0015] 本復合光合菌服中含有沙氏外硫紅螺菌；細胞球形，直徑1. 2-3微米，一般為1. 5 微米，單個細胞通常被一層粘的芙膜包住，常見有雙球形聚合體，四聯(lián)體和不規(guī)則的堆，它 們通常被粘液層所包圍。厭氧的光能自養(yǎng)菌：有果糖、甘油或有機酸時所有菌株都能在微好 氧到好氧的黑暗條件下生長。光合電子供體；硫化物，硫代硫酸鹽，硫和分子氨。可光合同 化醋酸鹽、果糖、延胡索酸鹽、甘油、蘋果酸鹽、丙麗酸和玻巧酸鹽。大多數(shù)菌株具有同化型 硫酸鹽還原作用。沙氏外硫紅螺菌生活在光線能及的滯水和污泥中，尤其是在含硫化物豐 富的環(huán)境中。25-3(TC、1000-30001ux或更強的光照，PH值7. 0-7. 5的厭氧環(huán)境最適合該 菌的生長和氧化作用，在偏離最適條件下，沙氏外硫紅螺菌也有較大的適應范圍，10-4(TC、 500-60001UX和P冊-9,均能適應生長，在微好氧黑暗狀態(tài)下也能生存，條件不適時，該菌的 生長處于抑制狀態(tài)，一旦條件允許，又能繼續(xù)生長。
[0016] 本復合光合菌服含有纖細紅螺菌，光能自養(yǎng)(有分子氨)，光能異養(yǎng)，兼性好氧，能 生長在有光厭氧或黑暗微好氧到好氧。最適PH ;6. 6-7. 4,在25-35C生長良好，不需要生 長因子，在有復雜有機營養(yǎng)或酵母膏時，可增加生長速度。光同化的有機底物；己酸鹽、精 氨酸、下酸鹽、已酸鹽、辛酸鹽、酪蛋白氨基酸、甲酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、壬酸鹽、丙酸鹽、 丙麗酸、玻巧酸、戊酸鹽。不利用：巧樣酸鹽、己醇、甘油、丙二酸鹽、糖類和糖醇類、硫代硫酸 鹽。W下的物質可W抑制生長；苯甲酸鹽、環(huán)已焼、駿酸鹽、甲酸鹽、果糖、己二醇鹽、甲醇、天 冬氨酸鹽和硫化物。纖細紅螺菌具有較強的降解氨氮，固氮能力，W及具有較強的降解農(nóng)藥 殘留的能力，該與燕淑海報道的相一致。
[0017] 本發(fā)明的紫硫光合細菌一沙氏外硫紅螺菌與紫色非硫光合細菌--纖細紅螺菌是 從全國各地100多處池塘底泥，河涌底泥，豬糞水處理池，污水處理廠，光合細菌樣品，垃圾 處理濾池中分離得到的500多株光合細菌中篩選出來的，沙氏外硫紅螺菌對硫化氨降解效 率明顯，0. 2克/升的硫化氨含量經(jīng)過24小時后即可全部降解，可快速促進硫元素在±壤的 物質流動，并且具有較明顯的固氮，促進植物生長的作用。纖細紅螺菌具有較強的農(nóng)藥殘留 降解能力與固氮能力，且能夠與該沙氏外硫紅螺菌共生共存，互相促進生長。該復合光合細 菌服的各級培養(yǎng)基是經(jīng)過多年的優(yōu)化試驗得到的，特別是其發(fā)酵培養(yǎng)基，是考察了 40多種 光合細菌培養(yǎng)基成份中篩選出來的，并充分考慮到了各個培養(yǎng)基成份相互影響，采用正交 試驗進行多次優(yōu)化培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件，優(yōu)化后培養(yǎng)總菌數(shù)超過50億C化/ml,沙氏外硫紅螺 菌的濃度超過25億C化/ml,遠遠高于現(xiàn)有沙氏外硫紅螺菌的培養(yǎng)濃度。
[0018] 采用上述技術方案的有益效果；本發(fā)明沙氏外硫紅螺菌種子培養(yǎng)基采用的半固體 含硫化軸的培養(yǎng)基，能盡快使期形成無氧環(huán)境，從而能夠快速促進沙氏外硫紅螺菌的生長， 而發(fā)酵培養(yǎng)基中用硫代硫酸軸代替硫化軸，并W流加的方式加入，W減少光合菌液中的硫 代硫酸軸對纖細紅螺菌的抑制作用。將兩種菌種接入發(fā)酵培養(yǎng)基的后，前期由于纖細紅螺 菌的前期延滯期短，在酵母膏等營養(yǎng)物質的刺激下快速繁殖，經(jīng)過兩至H天的生長，菌含量 已經(jīng)達到較高濃度，而沙氏外硫紅螺菌經(jīng)過兩至H天的延滯期，在纖細紅螺菌的某些產(chǎn)物 的刺激下，特別是流加入硫代硫代硫酸軸后，沙氏外硫紅螺菌也在后期快速繁殖起來。從而 可達到兩種菌體濃度較高的復合型的光合菌制劑。該兩種菌都能在微好氧到好氧的條件下 進行生長與存活，可作為葉面服與根服施用都可。
[0019] 本發(fā)明的復合光合菌服既含有紅螺菌科中繁殖速度較快的纖細紅螺菌，也含有著 色菌科中降解硫化氨能力較強的的沙氏外硫紅螺菌，在紅螺菌科(紫色非硫細菌）中的纖細 紅螺菌的存在下，沙氏外硫紅螺菌(著色菌科）生長速度快，菌體含量高，培養(yǎng)時間短，從而 形成一種菌含量高，兼具兩類光合細菌(紅螺菌科與著色菌科）的復合光合細菌服的制備方 法。
[0020] 下面結合試驗說明本發(fā)明復合光合菌服的田間效果。
[0021] 一、復合光合菌服在煙草上的應用效果 1. 試驗地點；湖南省隆回縣灘頭鎮(zhèn)龍竹村某農(nóng)戶種植地 2. 試驗方法；烤煙品種；中煙99-10-1，烤煙移栽苗時，用復合光合菌服500倍液灌根 一次；緩苗后20天用復合光合菌服250倍液噴施第一次，然后連續(xù)每隔20天噴施第二次和 第H次(總共每畝用復合光合菌服4公斤)。對照區(qū)在每次試驗區(qū)用菌服250倍液噴施的同 時，用同樣用量的清水噴灑； 3.試驗結果： 施用復合光合菌服后，株高、莖圍、節(jié)距、有效葉數(shù)、最大葉面積均大于噴施清水的對 照，說明可W有效改善煙株的農(nóng)藝性狀，促進煙株健壯生長。施用的煙株發(fā)病率和發(fā)病程度 顯著降低，可W有效提高煙株的抗病性； 表1復合光合菌服對煙草產(chǎn)量產(chǎn)值增收效果
【主權項】
1. 一種復合光合菌肥的制備方法，其特征在于：采用著色菌科中的沙氏外硫紅螺菌菌 種與紅螺菌科中的纖細紅螺菌按以下步驟進行培養(yǎng)： 沙氏外硫紅螺菌半固體種子活化培養(yǎng)：將沙氏外硫紅螺菌種穿刺在半固體沙氏外硫紅 螺菌培養(yǎng)基中，25-30°C光照培養(yǎng)7-10天，待穿刺的菌線變紅并長出菌苔，即可為活化的沙 氏外硫紅螺菌種； 纖細紅螺菌平板活化：將纖細紅螺菌菌種在平板上劃線活化，溫度25-35°C活化培養(yǎng) 3-5天，挑取大個菌落作為活化種子； 沙氏外硫紅螺菌種子培養(yǎng)：將活化的菌種接種至沙氏外硫紅螺菌種子液體培養(yǎng) 基中，溫度25-35 °C，光照強度為：1000-30001UX，光照厭氧培養(yǎng)7-10天，檢測種子的 0D660彡1. 2,活菌數(shù)彡6億cfu/ml即為種子培養(yǎng)液； 纖細紅螺菌種子培養(yǎng)：將挑取大個纖細紅螺菌菌落作為活化種子接種到纖細紅螺菌種 子培養(yǎng)基中，溫度25-35°C，光照強度為：1000-30001ux，光照靜置培養(yǎng)3-5天，檢測種子的 0D660彡0. 8,活菌數(shù)彡4億cfu/ml即為種子培養(yǎng)液； 發(fā)酵培養(yǎng)：將沙氏外硫紅螺菌種子培養(yǎng)液與發(fā)酵培養(yǎng)基以1 :3_1 :5的接種量接種，同 時將纖細紅螺菌種子培養(yǎng)液與發(fā)酵培養(yǎng)基按I :6-1 :10的接種量接入，在光照培養(yǎng)罐中厭 氧培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25-35°C，光照強度為：1000-40001ux，攪拌速度為120轉/分鐘，待培養(yǎng) 至第三天，開始流加300 g/L的硫代硫酸鈉溶液至發(fā)酵培養(yǎng)基硫代硫酸鈉的濃度至1-3 g/ L，繼續(xù)培養(yǎng)3-5天，待檢測其0D660彡6,活菌數(shù)彡50億cfu/ml，其中沙氏外硫紅螺菌不低 于25億cfu/ml，纖細紅螺菌不低于20億cfu/ml，即可放罐，灌裝，包裝成品。
2. 根據(jù)權利要求1所述的復合光合菌肥的制備方法，其特征在于所述的半固體沙氏外 硫紅螺菌培養(yǎng)基為：氯化銨0. 4-1. 2g/L，磷酸二氫鉀0. 5-lg/L，二水氯化鈣0. 05-0. 2g/L， 氯化鎂0. 1-0. 5g/L，蘋果酸鈉2-10 g/L，醋酸鈉 l-3g/L，九水硫化鈉0. 1-lg/L，瓊脂8-10g/ L，氯化鈉0. 5-4g/L，121°C滅菌15分鐘，用醋酸調PH至7. 0-7. 2,其中九水硫化鈉先配制 成0. lg/mL單獨滅菌。
3. 根據(jù)權利要求1所述的復合光合菌肥的制備方法，其特征在于所述的沙氏外硫紅螺 菌種子液體培養(yǎng)基為：氯化銨〇. 4-1. 2g/L，磷酸二氫鉀0. 5-lg/L，二水氯化鈣0. 05-0. 2g/ L，氯化鎂0. 1-0. 5g/L，蘋果酸鈉2-10 g/L，醋酸鈉 l-3g/L，九水硫化鈉0. 1-lg/L，氯化鈉 0. 5-4g/L，121°C滅菌15分鐘，用醋酸調PH至7. 0-7. 2,其中九水硫化鈉先配制成0. lg/mL 單獨滅菌。
4. 根據(jù)權利要求1所述的復合光合菌肥的制備方法，其特征在于所述的纖細紅螺菌種 子液體培養(yǎng)基為：氯化銨〇. 8-1. 2g/L，磷酸二氫鉀0. 5-lg/L，二水氯化鈣0. 05-0. 2g/L， 氯化鎂0. 1-0. 5g/L，蘋果酸鈉2-10 g/L，醋酸鈉 l-3g/L，氯化鈉 l-2g/L，酵母膏0. 2-lg/L ，121 °C滅菌15分鐘，用滅菌醋酸調PH至7. 0-7. 2。
5. 根據(jù)權利要求1所述的復合光合菌肥的制備方法，其特征在于所述的纖細紅螺菌平 板固體培養(yǎng)基為種子液體培養(yǎng)基加入20 g/L的瓊脂形成的。
6. 根據(jù)權利要求1所述的復合光合菌肥的制備方法，其特征在于所述的發(fā)酵培養(yǎng)基： 氯化銨I. 2g/L，磷酸二氫鉀0. 8g/L，二水氯化鈣0. lg/L，氯化鎂0. 3g/L，蘋果酸鈉4g/L，醋 酸鈉88/1，酵母膏0.48/1，氯化鈉18/1，1211：滅菌15分鐘，用蘋果酸調？!1至6.8-7.0。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種復合光合菌肥的制備方法。采用著色菌科中的沙氏外硫紅螺菌菌種與紅螺菌科中的纖細紅螺菌菌種經(jīng)種子活化培養(yǎng)，種子培養(yǎng)，厭氧發(fā)酵罐光照培養(yǎng)等培養(yǎng)步驟，得到沙氏外硫紅螺菌與纖細紅螺菌的高濃度復合光合菌肥，該復合光合菌肥可以起到防病，施肥，降解藥殘，修復土壤，用量少，見效快，效果穩(wěn)定的作用。本發(fā)明提供了一種沙氏外硫紅螺菌與纖細紅螺菌兩種菌混合培養(yǎng)，生長速度快，菌體含量高，培養(yǎng)時間短的復合光合細菌肥的制備方法。
【IPC分類】C12N1-20, C12R1-01, C05F11-08
【公開號】CN104671853
【申請?zhí)枴緾N201510095217
【發(fā)明人】胡艷暉
【申請人】胡艷暉
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2015年3月4日