 呈現(xiàn)了顯著的變化(P<0.5)，* = <0.05，**<0.Ol，*** = !)<0.001。
[0059] 圖9顯示了 MPL對(duì)正常細(xì)胞活力的影響并且顯示了 MPL的抗增殖效應(yīng)為癌細(xì)胞指向 的。在]\0^1^0、5、10、25皿〇1/1)存在的情況下培養(yǎng)正常細(xì)胞冊(cè)沈、(：冊(cè)、肥1(和冊(cè)￥60 72小時(shí)。 使用標(biāo)準(zhǔn)的臺(tái)吩藍(lán)測(cè)定評(píng)估MI^L對(duì)細(xì)胞活力的影響。結(jié)果顯示為與對(duì)照（100%)比較的均數(shù) ±沈]?。
[0060] 圖10顯示了M化如何抑制細(xì)胞增殖。在MP L(0、5、10、25、50和100皿ol/L)存在的情 況下培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞系〇VCAR-3、A2780和SK0V-3和IGR0V-172小時(shí)。使用SRB測(cè)定評(píng)估MPL 對(duì)細(xì)胞增殖的影響。對(duì)照(媒介處理的）細(xì)胞呈現(xiàn)100%增殖而MI^L處理組表示成對(duì)照的百分 比。W-式四份地測(cè)試每一藥物濃度并且每一試驗(yàn)重復(fù)至少兩次。數(shù)據(jù)(均數(shù)±SEM)表示為 對(duì)照的％。為了統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，使用學(xué)生的